人腸道來(lái)源霍氏腸桿菌4-2-1 的分離及其對(duì)枸杞多糖的發(fā)酵作用

王艷萍，方海田, ，胡海明，殷明珠，劉洪濤

（1.寧夏大學(xué)食品與葡萄酒學(xué)院，寧夏食品微生物應(yīng)用技術(shù)與安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，寧夏銀川 750021；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430065）

寧夏枸杞（L.）別名茄果，枸杞子，是我國(guó)備受喜愛(ài)的藥食同源食物，其中含有多種活性成分，主要包括多糖、多酚、類(lèi)胡蘿卜素、萜烯類(lèi)、有機(jī)酸以及多種微量元素。而多糖又是枸杞中最主要的活性成分之一，在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗疲勞、護(hù)肝等方面貢獻(xiàn)頗大。枸杞多糖與疾病的相互作用已成為關(guān)注的熱點(diǎn)。有研究表明，枸杞多糖不僅可以維持腸道微生物群的平衡，改善非酒精性肝病，而且能夠調(diào)節(jié)腸道菌群，減少壓力因素對(duì)后代情緒傷害的影響。

人體腸道是一個(gè)大型的發(fā)酵、消化場(chǎng)所。其中人體腸道菌群組成復(fù)雜、數(shù)量巨大，包括擬桿菌屬、腸桿菌屬、芽孢桿菌屬等。霍氏腸桿菌屬于腸桿菌科，是存在與人和動(dòng)物腸道內(nèi)的正常菌株之一，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)對(duì)霍氏腸桿菌的研究較少，汪芳芳發(fā)現(xiàn)優(yōu)化霍氏腸桿菌A20 培養(yǎng)條件之后，葉黃素的降解率提高了20%左右，增加了葉黃素的商業(yè)價(jià)值，同時(shí)霍氏腸桿菌WM1 可以發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生青霉素酶，并在檢測(cè)牛奶中青霉素的殘留發(fā)揮一定作用。而人腸道菌群也不是固定不變的，與很多因素都有密切關(guān)系，比如年齡、環(huán)境、性別、飲食等多種因素，其中飲食被認(rèn)為是改變腸道菌群最直接、最有效的方法之一。有研究表明，碳水化合物是人類(lèi)飲食的主要成分，但其中的植物多糖不能被口腔、胃液吸收，只有被分解成小分子物質(zhì)才能達(dá)到其益生元作用，而腸道微生物能夠定植在遠(yuǎn)端腸道分解復(fù)雜碳水化合物，F(xiàn)u 等人對(duì)鼠尾藻多糖的體外發(fā)酵研究中發(fā)現(xiàn)，鼠尾藻多糖只有被結(jié)腸微生物發(fā)酵后才能對(duì)人體發(fā)揮作用，亞麻籽多糖在被人類(lèi)糞便微生物水解利用后才能有助于成為促進(jìn)結(jié)腸的益生元。枸杞多糖是一種水溶性多糖，為含有多種微量元素和氨基酸的蛋白多糖，具有重要生理活性。而目前對(duì)枸杞多糖的發(fā)酵作用大多研究主要集中在糞便菌群的發(fā)酵上，對(duì)單菌和枸杞多糖之間的作用了解甚少。因此明確對(duì)枸杞多糖發(fā)揮作用的腸道單菌具有重要意義。

本研究從為了闡明腸道細(xì)菌在人體吸收枸杞多糖過(guò)程中的作用，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察，生理生化實(shí)驗(yàn)以及16S rRNA 基因?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定，篩選出一株腸道單菌株，最后將該單菌應(yīng)用到枸杞多糖發(fā)酵中，通過(guò)對(duì)枸杞多糖發(fā)酵指標(biāo)的研究，以揭示枸杞多糖在人體內(nèi)的作用機(jī)制，為之后相關(guān)方面的研究提供一定的借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

人體腸道糞便 聯(lián)系3 位健康志愿者，要求志愿者無(wú)消化系統(tǒng)疾病，3 個(gè)月內(nèi)未服用抗生素或益生菌；枸杞，購(gòu)自寧夏銀川市中寧；枸杞多糖 由本實(shí)驗(yàn)室制備得到。細(xì)菌基因組DNA 提取試劑盒 北京索萊寶科技有限公司；苯酚、濃硫酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，瓊脂糖 北京擎科生物科技有限公司。

