甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達與患者臨床病理特征及預后的關系

張選紅，吳紅燕，孔穎

甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達與患者臨床病理特征及預后的關系

張選紅1，吳紅燕2，孔穎1

1 廬江縣中醫院病理科，安徽廬江 231500；2 廬江縣中醫院骨一科

探討甲狀腺乳頭狀癌組織中尾型同源盒轉錄因子2（CDX-2）、肝細胞核因子4α（HNF-4α）表達水平與患者臨床病理特征及預后的關系。選取手術切除的102例份甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織標本，采用免疫組織化學染色法檢測組織中CDX-2、HNF-4α表達；比較甲狀腺乳頭狀癌組織與癌旁組織CDX-2、HNF-4α表達差異，觀察甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達與臨床病理特征的關系，分析CDX-2、HNF-4α表達對甲狀腺乳頭狀癌患者預后的影響。結果CDX-2、HNF-4α在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率分別為39.22%、41.18%，在癌旁組織中的陽性表達率分別為64.71%、66.6%，甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α陽性表達率均低于癌旁組織（均<0.05）。不同TNM分期、有無淋巴結轉移甲狀腺乳頭狀癌患者癌組織中CDX-2、HNF-4α表達有統計學差異（均<0.05）。CDX-2陽性表達、HNF-4α陽性表達患者5年生存率均高于陰性表達患者（均<0.05）。相關分析顯示，甲狀腺乳頭狀癌患者5年生存率與TNM分期、淋巴結轉移、CDX-2表達、HNF-4α表達有關（均<0.05）。甲狀腺乳頭狀癌組織中CDX-2、HNF-4α表達均降低，其表達水平與TNM分期、淋巴結轉移有關；CDX-2、HNF-4α表達可作為評估甲狀腺乳頭狀癌患者預后的有效指標。

甲狀腺腫瘤；尾型同源盒轉錄因子2；肝細胞核因子4α；臨床病理特征；預后

甲狀腺乳頭狀癌是較常見的一種甲狀腺惡性腫瘤，多發生于女性、兒童，臨床惡性程度低，大部分患者治療效果良好。但是，也有少部分患者因癌細胞發生轉移和擴散導致預后不理想［1］。研究顯示，甲狀腺乳頭狀癌的發生、發展及預后與多種分子蛋白相關［2］。尾型同源盒轉錄因子2（CDX-2）作為腸上皮特異性的轉錄因子，在腸上皮細胞正常發育分化和癌組織發生發展過程中起關鍵作用［3］；肝細胞核因子4α（HNF-4α）屬于細胞核受體超家族成員，在肝細胞的增殖、分化中發揮重要作用［4］；肝癌組織中HNF-4α表達下調，并與疾病發生、發展密切相關［5］。目前，關于CDX-2、HNF-4α與甲狀腺乳頭狀癌關系的尚不清楚。因此，本研究對甲狀腺乳頭狀癌組織中CDX-2、HNF-4α表達水平及與患者臨床病理特征的關系進行了探討。

1 資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年6月—2017年6月在本院確診并進行手術切除的甲狀腺乳頭狀癌患者102例，男42例，女60例；年齡（50.69 ± 7.44）歲，其中≥50歲48例、<50歲54例。納入標準：①均符合甲狀腺乳頭狀癌的相關診斷標準［7］，并經病理檢查確診；②首發甲狀腺乳頭狀癌，且均接受手術治療；③對本研究知情同意已簽署知情同意書。排除標準：①伴有重要臟器功能障礙疾病者；②合并其他腫瘤者；③合并其他內分泌系統功能障礙者；④妊娠期及哺乳特殊人群；⑤臨床資料不全或無法完全配合本研究者。根據美國癌癥聯合委員會甲狀腺癌分期系統（第8版）TNM分期標準［6］，TNM分期Ⅰ、Ⅱ期65例，Ⅲ、Ⅳ期37例；無脈管侵犯62例，有脈管侵犯40例；無淋巴結轉移63例，有淋巴結轉移39例；腫瘤長徑≥1 cm 55例，腫瘤長徑<1 cm 47例；腫瘤單發68例，腫瘤多發34例。本研究獲得醫院醫學倫理委員會批準實施（倫理批準文號為ZC202017-1211）。

