CAMK1及SPHK1在胰腺癌組織中的表達及與臨床病理特征和預后的關系

李梅桂 黃國定 劉海劍 曾業平 陳其珠

海南西部中心醫院腫瘤內科，儋州 571799

【提要】 回顧性分析105例行手術切除且經病理確診的胰腺癌患者的臨床資料，探討胰腺癌組織CAMK1、SPHK1的表達與臨床病理特征及預后的關系。結果顯示，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1均呈高表達，其高表達組的臨床分期，遠處轉移及脈管浸潤與低表達組比較，差異均有統計學意義，且高表達與患者的總生存期短有關，是影響胰腺癌患者預后的生物學指標。

研究表明，鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶1(calcium/calmodulin-dependent protein kinase 1，CAMK1)作為具有重要生理功能的蛋白激酶，在消化道腫瘤中異常表達，且與腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移等生物學特性顯著相關，有望作為胰腺癌預后判斷的潛在標志物[1]。鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1，SPHK1)是一種促進腫瘤轉移和侵襲的癌基因，調控包括抑制細胞凋亡、促進細胞增殖和血管生成等多種生物學過程，在腫瘤發生、發展中起到關鍵作用，可能為胰腺癌的診療提供重要的信息[2]。但CAMK1、SPHK1在胰腺癌中的表達及其臨床意義尚未清楚。本研究通過分析CAMK1、SPHK1在胰腺癌組織中的表達情況，探討它們與臨床病理特征的關系及其對胰腺癌患者預后判斷的價值。

一、資料與方法

1．一般資料 ：選取2017年1月至2020年12月間海南西部中心醫院行手術治療且經病理確診的原發性胰腺癌患者105例。納入標準為(1)胰腺癌的診斷符合《胰腺癌綜合診治指南》(2018年版)[3]；(2)首次確診并接受手術治療。排除標準為(1)合并其他惡性腫瘤及嚴重疾病；(2)確診時已接受過其他治療；(3)隨訪過程中不配合，資料不齊全者。記錄患者的性別、年齡及腫瘤大小、部位、組織學類型、臨床分期、分化程度、是否轉移等。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意。

2．胰腺癌組織CAMK1及SPHK1表達檢測：術中分別采集患者的癌組織及癌旁正常胰腺組織標本置入甲醛溶液中固定，石蠟包埋并制備病理切片，使用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(SP)法檢測并進行染色。兔抗人多克隆抗體CAMK1及SPHK1均購自北京博奧森生物有限公司。結果判定標準參考文獻[4-5]，CAMK1、SPHK1蛋白陽性細胞以胞質出現棕黃色的顆粒樣著色為準，按陽性細胞數的比例計分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；按染色強度計分：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩者相乘得到最終得分，<4分為低表達，≥4分為高表達。采用電話或門診就診等方式進行隨訪，隨訪截止時間為2021年7月，總生存率為自確診第1天至患者死亡的時間。

3．統計學處理：采用SPSS22.0軟件進行數據分析。計數資料以例(%)表示，組間比較采用χ2檢驗。單因素生存分析應用Kaplan-Meier法，組間比較行Log-rank檢驗，多因素生存分析應用COX回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

1．臨床資料：105例患者中，男性64例，女性41例，年齡37～71(58.6±7.9)歲。胰腺導管腺癌95例，其他亞型腫瘤10例；腫瘤位于胰頭69例，胰體20例，胰尾16例；Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期74例；低分化43例，中分化45例，高分化17例；遠處轉移60例，無遠處轉移45例。

2．胰腺癌及癌旁組織CAMK1、SPHK1蛋白表達：與癌旁正常胰腺組織比較，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1蛋白均呈高表達，差異有統計學意義。105例胰腺癌中，CAMK1高表達68例，低表達37例；SPHK1高表達72例，低表達33例(表1)。

表1 胰腺癌及癌旁正常胰腺組織CAMK1和SPHK1蛋白表達情況[例(%)]

3．CAMK1、SPHK1蛋白表達水平與胰腺癌臨床病理特征的關系： CAMK1、SPHK1高表達組的臨床分期、遠處轉移及脈管浸潤與CAMK1、SPHK1低表達組比較，差異均有統計學意義(表2)。

表2 CAMK1、SPHK1蛋白表達水平與胰腺癌患者臨床病理特征的關系[例(%)]

4．CAMK1、SPHK1蛋白表達水平與胰腺癌患者總生存率的關系： 105例患者的隨訪時間為7～39個月，中位隨訪時間為21個月。生存分析結果顯示，CAMK1高表達患者總生存率明顯低于CAMK1低表達患者，SPHK1高表達患者總生存率也明顯低于SPHK1低表達患者，差異均有統計學意義(χ2值分別為14.53、12.37，P值均<0.001；圖1、圖2 )。