BXM-30R 壓力蒸汽滅菌器 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；超凈工作臺(tái) 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；V－5100 紫外分光光度計(jì) 上海精科實(shí)業(yè)有限公司；LRH-250 生化培養(yǎng)箱 廣東省醫(yī)療器械廠；凝膠成像系統(tǒng) Eppendorf 公司；梯度PCR 儀 Eppendorf公司；LB 培養(yǎng)基 青島高科技工業(yè)園海生物技術(shù)有限公司；瓊脂粉 北京索萊寶科技有限公司；Spectra-Max iD3 多功能酶標(biāo)儀 美谷分子儀器上海有限公司；S210 pH 計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制 無(wú)碳源SM 液體培養(yǎng)基：氯化鉀4.5 g/L、氯化鈉4.5 g/L、碳酸氫鈉1.5 g/L、磷酸二氫鉀0.5 g/L、磷酸氫二鉀0.5 g/L、硫酸鎂0.4 g/L、氯化銨0.3 g/L、堿性微量元素（NaSeO0.087 g/L，NaWO0.165 g/L，NaMoO0.121 g/L，NaOH 2 g/L）1 mL/L、酸性微量元素（FeClZnCl、CuCl、HCl）1 mL/L，高溫高壓115 ℃滅菌15 min 后，按照500:1的比例加入CaCl母液，按照1000:1 的比例加入維生素溶液（維生素B、維生素B、維生素B、維生素B），配制固體培養(yǎng)基所需瓊脂粉為20 g/L。

1.2.2 人糞便樣品預(yù)處理 稱(chēng)取一定質(zhì)量新鮮人類(lèi)糞便，在超凈工作臺(tái)中加入無(wú)菌PBS 進(jìn)行渦旋，500 r/min 離心5 min，吸上清至滅完菌的離心管中，再加入無(wú)菌PBS 旋渦，500 r/min 離心5 min，再次吸上清至滅完菌的Ep 管中，得到糞便懸液。糞便懸液一部分用于實(shí)驗(yàn)，剩余部分加入無(wú)菌厭氧甘油，分裝，保存在-80 ℃，備用。

1.2.3 人體糞便中菌的富集 取一定量糞便懸液，500 r/min 離心5 min，棄去上清，用PBS 洗滌兩次后，離心重懸，按照合適的體積比，接種至LB 液體培養(yǎng)基中，37 ℃搖床培養(yǎng)48 h。

1.2.4 腸道菌分離篩選 將1.2.3 富集的樣品用PBS溶液進(jìn)行稀釋至10～10梯度，在LB 固體培養(yǎng)基中進(jìn)行涂布，放置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)24～36 h。挑選培養(yǎng)基中不同顏色、形狀和大小的菌株至LB 液體培養(yǎng)基，37 ℃搖床培養(yǎng)18～24 h。將液體培養(yǎng)基中得到的菌株在LB 固體培養(yǎng)基中反復(fù)劃線，已保證得到純度較高的單菌，將上述得到的單菌落以50%甘油進(jìn)行保菌，并保存于-80 ℃冰箱中。

1.2.5 菌株發(fā)酵能力的比較 將經(jīng)過(guò)反復(fù)劃線得到的兩株單菌按照1:50 的比例加入含有枸杞多糖的SM 液體培養(yǎng)基中，放置在37 ℃搖床中搖床培養(yǎng)72 h，測(cè)量發(fā)酵液中多糖含量的變化。

1.2.6 菌株鑒定 將1.2.4 中得到對(duì)枸杞多糖發(fā)酵能力較好的菌株4-2-1 進(jìn)行鑒定。根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》和《伯杰氏細(xì)菌系統(tǒng)分類(lèi)學(xué)手冊(cè)》對(duì)分離出的細(xì)菌進(jìn)行細(xì)菌形態(tài)和生理生化鑒定。

