miR-143-3p靶向LASP1抑制胃癌細(xì)胞侵襲和遷移的研究

許鑫鑫，魯意迅，李 凱，梁文全，高云鶴，郗洪慶，王鑫鑫，陳 凜

1 解放軍醫(yī)學(xué)院，北京 100853；2 解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心 普通外科醫(yī)學(xué)部，北京 100853

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全球惡性腫瘤中居第5位，死亡率居第4位[1]。而最新的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，我國胃癌的發(fā)病率和死亡率均居第3位，其中2020年我國胃癌新發(fā)病例為478 508例，死亡病例為373 789例[2-4]。截至目前，胃癌的治療措施十分有限，特別是進(jìn)展期胃癌的預(yù)后較差，胃癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移成為影響患者預(yù)后的一大危險(xiǎn)因素[5-6]。然而，胃癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是一個多基因調(diào)控的極其復(fù)雜的過程，目前其確切分子機(jī)制尚未完全闡明，其重要特征之一是癌細(xì)胞侵襲、遷移能力的增強(qiáng)。因此，針對胃癌轉(zhuǎn)移進(jìn)行臨床及基礎(chǔ)研究，探索新的相關(guān)診斷及治療靶點(diǎn)，具有重要的臨床意義。LASP1是編碼LIM蛋白家族的一個成員，也是肌動蛋白結(jié)合蛋白星云蛋白家族的成員之一。研究發(fā)現(xiàn)，LASP1與多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7-8]。微小RNA (microRNA，miRNA)是一類由19 ~ 24個核苷酸構(gòu)成的非編碼RNA，可參與調(diào)節(jié)包括細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移在內(nèi)的多種腫瘤惡性生物學(xué)行為[9-10]。miR-143-3p作為miRNA家族的成員之一，已有研究報(bào)道能夠通過靶向多種基因抑制胃癌進(jìn)展[11-12]，而miR-143-3p能否通過靶向LASP1抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移尚無文獻(xiàn)報(bào)道。本文以胃癌細(xì)胞系MGC-803為研究對象，探討miR-143-3p能否通過靶向LASP1抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移，以期為胃癌轉(zhuǎn)移的治療提供新的可能靶點(diǎn)。

材料與方法

1主要實(shí)驗(yàn)材料與儀器 本實(shí)驗(yàn)所用胃癌MGC-803細(xì)胞系購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。DMEM培養(yǎng)基、青霉素-鏈霉素雙抗購自武漢賽維爾生物科技有限公司；胎牛血清購自天津康源生物有限公司。LASP1 mRNA 3’-UTR的野生型和突變型質(zhì)粒載體由北京信諾金達(dá)基因技術(shù)有限公司協(xié)助合成。miR-143-3p的Mimics、Inhibitor及其陰性對照由武漢金拓思生物科技有限公司設(shè)計(jì)并合成。轉(zhuǎn)染試劑Chemifect-R購自北京豐銳生物技術(shù)有限公司；Opti-MEM培養(yǎng)基購自美國Thermo Fisher公司。Transwell小室及基質(zhì)膠購自美國康寧公司。TRIzol試劑購自美國Invitrogen 公司；分光光度儀Nanodrop 2000由美國Thermo Fisher公司生產(chǎn)；miR-143-3p、LASP1、GAPDH及U6引物均由北京博邁德基因技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)并合成；qRT-PCR試劑盒購自日本Takara公司；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)采用美國BIO-RAD公司CFX96 qRT-PCR儀。蛋白定量BCA試劑盒購自北京索萊寶公司；β-actin及LASP1一抗購自美國Cell Signaling Technology公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗購自北京百瑞極生物技術(shù)有限公司；ECL發(fā)光試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)公司；Western blot條帶發(fā)光成像采用上海天能科技有限公司數(shù)碼凝膠分析系統(tǒng)。

2生 物 信 息 學(xué) 分 析 使 用 生 物 信 息 學(xué) 數(shù) 據(jù) 庫miRDB (http://www.mirdb.org)、Starbase (https://starbase.sysu.edu.cn/index.php)、TargetScan7.1 (http://www.targetscan.org)、mirDIP (http://ophid.utoronto.ca/mirDIP/index)預(yù)測靶向于LASP1的miRNAs，對預(yù)測結(jié)果取交集，并繪制韋恩圖。基于TCGA數(shù)據(jù)庫，分析miRNAs在胃癌中的表達(dá)水平及LASP1與miRNAs的相關(guān)性。

3雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn) 使用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測miR-143-3p與LASP1之間的靶向關(guān)系。首先構(gòu)建包含海腎熒光素酶基因、螢火蟲熒光素酶基因、LASP1 mRNA 3’-UTR的野生型和突變型質(zhì)粒載體。于24孔板中接種適當(dāng)數(shù)量的HEK-293T細(xì)胞，待細(xì)胞融合度至60%時(shí)，開始實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)基于Targetscan7.1數(shù)據(jù)庫預(yù)測兩者之間的潛在結(jié)合靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)并構(gòu)建了LASP1突變質(zhì)粒。本實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，其中對照組細(xì)胞共轉(zhuǎn)染野生型LASP1質(zhì)粒(LASP1-WT)和miR-143-3p mimics/NC，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞共轉(zhuǎn)染突變型LASP1質(zhì)粒(LASP1-MUT)和miR-143-3p mimics/NC。培養(yǎng)48 h后，使用雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)分析試劑盒進(jìn)行熒光素酶活性檢測。以海腎熒光素酶活性為基礎(chǔ)，對螢火蟲熒光素酶活性進(jìn)行標(biāo)化。

4細(xì)胞培養(yǎng) 使用含10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM完全培養(yǎng)基，于37℃、5% CO2的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。

5細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組 使用轉(zhuǎn)染試劑Chemifect-R、Opti-MEM培 養(yǎng) 基 以 及miR-143-3p mimic、miR-143-3p inhibitor及其陰性對照構(gòu)建轉(zhuǎn)染復(fù)合體，并據(jù)此分為四組，分別為miR-143-3p mimic NC組、miR-143-3p mimic組、miR-143-3p inhibitor NC組、miR-143-3p inhibitor組。之后將轉(zhuǎn)染復(fù)合體均勻添加到6孔板內(nèi)，適當(dāng)搖勻，使轉(zhuǎn)染復(fù)合體與MGC-803細(xì)胞充分接觸后置于培養(yǎng)箱中孵育。于轉(zhuǎn)染后24 h收集細(xì)胞行qRT-PCR實(shí)驗(yàn)；轉(zhuǎn)染后48 h收集細(xì)胞行蛋白質(zhì)免疫印跡Western blot實(shí)驗(yàn)。

6Transwell侵襲實(shí)驗(yàn) 使用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測各組MGC-803的侵襲能力。將液態(tài)基質(zhì)膠與提前預(yù)冷的無血清DMEM培養(yǎng)基按照1∶9的體積比混合均勻，取50 μL滴加到Transwell小室內(nèi)，使混合液在小室底面均勻鋪開。將Transwell小室置于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)箱中2 ~ 4 h，使基質(zhì)膠緩慢凝固。將Transwell小室嵌入24孔板中，在小室下層加入600 μL含有30%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，在小室上層加入200 μL含有8 × 104個MGC-803細(xì)胞的無血清DMEM培養(yǎng)基。將Transwell體系置于細(xì)胞孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)36 h后，取出上層小室，棉棒拭去上層細(xì)胞，用4%的中性組織固定液固定，0.1%的結(jié)晶紫染色。拍照并計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù)目。

7劃痕愈合實(shí)驗(yàn) 使用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測各組MGC-803的遷移能力。6孔板培養(yǎng)MGC-803細(xì)胞至90% ~ 95%融合時(shí)，用200 μL無菌槍頭在單細(xì)胞層劃一直線，PBS洗滌2次后更換培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h。根據(jù)0 h、48 h劃痕寬度，計(jì)算細(xì)胞相對遷移距離。

