血漿絲氨酸蛋白酶抑制劑E1蛋白水平與幽門螺桿菌感染的關系研究

姚 勇， 奉 鐳， 雷洪軍， 張 描， 高明生

(四川省遂寧市中心醫院消化內科， 四川 遂寧 629000)

胃癌在全球具有較高的發病率及死亡率，每年全球大約有70萬胃癌患者死亡[1]，同時胃癌也嚴重威脅我國人民的健康及生命，因此有必要對胃癌的危險因素、發病機制、防治策略等作深入的探討。研究發現，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染在胃癌的發生、發展中具有十分重要的作用。一項納入3365名受試者的前瞻性研究證實：根除Hp的治療可以降低胃癌患者的死亡率及發生率[2]。雖然Hp感染與胃癌的密切關系已得到大部分研究證實，但Hp導致胃癌的具體分子機制仍不清楚[3，4]。對Hp相關性胃癌發生機制的探討，有利于制定預防以及治療胃癌的策略。胃癌的發生、發展與癌基因及相關蛋白的異常水平密切相關。絲氨酸蛋白酶抑制劑E1(serpin peptidase inhibitor clade E member 1,SERPINE1)，又稱纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)，由SERPINE1基因編碼的蛋白，參與細胞遷移、增殖、分化等過程，是胃癌發生、發展過程中的關鍵癌蛋白。研究發現，SERPINE1可以通過調節上皮細胞間充質轉分化機制，促進胃癌細胞的發生、增殖及轉移[5]。如果胃癌患者在癌組織中高水平表達SERPINE1，則該患者極大可能會出現預后欠佳，生存率低下[6]。因此，SERPINE1是胃癌發生、發展的重要促進因子，可能參與了Hp相關性胃癌的發生進程。Hp感染作為胃癌發生、發展的重要風險因素，理論上應該和SERPINE1關系密切。然而，目前卻沒有SERPINE1與Hp關系的相關研究。本文對血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染的關系進行了初步的探討，為進一步的相關機制研究提供一定的基礎。

1 資料與方法

1.1一般資料:依據相應的納入及排除標準，本研究納入417名在遂寧市中心醫院體檢的成年受試者作為研究對象。本研究納入標準為：①已完成13C呼氣試驗，已明確目前Hp感染狀態的受試者；②臨床病史及血漿生化指標均完整記錄的受試者，排除標準：①既往有根除Hp的治療史；②近一月內使用過抗生素；③近兩周服用過質子泵抑制劑、鉍劑等影響Hp感染的藥物；④合并有惡性腫瘤、嚴重器官功能障礙、妊娠及其他部位的嚴重感染；依據受試者13C呼氣試驗結果，分為Hp陰性組(192例)及Hp陽性組(225例)。

1.2酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa):使用人纖溶酶原激活物抑制因子1Elisa試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)檢測血漿SERPINE1蛋白水平,具體步驟如下：①在反應板的空白孔中，加入樣本及不同濃度的標準品，并進行37℃孵箱孵育；②洗板后加入生物素化抗體工作液，并進行37℃孵箱孵育；③洗板后加入酶結合物工作液，并進行37℃孵箱孵育；④洗板后加入顯色底物，并進行37℃孵箱孵育；⑤加入終止液，并依據分光光度儀及標準曲線的方程，得出樣本中SERPINE1蛋白水平。

2 結 果

2.1兩組受試者一般情況及血漿生化指標、SERPINE1蛋白水平的比較:Hp陽性組中受試者的體重指數(BMI)、血漿SERPINE1蛋白水平、低密度脂蛋白水平(LDL)、載脂蛋白B(APOB)水平明顯高于Hp陰性組受試者的相應指標(P<0.001)，兩組受試者之間的年齡、性別、空腹血糖(FPG)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)，不具有統計學差異(P>0.05),見表1。

表1 比較兩組受試者之間的臨床數據

2.2血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染狀態的相關性分析:依據血漿SERPINE1蛋白水平的四分位數間距，即≤5.34ng/mL,5.35～6.64ng/mL,6.65～8.37ng/mL,≥8.38ng/mL，將所有受試者分為四組(第一分位組、第二分位組、第三分位組、第四分位組)，結果發現第一分位組、第二分位組、第三分位組、第四分位組受試者Hp感染率依次為13.3%、28.57%、77.67%、97.12%，將第一分位組受試者Hp感染率作為參考，第二分位組Hp感染率是其2.14倍，第三分位組Hp感染率是其5.83倍，第四分位組Hp感染率是其7.29倍，結果提示隨著血漿SERPINE1蛋白水平的不斷升高，受試者Hp感染率也相應增加，兩者具有明顯的相關性(P<0.001),見表2。