采用16S rRNA 基因進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定，以4-2-1 菌株的基因組為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，正反向引物為8F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'/1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR 反應(yīng)體系（50 μL）為：模板DNA 1 μL，KOD 酶1 μL，10×KOD buffer 5 μL，dNTP（2 mmol/L）5 μL，引物（F+R）3 μL，MgSO（25 mmol/L）3 μL，ddHO 22 μL。PCR 擴(kuò)增參數(shù)設(shè)置為：94 ℃預(yù)變性2 min，98 ℃變性10 s，55 ℃退火30 s，68 ℃延將。得到的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）瓊脂糖凝膠電泳。確認(rèn)聚合酶反應(yīng)擴(kuò)增片段，若PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物在1500 bp 左右，則可送至上海生工進(jìn)行測(cè)序，將該16S rDNA 序列遞交NCBI進(jìn)行BLAST 同源序列檢索，比較篩出菌株與已知菌株的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系和系統(tǒng)地位，如果同源性大于99%，則確認(rèn)為同一類(lèi)細(xì)菌，借助Mega X 軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.2.7 霍氏腸桿菌4-2-1 對(duì)枸杞多糖發(fā)酵的影響將枸杞多糖（2 mg/mL）加入無(wú)碳源的SM 固體培養(yǎng)基中，使得枸杞多糖成為培養(yǎng)基中的唯一碳源，放置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中對(duì)菌株4-2-1 培養(yǎng)至有明顯菌落。并接種至含枸杞多糖的無(wú)碳源SM 液體培養(yǎng)基中，放置37 ℃搖床中培養(yǎng)18 h，培養(yǎng)后吸取1 mL 的菌液，的以3000 r/min 進(jìn)行離心3 min，收集菌體并用PBS 稀釋至1 mL，按照1:50 的比例將霍氏腸桿菌接種至以枸杞多糖為唯一碳源的SM 液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程中細(xì)菌生長(zhǎng)含量（OD）、pH 的變化、多糖含量、還原糖含量以及分子量變化。

1.2.7.1 發(fā)酵過(guò)程中菌株生長(zhǎng)曲線測(cè)定 將菌株按照1:50 的比例加入含有枸杞多糖為唯一碳源的SM液體培養(yǎng)基中，放置在37 ℃搖床中搖床培養(yǎng)，分別在0、6、12、24、48 h 取樣，用紫外分光光度計(jì)測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的OD，實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。

1.2.7.2 發(fā)酵過(guò)程中pH 測(cè)定 將菌株加入含有枸杞多糖為唯一碳源的的SM 液體培養(yǎng)基中，放置在37 ℃搖床中搖床培養(yǎng)，分別在0、6、12、24、48 h 取樣，用pH 計(jì)測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的pH，以按照1:50 的比例接種霍氏腸桿菌4-2-1 的SM 液體培養(yǎng)基作為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)三次。

1.2.7.3 發(fā)酵過(guò)程中多糖含量測(cè)定 硫酸-苯酚法測(cè)定發(fā)酵液中多糖含量，參考Masuko 等方法略作修改。取各個(gè)時(shí)間段的發(fā)酵液，13000 r/min 離心3 min，取上清，分別吸取0.3 mL 不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵樣品溶液和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液加入0.2 mL 的6%苯酚溶液，震蕩搖勻后迅速加入1 mL 濃硫酸，搖勻加塞后置于沸水浴放置20 min，取出后用涼水冷卻10 min；用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，在波長(zhǎng)為490 nm 處測(cè)定吸光度，以葡萄糖濃度X 為橫坐標(biāo)（μg/mL），OD為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=0.02200X+0.04749，=0.9997 計(jì)算樣品中總碳水化合物含量。

1.2.7.4 發(fā)酵中還原糖含量測(cè)定 采用二硝基水楊酸（DNS）法測(cè)定發(fā)酵液中還原糖，參照牟佳紅等方法略作修改。分別吸取0.4 mL 不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵樣品溶液和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入DNS 試劑0.8 mL，搖勻后置于恒溫混勻儀100 ℃加熱5 min，取出后置于冰水混合物中冷卻至室溫，用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，在波長(zhǎng)為540 nm 處測(cè)定吸光度，以葡萄糖濃度X 為橫坐標(biāo)（mg/mL），D為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=1.54300X+0.04671，=0.9991 計(jì)算樣品還原糖含量含量。

1.2.7.5 發(fā)酵過(guò)程中多糖分子量測(cè)定 分子量的測(cè)定參照唐雨薇方法略作修改。發(fā)酵產(chǎn)物使用80%的乙醇進(jìn)行4 ℃過(guò)夜沉淀，并用0.22 μm 濾膜過(guò)濾。采用Wasters-2424 蒸發(fā)光檢測(cè)器測(cè)定多糖的分子量，檢測(cè)條件：色譜柱：GE 水溶性凝膠柱（7.8 mm×300 mm）；柱溫：30 ℃；流速：0.6 mL/min；流動(dòng)相：純化水；霧化器模式：加熱（90%功率，36 ℃）；載氣：N；氣流壓力：0.28 MPa；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次取平均值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，采用Mega X 軟件建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 進(jìn)行顯著性分析，Excel 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)并分析，由Graph Pad Prism 8 軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵能力較優(yōu)菌株的篩選