8RNA提取和qRT-PCR 在10 cm培養(yǎng)皿中常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞，胰蛋白酶消化，離心收集細(xì)胞沉淀，預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2次，使用TRIzol法從細(xì)胞中提取總RNA。利用Nanodrop 2000分光光度計(jì)測定總RNA濃度。取1 μg RNA，使用Mir-XTMmiRNA First-Strand Synthesis Kit逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成miR-143-3p的cDNA、使 用PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成LASP1的cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。應(yīng)用TB Green預(yù) 混Ex TaqⅡ試 劑 盒，分 別 以U6 RNA、GAPDH作為內(nèi)參，檢測LASP1的表達(dá)情況。用比較Ct值的方法計(jì)算RNA相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。使用兩步法進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：預(yù)變性95℃ 30 s，PCR反應(yīng)95℃ 5 s、60℃30 s，共40個循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算LASP1的相對表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 miR-143-3p mimic、miR-143-3p inhibitor、miR-143-3p NC及qRT-PCR引物序列Tab. 1 Primers sequences of miR-143-3p mimic, miR-143-3p inhibitor, miR-143-3p NC and qRT-PCR

9Western blot檢測LASP1的表達(dá)水平 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后48 h，收集各組細(xì)胞，加RIPA裂解液充分裂解細(xì)胞，BCA法檢測蛋白濃度。之后將各組樣本與SDS混合后100℃煮沸10 min。根據(jù)BCA定量結(jié)果計(jì)算各組加樣體積，后行10% SDS-PAGE凝膠電泳(濃縮膠80 V，分離膠120 V)，電泳2 h后采用濕轉(zhuǎn)法進(jìn)行電轉(zhuǎn)(200 mA，1.5 h)，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉4℃室溫封閉2 h。取出PVDF膜，1 × TBST洗膜3次，每次5 min。依據(jù)分子量大小裁剪PVDF膜。在4℃條件下與一抗孵育過夜，洗膜3次同上。然后在室溫條件下與二抗共同孵育2 h。最后利用超敏發(fā)光液ECL進(jìn)行條帶顯影，數(shù)碼凝膠圖像分析系統(tǒng)捕獲圖像，Image J軟件進(jìn)行條帶灰度分析。

10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用GraphPad Prism8.0和SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，以xˉ ±s表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，配對樣本比較采用兩配對樣本t檢驗(yàn)，兩變量的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1靶向于LASP1的miRNAs的篩選 以LASP1為檢索詞，基于Starbase、mirDIP、TargetScan7.1和miRDB等生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測可能靶向于LASP1的miRNAs，對預(yù)測得到的miRNAs取交集并繪制韋恩圖。通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析其在胃癌組織中的表達(dá)水平及其與LASP1的相關(guān)性，結(jié)果顯示其相關(guān)性r=-0.284 (P＜0.01)。以上結(jié)果提示miR-143-3p可能靶向于LASP1。見圖1。

圖1 靶向于LASP1的miRNAs的篩選A：靶向于LASP1的miRNAs預(yù)測韋恩圖；B：miR-143-3p在胃癌與癌旁組織中的表達(dá)差異(非配對樣本)；C：miR-143-3p在胃癌與癌旁組織中的表達(dá)差異(配對樣本)；D：miR-143-3p與LASP1在胃癌中的相關(guān)性分析(bP＜0.01，cP＜0.001，vs Normal)Fig.1 Screening of miRNAs targeting LASP1 A: Prediction Venn diagram of miRNAs targeting LASP1; B: Down-regulation of miR-143-3p relative expression in GC predicted by TCGA database (unpaired samples); C: Down-regulation of miR-143-3p relative expression in GC predicted by TCGA database(paired samples); D: Correlation analysis of miR-143-3p and LASP1 in GC (bP＜0.01, cP＜0.001, vs Normal)

2miR-143-3p直接靶向于LASP1 用TargetScan 7.1數(shù) 據(jù)庫 預(yù) 測miR-143-3p與 LASP1 3’-UTR之間的潛在結(jié)合位點(diǎn)。隨后，雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn) 結(jié) 果 顯 示 野 生 型LASP1 (LASP1-WT) + miR-143-3p mimic組相對熒光素酶活性較LASP1-WT +miR-143-3p mimic NC組明顯降低(0.517±0.031vs0.997±0.045,t=15.264,P＜0.01)，提示miR-143-3p能夠抑制野生型LASP1熒光素酶活性。突變型LASP1(LASP1-MUT) + miR-143-3p mimic與LASP1-MUT + miR-143-3p mimic NC組 相 對 熒光素酶活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.997±0.032vs0.980±0.010,t=0.857,P＞0.05)，提 示miR-143-3p對突變型LASP1熒光素酶活性無明顯抑制作用。以上實(shí)驗(yàn)證明LASP1為miR-143-3p的一個直接靶基因。見圖2。

