屏邊三七總皂苷的活血化瘀及鎮痛作用評價研究

陸春美,崔秀明

(1.紅河衛生職業學院，云南 紅河 661100；2.云南省三七資源可持續利用重點實驗室，云南 昆明 650550；3.云南省三七研究院，云南 昆明 650550)

血瘀作為諸多臨床疾病的表征之一，通常表現出有腫塊、疼痛、瘀青斑等現象。在中醫里關于其誘因有“因寒生凝、因凝而生瘀”“陽氣虛衰所致脈道拘急”“行不暢致血瘀”“性情暴怒而致氣血運行不暢”，終成氣滯寒凝血瘀體質等說法?，F代科學實驗研究進一步證實了血瘀與血液循環障礙有不可分割的關聯性。研究已證實三七總皂苷具有顯著的活血化瘀作用，能預防血栓動脈硬化[1]。屏邊三七具有一定的藥用價值，其功效和三七接近[2]。在云南的屏邊縣、文山馬關和麻栗坡及靠近越南北方一帶，流傳民間有用屏邊三七治療跌打損傷及強筋健骨的習慣[3],但尚未載入中國藥典，至今未能大量開發應用?；诖?，本研究對屏邊三七皂苷進行活血化瘀及鎮痛效應初步評價，為屏邊三七在治療外傷包扎、跌打損傷等方面的藥用價值評價提供一定的科學依據，也為日后開發外傷用藥提供一定的理論基礎。

1 材料

1.1 實驗動物

屏障環境(SPF級)雌性SD大鼠，體質量170～200 g，由浙江省實驗動物中心提供，許可證號為SCXK(浙)2018-0033。

屏障環境(SPF級)昆明小鼠，雌雄各半，體質量17～22 g，由湖南省長沙市天勤生物技術公司提供,動物許可證號為SCXK(湘)2014-0011。

1.2 實驗藥品

鹽酸腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司，規格：1 mL/mg)；烏拉坦(百奧萊博生物有限公司，規格：51-79-6,試劑級)；凝血四項檢測試劑盒(賽科希德科技有限公司，規格：2 mL×6支)；云南白藥粉(云南白藥集團股份有限公司，規格:4 g/瓶)；0.6%冰醋酸(天津市風船化學試劑有限公司，規格：500 mL/瓶)。

1.3 主要設備儀器

電子天平，型號：CP114,上海奧豪斯儀器有限公司;萬能高速粉碎機，型號：FLB-200，上海菲力博食品機械公司;超聲清洗儀，型號：BL10-2506 上海比朗儀器有限公司;旋蒸器，型號：RE-5205，上海亞榮生化儀器廠;紫外分光光度計，型號：UV-2000，日本津島公司;電熱干燥箱，型號：DGG-9123AD，上海森信實驗儀器公司;離心設備，型號：TD25-WS，湖南湘儀器實驗室開發有限公司;血液流變學測定儀，型號：LG-R-80B；血小板聚集率測定儀，型號：LG-PABER-1，均由北京世帝科學儀器有限責任公司提供。

2 方法

2.1 屏邊三七總皂苷的制備

屏邊三七根部藥材購于紅河州苗鄉屏邊縣玉屏鎮大份子村委會個體戶彭興國三七資源訓化種植大棚，清水洗凈后參照有關文獻方法進行提取制備。稱取粉末1 kg，用70%乙醇(10 L)進行超聲提取3次，每次提取時間約40 min,合并提取液并濃縮形成浸膏[4-5]。用5倍量的水溶解后大孔樹脂上樣，按(水∶30%乙醇∶70%乙醇)依次洗脫，收集洗脫液旋干后的黃白色粉末即得含量約為31.69%的屏邊三七總皂苷[5-7]。

