超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量方法優(yōu)化

李啟卉，孫鈺瑩，錢 琪

（國家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測南京站，江蘇南京 211816）

磺胺類藥物是目前被廣泛應(yīng)用于畜禽抗感染治療的重要藥物之一，具有高效、毒性低、便于使用等特點，可預(yù)防和治療一些動物疾病，以促進動物的生長。但若在飼養(yǎng)畜禽過程中不合理使用磺胺類藥物，會導(dǎo)致藥物在畜禽體內(nèi)殘留，進而對人體產(chǎn)生一定的危害[1-2]。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有高特異性、良好的檢測靈敏度和分析速度快的特點[3]。碰撞反應(yīng)池的工作原理是產(chǎn)物離子通過向移動的母離子施加額外能量，使母離子與反應(yīng)池中的惰性氣體分子發(fā)生碰撞，導(dǎo)致母離子碎裂。因此，形成的產(chǎn)物離子數(shù)與碰撞能量大小密切相關(guān)。碰撞能量越小，碎片越多，離子越少，形成的產(chǎn)物離子越少；碰撞能量越大，更多的母離子被碎片化，但并非所有的子離子都會更多。由于碰撞能量不同，母離子會碎裂成不同的子離子，碰撞能量越高，碎片離子越多，使其分裂成其他質(zhì)量數(shù)較低的產(chǎn)物離子。設(shè)置MRM使用模式獲取方法時，需要設(shè)置一個最優(yōu)的碰撞能量，使碰撞池中質(zhì)量數(shù)為265的母離子在裂解后形成質(zhì)量數(shù)為156和172的子離子數(shù)量最多。本文通過改變碰撞能量，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量進行快速測定。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

乙腈（色譜級）；甲酸（色譜級）；乙腈（默克）；超純水（北京普析-GWA-UN1-F40）；磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品（壇墨公司）。

1.2 儀器

Waters Xevo TQ-S cronos超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（沃特世公司）；離心機（上海安亭-GL-20G-Ⅱ）；BSA124S-CW 電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；渦旋儀（其林貝爾儀器-Vortex QL-861）；BFAA-DC24-RT加熱氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）；移液器（艾本德中國有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

準(zhǔn)確吸取100 μL磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇配制成濃度為1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1 000 μL 和 2 000 μL 于10 mL容量瓶中，用含0.1%甲酸的乙腈溶液稀釋至刻度，配制成濃度為 1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和 200 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品前處理

稱取5 g搗碎的樣品于50 mL離心管中，加入10 mL 乙腈，渦旋 3 min，10 000 r·min-1離心3 min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，重復(fù)提取，合并上清液，用乙腈定容至刻度。取5 mL上清液，氮吹近干，用2 mL 0.1%酸化乙腈復(fù)溶，過 0.22 μm 濾膜。

1.5 儀器條件

液相條件：ACQUITY UPLC? HSS T3色譜柱；柱溫40 ℃；梯度洗脫程序如表1所示。

表1 梯度洗脫條件程序

質(zhì)譜條件：電噴霧正電離、多反應(yīng)監(jiān)測模式；毛細管電壓0.5 kV；脫溶劑溫度500 ℃；脫溶劑氣流量800 L·h-1；錐孔氣流量 150 L·h-1；錐孔電壓 30 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的確定

HSS T3色譜柱為親水性化合物保留專用柱，不僅可增強待測物的保留能力，還可與LC-MS兼容，可耐受100%水相流動相，分離重現(xiàn)性較好。T3是采用三官能團鍵合技術(shù)，低配基密度C18烷基鏈鍵合和專利的封端技術(shù)，T3對C18色譜柱的穩(wěn)定性有了更好的提升。

2.2 液相條件的確定

乙腈為非質(zhì)子溶劑、強洗脫劑，低粘度，截止波長為190 nm。在正離子電噴霧液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析流動相中添加甲酸，可使溶液中的分析物質(zhì)離子化，產(chǎn)生更強的電噴霧信號。流動相使用梯度洗脫能增加峰容量，可增強待測物的分離效果，且能縮小峰型，增強分離能力，更有效地縮短分析時間。

2.3 質(zhì)譜條件的確定

電噴霧電離是液體從導(dǎo)電毛細管噴出，毛細管加高電壓，從而產(chǎn)生帶電液滴的噴霧，液滴蒸發(fā)、分裂直至離子蒸發(fā)稱氣相離子。正離子噴霧是電噴霧液滴從毛細管出來時帶正電荷，為了平衡正電流，毛細管也生成了電子，由靠近毛細管壁表面的負離子發(fā)生電化學(xué)氧化，產(chǎn)生電子，電噴霧可被理解成電化學(xué)過程。由圖1可知，碰撞能量在15 V下，磺胺甲基嘧啶物質(zhì)的響應(yīng)最高，峰面積最大。

圖1 不同碰撞能量下雞肉中磺胺甲基嘧啶色譜圖

2.4 方法線性范圍及定量限

當(dāng)雞肉樣品量為5 g、最終定容體積為10 mL時，根據(jù)定量限為10倍信噪比，從而確定本方法中磺胺甲基嘧啶的定量限為1.0 μg·kg-1。制作好系列標(biāo)準(zhǔn)曲線后，按此方法進行測定，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性圖譜如圖2所示。結(jié)果表明，磺胺甲基嘧啶在濃度1～200 ng·mL-1，與峰面積有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2＞0.99。

圖2 雞肉中磺胺甲基嘧啶校準(zhǔn)曲線

2.5 方法加標(biāo)回收率

選擇3個陰性雞肉樣品，添加70 μg·kg-1的磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)物，按照本實驗前處理方法進行實驗。通過改變碰撞能量測定樣品中磺胺甲基嘧啶的含量。磺胺類藥物的回收率如表2所示。

表2 不同碰撞能量下樣品回收率

當(dāng)碰撞能量為5 V時，回收率為70.5%～75.0%；當(dāng)碰撞能量為15 V時，回收率為93.3%～99.1%；當(dāng)碰撞能量為40 V時，回收率為77.9%～79.2%；當(dāng)碰撞能量為50 V時，回收率為81.7%～84.9%。由此可得出，在其他條件不變時，不同碰撞能量下，樣品回收率也不同，在碰撞能量為15 V時，回收率最好。

3 結(jié)論

本實驗通過改變質(zhì)譜條件，運用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量。結(jié)果表明，雞肉中磺胺甲基嘧啶在1～200 ng·mL-1線性良好，定量限為1.0 μg·kg-1。通過改變碰撞能量，得出雞肉樣品在碰撞能量為15 V時，回收率最好，為93.3%～99.1%。由此可得出，在其他條件不變時，當(dāng)碰撞能量為15 V時，雞肉中磺胺甲基嘧啶響應(yīng)最好。本方法前處理較為簡單，定量限較低，適用于雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量的快速測定[4-5]。