圖2 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)LASP1是miR-143-3p的直接靶基因A：Targetscan7.1數(shù)據(jù)庫預(yù)測LASP1-3’UTR與miR-143-3p互補(bǔ)位點(diǎn)；B：WT-LASP1和MUT-LASP1 3 ' -UTR報(bào)告質(zhì)粒的序列；C：miR-143-3p mimic及其陰性對照分別與WT-LASP1或MUT-LASP1報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的HEK-293T細(xì)胞中的相對熒光素酶活性(bP＜0.01，vs WT-NC)Fig.2 Dual-luciferase reporter assay confirmed that LASP1 was the target gene of miR-143-3p A: LASP1-3 'UTR and miR-143-3p complementary binding site predicted by Targetscan7.1 database; B: The sequence of the WTLASP1 and MUT-LASP1 3’-UTR reporter plasmids; C: The relative luciferase activity of HEK-293T cells co-transfected with miR-143-3p mimic and negative control with WT-LASP1 or MUT-LASP1 reporter plasmid, respectively (bP＜0.01, vs WT-NC)

3miR-143-3p抑 制 胃 癌 細(xì) 胞 的 侵 襲 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相比于miR-143-3p mimic NC組，miR-143-3p mimic組胃癌細(xì)胞侵襲數(shù)目顯著 減 少(P＜0.01)，而miR-143-3p inhibitor組 較miR-143-3p inhibitor NC組細(xì)胞侵襲數(shù)目顯著增加(P＜0.01)。見圖3。

圖3 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-143-3p對胃癌MGC-803細(xì)胞的侵襲能力有明顯抑制作用A：Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果；B：Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析(bP＜0.01，vs NC)Fig.3 Transwell invasion assay confirmed that miR-143-3p significantly inhibited the invasion ability of GC cell line MGC-803 A: Results of Transwell invasion assay; B: Statistical analysis of experimental results of Transwell invasion assay (bP＜0.01, vs NC)

4miR-143-3p抑制胃癌細(xì)胞的遷移 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-143-3p mimic組、miR-143-3p mimic NC組、miR-143-3p inhibitor組、miR-143-3p inhibitor NC組0 h細(xì)胞相對遷移距離的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。miR-143-3p mimic組48 h細(xì)胞相對遷移距離較miR-143-3p mimic NC組顯著降低(P＜0.01)，而轉(zhuǎn)染miR-143-3p inhibitor 48 h后細(xì)胞相對遷移距離較miR-143-3p inhibitor NC組顯著增加(P＜0.05)。見圖4。

圖4 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-143-3p對胃癌MGC-803細(xì)胞的遷移能力有明顯抑制作用A：劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果；B：劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析(aP＜0.05，bP＜0.01，vs NC)Fig.4 Wound healing assay confirmed that miR-143-3p significantly inhibited the migration ability of GC cell line MGC-803 A: Results of wound healing assay; B: Statistical analysis of experimental results of wound healing assay (aP＜0.05, bP＜0.01, vs NC)

5miR-143-3p下調(diào)LASP1的mRNA表達(dá)水平在MGC-803細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染miR-143-3p mimic、inhibitor及其陰性對照后，qRT-PCR檢測LASP1基因mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示，miR-143-3p mimic組中LASP1相對表達(dá)量較miR-143-3p mimic NC組顯著降低(P＜0.01)，而miR-143-3p inhibitor組中LASP1相對表達(dá)量較miR-143-3p inhibitor NC組顯著升高(P＜0.05)。qRT-PCR結(jié)果表明，miR-143-3p能夠在mRNA水平下調(diào)LASP1的表達(dá)。見圖5。

圖5 qRT-PCR檢測LASP1 mRNA在不同組MGC-803中的表達(dá)(aP＜0.05，bP＜0.01，vs NC)Fig.5 Relative LASP1 mRNA expression level in MGC-803 cell line in different groups detected by qRT-PCR (aP＜0.05,bP＜0.01, vs NC)

6miR-143-3p下 調(diào)LASP1的 蛋 白 表 達(dá) 水 平Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-143-3p mimic組LASP1蛋白的表達(dá)水平較miR-143-3p mimic NC組顯著降低(P＜0.01)，而miR-143-3p inhibitor組中LASP1表達(dá)水平較miR-143-3p inhibitor NC組顯著上調(diào)(P＜0.01)。Western blot結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)miR-143-3p能夠在蛋白水平下調(diào)LASP1的表達(dá)。見圖6。