通過(guò)反復(fù)劃線可得純度較高的兩株細(xì)菌，將菌株3-2-1 和菌株4-2-1 接種至含枸杞多糖的無(wú)碳源SM 液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，測(cè)定培養(yǎng)基中多糖含量的變化，無(wú)碳源SM 培養(yǎng)基作為對(duì)照組。由圖1 可知，發(fā)酵72 h 后，與對(duì)照組相比，兩個(gè)發(fā)酵組多糖含量明顯降低，說(shuō)明這兩株菌均可以利用枸杞多糖，并且菌株4-2-1 的發(fā)酵能力強(qiáng)于3-2-1，因此選擇發(fā)酵能力較優(yōu)菌株4-2-1 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 菌株篩選過(guò)程中多糖含量的變化Fig.1 Changes in polysaccharide content during strain screening

2.2 人腸道菌株的鑒定

2.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定 采用三區(qū)劃線法將4-2-1 在LB 固體培養(yǎng)基上劃線。通過(guò)對(duì)4-2-1 菌株形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)菌株4-2-1 在LB 培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)情況如圖2，圓形，邊緣透明，中間呈乳白色，有光澤，略隆起，邊緣整齊；對(duì)4-2-1 菌株進(jìn)行革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)，該菌周身鞭毛運(yùn)動(dòng)，無(wú)芽孢，無(wú)夾膜，通過(guò)革蘭氏染色初步判定4-2-1 為革蘭氏陰性菌，在顯微鏡下成桿狀。

圖2 菌株4-2-1 的形態(tài)學(xué)特征Fig.2 Morphologic characteristics of strain 4-2-1

2.2.2 16S rRNA 擴(kuò)增結(jié)果 利用引物對(duì)所提取的基因組DNA 進(jìn)行擴(kuò)增，所擴(kuò)增的結(jié)果如圖3 所示，在1500 bp 左右出現(xiàn)了目的條帶，條帶整齊，表明PCR 產(chǎn)物可用于測(cè)序分析。

圖3 1%瓊脂凝膠電泳圖Fig.3 Agarose gel electrophoresis diadram

2.2.3 4-2-1 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析 用Snap Gene Viewer軟件對(duì)4-2-1 測(cè)序序列進(jìn)行拼接，借助NCBI 中的BLAST 和數(shù)據(jù)庫(kù)中已知菌株的16S rRNA 基因進(jìn)行序列比對(duì)，用相似度最高的菌株來(lái)確定4-2-1 的種屬狀況。結(jié)果表明，菌4-2-1 的16S rRNA 基因序列與數(shù)據(jù)庫(kù)中已知霍氏腸桿菌的16S rRNA 基因的相似性大于99%。為了進(jìn)一步明確該菌株與已知菌株的親緣關(guān)系及分類(lèi)地位，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，結(jié)果顯示該菌株與KK736258.1 在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)聚為一支，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖4 所示。

圖4 菌株4-2-1 的16S rRNA 基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of Enterobacter 16S rRNA gene sequence of strain 4-2-1

2.3 對(duì)枸杞多糖發(fā)酵的影響

2.3.1 發(fā)酵篩選及菌株生長(zhǎng)特性 OD可以用來(lái)描述霍氏腸桿菌4-2-1 在含有枸杞多糖的培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特性。而從圖5 可以發(fā)現(xiàn)，霍氏腸桿菌4-2-1 在36 h 后基本進(jìn)入穩(wěn)定期，在0～12 h 處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，達(dá)到平臺(tái)期時(shí)菌株的OD在0.15 左右。由此可知，霍氏腸桿菌4-2-1 可以在含枸杞多糖的培養(yǎng)基中很好的生長(zhǎng)，并且存活率較高，所測(cè)結(jié)果和岳喜慶等篩選出霍氏腸桿菌的生長(zhǎng)趨勢(shì)相似。

