牛口蹄疫新型疫苗與傳統疫苗免疫效果比較

樊麗，韋雪華，李星，常靜，徐吉榮，張敏，劉德娟

（1.山東省泰安市動物疫病預防控制中心，山東 泰安 271000；2.山東省威海市動物疫病預防與控制中心，山東 威海 264300；3.山東省動物疫病預防與控制中心，山東 濟南 250010；4.山東省肥城市畜牧獸醫事業發展服務中心，山東 泰安 271600；5.山東省肥城市孫伯鎮畜牧獸醫站，山東 泰安 271600）

0 引言

口蹄疫（FootandMouthDisease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，主要危害豬、牛、羊等的烈性疫病，是《中華人民共和國動物防疫法》規定的一類傳染病，同時被列為《國家中長期動物疫病防治規劃（2012—2020）》優先防治的第一位病種。該病目前尚無特效的藥物治療，安全有效的疫苗是預防控制FMD的先決條件[1]。

目前使用傳統的滅活疫苗，免疫效力最優，但因純化不完全，免疫后，以檢測病毒非結構蛋白抗體為金標準的鑒別技術，難以精準區別免疫和野毒感染動物，即使應用改進的純化技術，也不能完全清除與滅活病毒大小相同的非結構蛋白復合物，多次免疫后，仍能檢測到病毒非結構蛋白抗體。口蹄疫O型、A型二價3B蛋白表位缺失標記滅活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）屬此類疫苗。該疫苗是利用基因缺失和病毒拯救等反向遺傳技術，分別缺失FMDVO型和A型毒株的3B基因的優勢表位，并重新拯救3B蛋白表位缺失病毒O/rV-1株和A/rV-2株，既保持了O型和A型毒株各自原有的良好免疫原性和增殖能力，又具備缺失3B基因的分子標記，屬于國際上首創的口蹄疫O、A型雙價基因標記疫苗。該雙價3B標記疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株）對當前O／Mya-98、O／Cathay、O／PanAsia和O／Ind-2001毒株4個O型譜系毒株及A型Sea-97G1和G2分支毒株均能提供良好的免疫保護。本研究通過使用口蹄疫O型、A型二價3B蛋白表位缺失滅活疫苗和傳統口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗進行首免、二免、三免，選用疫苗免疫后，擬定首免后28 d采血，以后每14 d采集血樣，檢測疫苗免疫抗體水平和口蹄疫病毒非結構蛋白抗體[2-3]。

1 材料與方法

1.1 疫苗及試劑盒

口蹄疫O型、A型二價3B蛋白表位缺失滅活疫苗（O/rV-1株+A/rV-2株），生產企業：內蒙古必威安泰生物科技有限公司，批號：20200606。口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗（OHM/02株+AKT—III株），生產企業：內蒙古必威安泰生物科技有限公司，批號：20200508。口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，生產企業：中國農業科學院蘭州獸醫研究所，批號：20201116129。口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，生產企業：中國農業科學院蘭州獸醫研究所，批號：20201111101-5；口蹄疫O型抗原，批號：101/32。口蹄疫A型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，生產企業：中國農業科學院蘭州獸醫研究所，批號：20201127103-1；口蹄疫A型抗原，批號：103/27。

1.2 試驗方案

用LB-ELISA方法檢測口蹄疫O型、A型免疫抗體效價。診斷試劑由蘭州獸醫研究所提供，口蹄疫O型試劑盒批號2013090201，口蹄疫A型試劑盒批號2013091103。具體檢測按照試劑盒使用說明書進行。口蹄疫O型、A型免疫抗體效價≥1∶64判定為合格。

2 試驗方案與步驟

（1）試驗動物。選取37頭3月齡以上的健康及非結構蛋白陰性牛，其中口蹄疫O型、A型二價3B蛋白表位缺失標記滅活疫苗試驗組25頭，口蹄疫O型、A型二價滅活疫苗對照組7頭，空白對照組5頭。

（2）試驗步驟。①安全檢驗：注射后觀察10 d，10 d內免疫動物無異常，判定實驗產品安全。②免疫方案：肌肉注射2 mL/頭，首免后28 d進行二免，二免后14 d進行三免。③免疫后定期檢測。選用疫苗免疫后，擬定首免后28 d采血，以后每14 d采集血樣，用口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC單抗阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，同時測定病毒非結構蛋白抗體。用口蹄疫液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒檢測免疫抗體。

3 結果與討論

（1）不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體O型檢測結果見表1。

表1 不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體O型檢測結果

（2）不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體A型檢測結果見表2。

表2 不同疫苗牛口蹄疫免疫抗體A型檢測結果

（3）不同疫苗牛口蹄疫感染抗體3ABC檢測結果見表3。

表3 不同疫苗牛口蹄疫感染抗體3ABC檢測結果

4 結束語

自20世紀70年代，隨著分子生物學、免疫化學、生物工程學的良好發展，使牛口蹄疫疫苗的研發工作得到了更多的技術支持。如今，新型疫苗研究工作已經取得了較大的進步，但是大部分仍然處于實驗室階段。想要使新型疫苗順利的進行規模化生產，需要繼續保持嚴謹的研究態度，優化新型疫苗的研發成果，使其在牛口蹄疫防治工作中發揮出更大的作用。