2.2 實驗分組及給藥

2.2.1 屏邊三七總皂苷活血化瘀實驗

取雌性大鼠60只，適應性喂養2 d，每組10只，隨機分為正常組，模型組，云南白藥組，屏邊三七皂苷低、中、高劑量組，共6組[7]。在同等喂養的情況下，云南白藥組按0.4 g/kg灌胃云南白藥，實驗藥物3組按屏邊三七總皂苷低、中、高劑量(分別為0.20、0.40、0.80 g/kg)灌胃給藥，正常組和模型組灌胃生理鹽水，連續灌胃10 d，末次給藥2 h后，除正常組外，其余組參照有關參考文獻方法用鹽酸腎上腺素和冰浴進行造模[5-10]。上述造模實驗完成后，大鼠禁食12～16 h，用20%烏拉坦(劑量為5 mL/kg)麻醉后從腹主動脈取血5 mL，用含肝素鈉的采血管封存備用[10]。參照文獻方法檢測各組大鼠血液的全血黏度、血漿黏度、紅細胞積壓值及凝血四項、血小板聚集率指標[10-11]。

2.2.2 屏邊三七總皂苷鎮痛效果評價實驗

取昆明小鼠60只，雌雄各半，按上述方法分為6組，于末次給藥2 h后，除正常組外，其余組參照有關文獻進行腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，記錄給藥后15 min內各小鼠的扭體次數，并計算扭體抑制率[12]，扭體抑制率=(對照組扭體次數-實驗組扭體次數)/對照組扭體次數×100%。

2.3 數據分析方法

3 結果

3.1 屏邊三七總皂苷對模型大鼠血液流變學影響

與正常組大鼠相比，模型組大鼠全血黏度值、血漿黏度值均顯著升高(P<0.05)，提示造模成功。與模型組比較，實驗藥物組中大鼠的全血黏度、血漿黏度和全血相對黏度均顯著降低(P<0.05)，見表1。

表1 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠血液流變學指標的影響

3.2 屏邊三七總皂苷對模型大鼠的凝血四項指標的影響

各組大鼠的凝血酶、凝血酶原時間，部分凝血酶、纖維蛋白含量變化差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠凝血四項指標的影響

3.3 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響

各組大鼠的血小板聚集率和抑制率差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 屏邊三七總皂苷對大鼠血瘀模型的血小板聚集率的影響

3.4 屏邊三七總皂苷對醋酸所致小鼠扭體實驗次數及扭體抑制率影響

各組扭體模型小鼠的扭體次數及扭體抑制率存在顯著差異(P<0.05)，見表4。

表4 各組小鼠扭體實驗次數及扭體抑制率結果

4 討論

已有研究表明，血瘀是血液循環異常的一種狀態，與血液的流變異常、凝血異常等現象有關[11]。而血液流變異常的主要原因為HCT升高、紅細胞聚集率上升、血漿黏度增大等。炎癥介質會引發循環血容量減少而造成血液的濃縮，造成局部紅腫疼痛，從而引發FIB等血漿蛋白濃度的相對升高而誘發血漿黏度的增加[11，13]。在出血的狀態下，機體凝血活性因子被激活，凝血指標如PT、TT、APTT 等就會發生縮短[13]，促使凝血功能紊亂，從而加劇其他血漿凝血指標升高，最終導致血瘀證[14-15]。

屏邊三七目前尚未載入中國藥典，僅作為藥用植物來使用，在對屏邊野生資源使用調查的過程中發現，其主要作為治療跌打損傷和強筋健骨的內服藥及治療外傷包扎、跌打損傷等外用藥的形式使用。本實驗研究結果顯示，屏邊三七總皂苷藥物實驗組(低、中、高3個不同劑量)對血瘀大鼠的血液流變學指標和凝血指標均有改善作用,對醋酸所致扭體模型小鼠具有一定的抑制作用，表明屏邊三七總皂苷成分具有活血化瘀和鎮痛的活性。

本實驗的研究為考察屏邊三七的活血化瘀和鎮痛作用提供了一定的參考。為開展屏邊三七在治療外傷包扎、跌打損傷、滋補氣血等方面的功效研究提供了一定的實驗基礎依據。但還有不足之處，日后將繼續深入開展活血補血的分子藥理實驗研究，為下一步的開發應用提供更全面的實驗數據。