1.2CDX-2、HNF-4α檢測采用免疫組織化學染色法。取手術切除甲狀腺乳頭狀癌患者癌組織、癌旁組織標本，常規脫水、石蠟包埋、4 μm連續切片以及二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化；隨后經3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶10 min，檸檬酸鹽緩沖液修復抗原，冷卻后滴加5%山羊血清封閉30 min。加入一抗（北京中杉金橋生物技術有限公司的鼠抗人CDX-2單克隆抗體）4 ℃孵育過夜，PBS漂洗3次（每次3 min）；加入二抗（北京中杉金橋生物技術有限公司的兔抗HNF-4α單克隆抗體）37 ℃孵育30 min，PBS漂洗3次（每次3 min）；使用DAB顯色、蘇木素復染、梯度乙醇脫水以及樹脂膠封片。以 PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，一切操作均嚴格按照SP試劑盒說明書進行。

1.3檢測結果判定本研究檢測結果判定由兩位高年資病理醫師采用雙盲法共同完成。CDX-2、HNF-4α陽性表達分別定位于細胞核、細胞膜或細胞核中，呈棕黃色或棕褐色。切片在400倍光學顯微鏡下觀察并采集圖像信息，每個切片隨機選擇5個視野，最終按照陽性細胞染色強度、陽性細胞百分比進行評分［8］。陽性細胞染色強度評分：無色為0分、淺黃色為1分、棕色為2分、深褐色為3分。陽性細胞占總細胞百分比評分：<5%為0分、5%～25%為1分、>25%～50%為2分、>50%～75%為3分、>75%為4分。最終得分為陽性細胞百分比評分和染色強度評分的乘積，其中得分≥4為陽性表達，<4為陰性表達。

1.4出院隨訪本研究所有患者以術后出院為觀察點，采用電話、門診復診等方式隨訪5年，隨訪至2022年6月30日。

1.5統計學方法采用SPSS 23.0統計軟件。計數資料以例數或百分比表示，組間比較采用χ檢驗；采用單因素、多因素分析影響甲狀腺乳頭狀癌患者預后的相關因素。0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1甲狀腺乳頭狀癌組織、癌旁組織CDX-2、HNF-4α表達甲狀腺乳頭狀癌組織、癌旁組織CDX-2、HNF-4α陽性表達率比較差異均有統計學意義（均<0.05）。見表1。

表1　甲狀腺乳頭狀癌組織、癌旁組織CDX-2、HNF-4α表達比較［例（%）］

2.2甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達與病理特征的關系不同性別、年齡、脈管侵犯、腫瘤大小、腫瘤個數患者甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達比較差異均無統計學意義（均>0.05），不同腫瘤TNM分期、有無淋巴結轉移患者甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達比較差異均有統計學意義（均<0.05）。見表2。

表2　甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α表達與患者病理特征的關系（例）

2.3甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2、HNF-4α不同表達患者生存率比較102例甲狀腺乳頭狀癌患者出院后隨訪5年，5年總生存率為50.98%（52/102）。CDX-2陽性表達組、陰性表達患者5年生存率分別為75.00%（30/40）、35.48%（22/62），CDX-2陽性表達患者5年生存率高于陰性表達患者（<0.05）；HNF-4α陽性表達、陰性表達患者5年生存率分別為78.57%（33/42）、31.67%（19/60），HNF-4α陽性表達患者5年生存率高于陰性表達患者（<0.05）。