表2 血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染率相關性分析

2.3血漿SERPINE1蛋白水平診斷Hp感染狀態:利用血漿SERPINE1蛋白水平構建診斷Hp感染狀態的ROC曲線，結果發現該ROC曲線下面積為0.906，最佳截點值取6.49ng/mL時，診斷Hp感染的靈敏度為84.4%，特異度為83.3%，提示血漿SERPINE1蛋白水平對Hp感染具有較好的預測價值。見圖1。

圖1 構建血漿SERPINE1蛋白水平診斷Hp感染的ROC曲線

3 討 論

研究發現多種分子機制參與了Hp相關性胃癌的發生、發展，且SERPINE1在胃癌的進展中扮演著十分重要的角色，但目前并沒有Hp與SERPINE1關系的研究。本文初步探討了Hp感染與血漿SERPINE1蛋白水平的關系，結果發現Hp陽性受試者具有較高的血漿SERPINE1蛋白水平，Hp感染率與血漿SERPINE1蛋白水平呈正相關，且血漿SERPINE1蛋白水平具有診斷Hp感染的潛力。Hp感染導致SERPINE1水平升高的具體機制仍需要進一步研究。依據已有的研究，Hp相關性炎癥反應可能會誘導SERPINE1的高表達。SERPINE1的過度表達常常由人體內多種促炎因子，如腫瘤壞死因子、白介素等所誘導[7]，因此大多數風濕性關節炎、炎癥反應綜合征、代謝綜合征的患者體內由于炎癥反應較為活躍而出現SERPINE1表達水平的升高。既往研究證實，長期Hp感染可以導致胃及十二指腸的慢性炎癥，誘導機體釋放多種促炎因子，如腫瘤壞死因子、白介素-1、白介素-6等[8]，可能也會促進SERPINE1的表達，提高血漿SERPINE1蛋白水平。雖然如此，進一步的臨床以及基礎研究仍需開展，以驗證上述假設的真實性。本研究結果發現血漿SERPINE1蛋白水平對Hp感染具有一定的診斷價值，但因為樣本量的問題，目前該結果并不適合臨床應用。如果進一步完成多中心、大樣本的研究，SERPINE1有可能成為Hp感染的血漿標志物。

除了發現Hp感染與血漿SERPINE1蛋白水平的相關性，本研究還發現Hp陽性受試者的體重指數、低密度脂蛋白水平、載脂蛋白B水平明顯高于Hp陰性組受試者，提示Hp感染的個體可能合并脂質代謝異常。BMI是衡量人體肥胖的一個重要指標，其值過高常常導致嚴重的脂質代謝紊亂。一項大型隊列研究顯示，Hp陽性人群具有較高的BMI值，且BMI值與Hp感染率呈正相關，其能獨立預測調查人群Hp感染的情況[9]。本研究關于BMI的結果與既往研究結果一致，但具體機制不清楚，其可能與Hp感染導致的脂質代謝紊亂有關。Hp感染與多種代謝性疾病，如：2型糖尿病、胰島素抵抗、動脈粥樣硬化、非酒精脂肪肝等密切相關，具體的分子機制包括炎癥反應、胃腸道微生態、激素的分泌等[10,11]。因此，Hp感染常常導致一些脂質代謝指標的異常。本研究中的Hp陽性受試者也出現了不同程度的脂質代謝指標異常，表現為高血漿低密度脂蛋白及載脂蛋白B水平。

本研究仍存在一定的問題。我們納入的研究對象為醫院里的體檢人群，這部分人群對自身健康情況的關注度相對其他大多數人群較高，其更愿意到醫院里來接受檢查，因此這部分人群有可能無法代表大多數人群的真實情況。其次，每個地區Hp感染率并不一致，因此該研究結果在其他地區的應用受到了一定限制。

綜上所述，本文初步證實血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染具有一定的相關性，Hp感染可能會導致血漿SERPINE1蛋白水平升高，該結論為研究Hp相關性胃癌的分子機制提供新的切入點。不僅如此，高血漿SERPINE1蛋白水平或許可作為根除Hp的適應癥之一，當然還需要更加深入的基礎及臨床研究予以證實。