關(guān)于食品中亞硝酸鹽測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍的探討

楊 凱，郝夢(mèng)甄

（1.平邑縣檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東平邑 273300；2.萊西市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東萊西 266600）

亞硝酸鹽是一種常用的食品添加劑，主要起到防腐保鮮、提高熟肉制品的色澤和延長(zhǎng)腌制食品保質(zhì)期的作用，在腌臘肉制品類、西式火腿、醬鹵肉制品和肉灌腸類等食品中常被使用[1-2]。但食用過(guò)量的亞硝酸鹽會(huì)引起中毒甚至導(dǎo)致死亡，研究表明成人攝入0.2～0.5 g即可引起中毒，3 g即可致人死亡[3]。很多食品企業(yè)以及食品小作坊生產(chǎn)者對(duì)亞硝酸鹽的使用量沒有正確的認(rèn)識(shí)，因此加強(qiáng)食品中亞硝酸鹽含量的檢測(cè)十分重要。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中分光光度法測(cè)定食品亞硝酸鹽含量使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍窄，檢測(cè)亞硝酸鹽含量高的食品時(shí)會(huì)超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，只能通過(guò)稀釋原樣品的濃度再次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，這會(huì)造成實(shí)驗(yàn)效率低下，浪費(fèi)實(shí)驗(yàn)試劑。因此，本文采用增大吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積和提高標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩種方法擴(kuò)大標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，驗(yàn)證兩種方法的可行性，以提高工作效率，減少試劑的浪費(fèi)。

1 國(guó)標(biāo)中分光光度法測(cè)定食品中亞硝酸鹽存在的不足

1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍窄

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5 μg·mL-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大吸取體積是2.5 mL，按照稱樣質(zhì)量5.0 g計(jì)算，得到該標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)的亞硝酸鹽含量為12.5 mg·kg-1[4]。但《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）中規(guī)定，腌臘肉制品類、醬鹵肉制品和肉灌腸類等的亞硝酸鹽限量為30 mg·kg-1，西式火腿的亞硝酸鹽限量為70 mg·kg-1，該標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍不能滿足日常食品中亞硝酸鹽含量的檢測(cè)[5]。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度值偏低

物質(zhì)吸光的定量依據(jù)為朗伯-比爾定律：A=kcL，當(dāng)吸光度A=0.434時(shí)，吸光度測(cè)量誤差最小[6]。如果要求測(cè)量誤差小于5%，則吸光度值A(chǔ)=0.050～1.500；測(cè)量誤差小于2%，則吸光度值A(chǔ)=0.155～0.950[6]。但《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)對(duì)應(yīng)的吸光度值為0、0.012、0.027、0.039、0.054、0.069、0.104、0.141和 0.173， 表 明亞硝酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)曲線不在最佳線性范圍內(nèi)，這將造成較大實(shí)驗(yàn)誤差。

2 材料與方法

2.1 試劑與儀器

亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg·mL-1，北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院，編號(hào)：BWZ6967-2016）；乙酸鋅；對(duì)氨基苯磺酸；亞鐵氰化鉀；硼酸鈉；鹽酸萘乙二胺。

分光光度計(jì)（TU-1810）；分析天平（FA2004）；電熱恒溫水浴鍋（LKTC-B1）。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 國(guó)標(biāo)法

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度 （ρNaNO2）=5.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL 和2.50 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。于各管中分別依次加入對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液，加水至50 mL刻度，混勻，靜置15 min，用1 cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[4]。

2.2.2 改進(jìn)法一

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度 （ρNaNO2）=5.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL、12.00 mL和14.00 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液加入順序、加入量、混勻后靜置時(shí)間以及測(cè)量波長(zhǎng)等條件均與2.2.1國(guó)標(biāo)法完全相同。

2.2.3 改進(jìn)法二

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度 （ρNaNO2）=25.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.20 mL、1.60 mL、2.00 mL、2.40 mL 和2.80 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液加入順序、加入量、混勻后靜置時(shí)間以及測(cè)量波長(zhǎng)等條件均與2.2.1國(guó)標(biāo)法完全相同。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中亞硝酸鈉的質(zhì)量（μg），縱坐標(biāo)為對(duì)應(yīng)的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1和圖2所示。國(guó)標(biāo)法的線性方程為y=0.014x-0.001 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6；改進(jìn)法一的線性方程為y=0.012 5x+0.013 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0；改進(jìn)法二的線性方程為y=0.012 6x+0.013 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0。通過(guò)相關(guān)系數(shù)可以看出，國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一、改進(jìn)法二線性關(guān)系良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。

圖1 國(guó)標(biāo)法亞硝酸鈉的質(zhì)量與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

圖2 改進(jìn)法一和改進(jìn)法二亞硝酸鈉的質(zhì)量與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3.2 回收率的測(cè)定

隨機(jī)取一實(shí)驗(yàn)用樣品，用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測(cè)得樣品中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)，下同）的質(zhì)量分別為1.893 μg、1.872 μg、和1.889 μg。取上述實(shí)驗(yàn)用樣品，加入3種不同亞硝酸鹽含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二對(duì)每個(gè)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)重復(fù)測(cè)量7次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

由表1、表2、表3可知，國(guó)標(biāo)法測(cè)得回收率為89.0%～99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.53%～2.56%；改進(jìn)法一測(cè)得回收率為88.9%～96.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.38%～2.56%；改進(jìn)法二測(cè)得回收率為88.5%～96.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～3.02%。結(jié)果表明，改進(jìn)法一和改進(jìn)法二的加標(biāo)回收率均符合要求，數(shù)據(jù)穩(wěn)定性好。

表1 國(guó)標(biāo)法回收率的測(cè)定

表2 改進(jìn)法一回收率的測(cè)定

表3 改進(jìn)法二回收率的測(cè)定

3.3 準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

將不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液使用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別重復(fù)測(cè)量7次，比較所測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度。由表4、表5可知，國(guó)標(biāo)法測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-3.32%～2.55%，精密度為1.55%～3.60%；改進(jìn)法一測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-2.90%～2.58%，精密度為0.73%～2.27%；改進(jìn)法二測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-2.13%～2.06%，精密度為0.69%～2.55%。結(jié)果表明，改進(jìn)法一和改進(jìn)法二的準(zhǔn)確度、精密度均符合要求。

表4 國(guó)標(biāo)法準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

表5 改進(jìn)法一、改進(jìn)法二準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

3.4 國(guó)標(biāo)法和改進(jìn)法的顯著性檢驗(yàn)

用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別對(duì)某實(shí)驗(yàn)樣品中亞硝酸鹽含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表6。所測(cè)得的數(shù)據(jù)用軟件SPSS 21.0進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，計(jì)算顯示，國(guó)標(biāo)法與改進(jìn)法一的P值為0.594＞0.05；國(guó)標(biāo)法與改進(jìn)法二的P值為0.301＞0.05。結(jié)果表明，與國(guó)標(biāo)法相比較，改進(jìn)法一、改進(jìn)法二所測(cè)得數(shù)據(jù)無(wú)顯著性差異，符合要求。

表6 3種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果

4 結(jié)論與討論

本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)將《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）測(cè)定食品中亞硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍擴(kuò)大，以滿足實(shí)驗(yàn)室的日常使用。結(jié)果顯示，改進(jìn)法一、改進(jìn)法二與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異，且改進(jìn)法一、改進(jìn)法二的準(zhǔn)確度、精密度、回收率均符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）的要求[7]。因此，可通過(guò)增大吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積或提高標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的方法擴(kuò)大標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍，從而提高工作效率，減少試劑的浪費(fèi)。