圖6 Western blot檢測LASP1蛋白在不同組MGC-803中的表達(dá)A：Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果；B：Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析 (bP＜0.01，vs NC)Fig.6 Relative protein expression level of LASP1 in MGC-803 in different groups detected by Western blot A: Results of Western blot; B: Statistical analysis of experimental results of Western blot (bP ＜ 0.01, vs NC)

討 論

胃癌是全球特別是東亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，胃癌在我國發(fā)病率及死亡率高、早期診斷率低，絕大多數(shù)患者就診時(shí)已處于進(jìn)展期。腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥治療面臨的巨大挑戰(zhàn)之一，包括胃癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的確切分子機(jī)制仍不清楚。腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生通常涉及上皮細(xì)胞極性的喪失、與基底膜連接的分離、細(xì)胞間黏附的降低，從而導(dǎo)致更多“游離”腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，在新的遠(yuǎn)隔部位增殖、擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移[13]。發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞更容易逃避化療藥物的殺傷作用，因而轉(zhuǎn)移常導(dǎo)致癌癥治療失敗。因此，更好地了解腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制可能有助于發(fā)現(xiàn)新的胃癌治療靶點(diǎn)，從而改善胃癌患者預(yù)后。

LASP1基因定位于染色體17q21上，該基因可編碼一種肌動蛋白結(jié)合蛋白，最早在人乳腺癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)。LASP1蛋白最初被確定為一種細(xì)胞骨架蛋白，而近年來大量的數(shù)據(jù)表明它可以執(zhí)行多種角色，包括細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等[7,14]。此后，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，LASP1在多種高侵襲、高轉(zhuǎn)移性癌中顯著高表達(dá)，癌組織中LASP1的上調(diào)可能通過與細(xì)胞骨架的相互作用和核易位的增加共同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移[15]。此外，Ruggieri等[16]認(rèn)為LASP1為惡性腫瘤的侵襲和遷移鋪平了道路。

miRNA作為非編碼RNA家族的一員，可通過特異性結(jié)合靶基因mRNA 的3’-UTR，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。越來越多的證據(jù)表明，miRNA與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，如miRNA-200家族、miRNA-455等多種miRNA參與腫瘤轉(zhuǎn)移過程[17-18]。miR-143-3p定位于染色體5q32，在諸多癌癥中發(fā)揮抑癌作用[19-22]。Ding等[23]報(bào)道m(xù)iR-143-3p可直接靶向癌基因CTNND1，并進(jìn)一步調(diào)控MAPK、ROCK和Wnt等多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，最終抑制結(jié)直腸癌的進(jìn)展。此外，研究發(fā)現(xiàn)一些miRNA分子可靶向LASP1抑制腫瘤的增殖、侵襲和遷移[24-25]。因此，本文聚焦轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白LASP1，探討miR-143-3p能否通過靶向LASP1抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR-143-3p可能靶向于LASP1，雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)miR-143-3p可通過靶向結(jié)合LASP1基因的3’-UTR區(qū)發(fā)揮作用。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及劃痕愈合實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-143-3p可顯著抑制胃癌MGC-803細(xì)胞的侵襲和遷移能力。qRTPCR及Western blot實(shí) 驗(yàn)證實(shí)miR-143-3p能同時(shí)在mRNA及蛋白質(zhì)水平下調(diào)LASP1的表達(dá)。

綜上所述，本研究首次證實(shí)LASP1為miR-143-3p的一個直接靶基因，并且miR-143-3p可通過靶向下調(diào)LASP1，進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。本研究進(jìn)一步豐富了miRNAs參與腫瘤轉(zhuǎn)移過程的理論研究，為胃癌轉(zhuǎn)移的治療提供了新的可能靶點(diǎn)。然而，本研究的局限性在于miR-143-3p下調(diào)LASP1抑制胃癌細(xì)胞侵襲和遷移的下游信號通路尚未闡明，相關(guān)研究結(jié)果還有待進(jìn)一步的動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，我們團(tuán)隊(duì)在今后的工作中也將持續(xù)關(guān)注和研究。

利益沖突：本文所有作者不存在利益沖突。