2.4影響甲狀腺乳頭狀癌患者預后的因素單因素分析顯示，甲狀腺乳頭狀癌5年生存率與患者TNM分期、淋巴結轉移、CDX-2表達、HNF-4α表達有關（均<0.05）。見表3。Cox多因素回歸分析顯示，TNM 分期、淋巴結轉移、CDX-2陰性表達、HNF-4α陰性表達均為影響甲狀腺乳頭狀癌病預后的獨立危險因素（<0.05）。見表4。

表3　甲狀腺乳頭狀癌預后單因素分析［例（%）］

表4　甲狀腺乳頭狀癌患者預后Cox多因素回歸分析

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是常見內的分泌惡性腫瘤之一，在所有甲狀腺惡性腫瘤中占比為85%［9］。最新流行病學調查顯示，近年來我國甲狀腺乳頭狀癌發病率有持續增高趨勢，已成為影響社會群體健康的重大公共衛生問題［10］。因此，探尋早期診斷手段和影響預后因子在對臨床治療至關重要。

既往研究認為，甲狀腺乳頭狀癌發生、發展及預后與多種分子蛋白相關［11］。CDX-2是新發現的腸上皮細胞特異性轉錄因子，屬于轉錄調控蛋白的家族成員之一，在多種消化道疾病的發生中起關鍵作用［12］。CDX-2在直腸癌組織中陽性表達率降低，并與腫瘤組織是否發生淋巴結轉移、TNM分期及浸潤深度有關［13］。本研究顯示，CDX-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達率低于癌旁組織，不同腫瘤TNM分期、有無淋巴結轉移患者甲狀腺乳頭狀癌組織CDX-2表達比較差異有統計學意義。說明甲狀腺乳頭狀癌發生可能與CDX-2有關，患者CDX-2表達下調對甲狀腺乳頭狀癌發生有促進作用。既往研究顯示，CDX2陰性表達結直腸腺癌患者術后生存時間更短［14］。CDX2下調不僅促進腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移能力增加，同時導致基因調控異常，引發腫瘤發生［15］，本研究顯示，CDX-2陽性表達患者5年生存率高于陰性表達患者，說明CDX-2不同表達水平與甲狀腺乳頭狀癌患者預后相關。CDX-2表達可影響甲狀腺乳頭狀癌的發展以及預后，可作為臨床評估疾病發生、發展及預后的有效指標，CDX-2陰性表達是影響甲狀腺乳頭狀癌患者預后的獨立危險因素。

HNF-4α是調節肝臟內特異性基因表達的轉錄因子，與肝臟疾病的發生密切相關［16］。既往有研究發現，HNF-4α在肝癌組織中低表達，且與病理分期呈正相關［17］；HNF-4α具有抑制腫瘤細胞增殖，促進腫瘤細胞分化、凋亡等作用［18］；HNF-4α具有較強的抗腫瘤作用，腫瘤組織HNF-4α表達增強可使惡性腫瘤的轉移、侵襲力降低［19］。本研究顯示，HNF-4α在甲狀腺乳頭狀癌組織中陽性表達率低于癌旁組織，且HNF-4α表達水平與甲狀腺乳頭狀癌TNM分期、淋巴結轉移有關。臨床隨訪發現，HNF-4α陽性表達患者5年生存率高于陰性表達患者，說明HNF-4α表達水平與預后密切相關。相關分析顯示，HNF-4α陰性表達是影響甲狀腺乳頭狀癌病預后的獨立危險因素，HNF-4α表達下調或功能缺失可使甲狀腺乳頭狀癌細胞分化、遷移、侵襲能力增強，進而影響患者病情進程。

綜上所述，甲狀腺乳頭狀癌組織中CDX-2、HNF-4α表達水平均降低，其表達水平與TNM分期、淋巴結轉移有關；CDX-2、HNF-4α表達可作為評估甲狀腺乳頭狀癌患者預后的有效指標。

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（2022-07-07）

10.3969/j.issn.1002-266X.2022.28.014

R736.1

A

1002-266X（2022）28-0059-04