注：CAMK1為鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶1圖1 CAMK1高表達與低表達的胰腺癌患者總生存率比較

注：SPHK1為鞘氨醇激酶1圖2 SPHK1高表達與低表達的胰腺癌患者總生存率比較

5．CAMK1、SPHK1蛋白表達水平與胰腺癌患者預后的關系：單因素分析結果顯示，臨床分期、遠處轉移、脈管浸潤、CAMK1及SPHK1表達水平是影響胰腺癌患者預后的危險因素。多因素COX回歸分析結果顯示，Ⅲ～Ⅳ期(HR=1.774，95%CI1.306～4.105)、遠處轉移(HR=1.975，95%CI1.618～4.690)、CAMK1高表達(HR=3.764，95%CI2.948～7.793)及SPHK1高表達(HR=2.513，95%CI1.985～5.427)是影響胰腺癌患者預后的獨立危險因素(表3)。

表3 影響胰腺癌患者預后因素的單因素及多因素回歸分析

討論CAMK1具有調節細胞生長及調控各種細胞功能信號通路的作用，與腫瘤侵襲和轉移密切相關，在癌細胞增殖、分化和凋亡中起關鍵的調節作用[6]。Hu等[7]研究發現，CAMK1作為致癌因子，在惡性腫瘤中異常表達；同時作為潛在治療靶點，可為惡性腫瘤治療提供新的思路。SPHK1是一種調節細胞內鞘脂代謝的激活酶，可促進腫瘤細胞的分化、增殖和轉移，同時可刺激血管新生和淋巴管生成，在惡性腫瘤的進展及預后中發揮重要的作用[8]。Park等[9]研究認為，SPHK1作為促進腫瘤轉移和侵襲的癌基因，在結腸癌中明顯上調，其高表達可抑制化療藥物對腫瘤細胞的效果，對結腸癌的治療及預后判斷有一定的指導作用。因此，推測CAMK1、SPHK1有望作為胰腺癌預后判斷以及療效監測的潛在標志物。

本研究結果顯示，胰腺癌組織CAMK1、SPHK1陽性高表達率均明顯高于正常胰腺組織，提示CAMK1、SPHK1在胰腺癌患者中存在高表達，可能參與胰腺癌的發病過程。Yuza等[10]研究發現，SPHK1表達水平在胰腺癌組織中明顯高于非癌組織，SPHK1通過刺激癌細胞增殖促進胰腺癌的進展，可能是胰腺癌治療的一個潛在手段。以往的研究表明，SPHK1表達與結腸癌的臨床分期、遠處轉移及脈管浸潤的發生顯著相關，其高表達對患者的總生存率有極大影響，可能是結腸癌患者潛在的預后生物標志物和治療靶點[11]。本研究發現Ⅲ～Ⅳ期、遠處轉移及脈管浸潤的胰腺癌患者CAMK1、SPHK1呈高表達；Ⅲ～Ⅳ期、遠處轉移是影響胰腺癌患者預后的獨立危險因素。其中Ⅲ～Ⅳ期患者預后不良的發生風險是Ⅰ～Ⅱ期患者的1.774倍，有遠處轉移的患者預后不良的發生風險是無遠處轉移患者的1.975倍，可見臨床分期和遠處轉移對胰腺癌患者的預后影響極大。Liu等[12]研究認為，臨床分期對胰腺癌患者的預后有重要影響(HR=2.091，95%CI1.060～4.125)，在實際工作中應注意此類人群的危險分層。Shi等[13]認為，遠處轉移是影響胰腺癌患者預后的獨立預測因子(HR=2.893，95%CI1.334～3.893)，對患者預后判斷有一定幫助。此外，本研究發現CAMK1、SPHK1高表達與患者的生存期短有關，且CAMK1及SPHK1呈高表達對胰腺癌患者的預后影響極大，是預測胰腺癌患者預后不良的重要標志物。Yu等[14]研究表明，SPHK1主要參與細胞外基質介導的細胞增殖、侵襲及轉移，其高表達與胰腺癌患者的總生存期短顯著相關，可作為判斷胰腺癌預后的重要指標。另有研究表明，CAMK1高表達與患者的總生存率降低有關，在胰腺癌患者的病情進展中發揮作用，可作為胰腺癌患者預后判斷的生物學指標[15]。由此可見影響胰腺癌患者預后的因素是多方面的，僅依靠臨床病理特征或影像學檢查不能做出準確判斷，應多方面綜合考慮，尤其是CAMK1、SPHK1在胰腺癌中應用價值。

綜上所述，胰腺癌組織中CAMK1、SPHK1呈高表達，其高表達是影響胰腺癌患者預后的獨立危險因素，對指導胰腺癌患者預后判斷具有較好的幫助。但本研究病例來源較單一，缺乏大樣本多中心的前瞻性研究，未來仍需更多的臨床研究進一步證實。

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