圖5 發(fā)酵液中菌株生長(zhǎng)情況Fig.5 Growth of strains in fermentation broth

由上可知，細(xì)菌總量增長(zhǎng)，說(shuō)明霍氏腸桿菌4-2-1 能在含枸杞多糖的唯一碳源培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

2.3.2 霍氏腸桿菌4-2-1 發(fā)酵枸杞多糖過(guò)程中pH、多糖含量、還原糖含量的變化 在發(fā)酵過(guò)程中，檢測(cè)多糖含量、還原糖含量和pH 的動(dòng)態(tài)變化。如圖6（a）所示，多糖的初始含量在682 μg/mL 左右，此后，在12 h 的發(fā)酵期間內(nèi)，多糖含量逐漸降低，逐漸趨于穩(wěn)定，剩余多糖含量在205.7 μg/mL 左右，之前也有研究表明，多糖含量的變化與糞便微生物的作用息息相關(guān)。同樣的，還原糖也由剛開(kāi)始的最高含量逐漸降低，直到24 h（圖6（b））。通過(guò)發(fā)酵后多糖和還原糖的分解程度，說(shuō)明霍氏腸桿菌4-2-1 可在枸杞多糖作為唯一碳源的培養(yǎng)基上進(jìn)行生長(zhǎng)。

圖6 發(fā)酵過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)的特征指標(biāo)測(cè)定Fig.6 Measurement of indicators at different time points

多糖在腸道里可以被腸道菌選擇利用，引起pH的變化，因此，pH 是反應(yīng)發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要指標(biāo)。如圖6（c）所示，發(fā)酵12 h 后，發(fā)酵組的pH 從7.98 降至7.79，在24 h 發(fā)酵結(jié)束時(shí)，降低至7.75 并保持穩(wěn)定。然而在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中，對(duì)照組的pH 保持不變，和之前的荔枝多糖作為益生元的研究相似。表明枸杞多糖可被腸道菌霍氏腸桿菌4-2-1 發(fā)酵利用，引起培養(yǎng)基相應(yīng)pH 的變化，并可能產(chǎn)生相應(yīng)的有機(jī)酸。

2.3.3 霍氏腸桿菌4-2-1 發(fā)酵枸杞多糖過(guò)程中枸杞多糖分子量變化 對(duì)發(fā)酵后枸杞多糖的分子量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如圖7。在發(fā)酵的過(guò)程中，枸杞多糖的含量隨著霍氏腸桿菌的發(fā)酵時(shí)間推移而降低，分子量也從8.02 kDa 變?yōu)?.44 kDa，表明枸杞多糖在霍氏腸桿菌的發(fā)酵下被分解，由此可以推測(cè)，霍氏腸桿菌對(duì)于枸杞多糖在人體腸道的消化吸收發(fā)揮著重要的作用。

圖7 不同時(shí)間點(diǎn)枸杞多糖分子量測(cè)定Fig.7 Determination of molecular weight of Lycium barbarum polysaccharide at different time points

3 結(jié)論

多糖經(jīng)微生物發(fā)酵后可以被人體利用并發(fā)揮有益作用。因此研究對(duì)枸杞多糖的發(fā)酵是了解枸杞多糖在體內(nèi)作用的重要部分。本研究從人體糞便樣品中分離出一株對(duì)枸杞多糖具有很好發(fā)酵作用的霍氏腸桿菌4-2-1，檢測(cè)培養(yǎng)基中細(xì)菌生長(zhǎng)曲線、pH 變化、多糖含量、還原糖含量和分子量變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該菌為革蘭氏陰性菌霍氏腸桿菌，能在以枸杞多糖為碳源的培養(yǎng)基中進(jìn)行生長(zhǎng)，且隨著發(fā)酵的進(jìn)行，細(xì)菌數(shù)量顯著增加，導(dǎo)致發(fā)酵體系內(nèi)pH 由7.98 變化至7.79，多糖含量、還原糖含量和多糖分子量發(fā)生變化，分別降低了30.2%、40.6%和42.9%，說(shuō)明從人腸道糞便樣品中分離的霍氏腸桿菌4-2-1 能對(duì)枸杞多糖進(jìn)行發(fā)酵。綜上，人腸道來(lái)源的霍氏腸桿菌4-2-1 可發(fā)酵枸杞多糖，這可能部分解釋了枸杞多糖作為益生元對(duì)機(jī)體健康的改善作用，為多糖的生理活性進(jìn)一步提供依據(jù)，但詳細(xì)的機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。