云南省楚雄地區豬戊型肝炎血清流行病學調查

段天才，楊貴樹，蘇瓊珍，張海玲

（1.楚雄市動物疫病預防中心，云南 楚雄 675000；2.云南農業大學動物科學技術學院，云南 昆明 650201；3.楚雄市呂合鎮農業農村服務中心，云南 楚雄 675009；4.楚雄市東瓜鎮農業農村服務中心，云南 楚雄 675005）

0 引言

戊型肝炎這一疾病屬于一種自限性、急性疾病，是由戊型肝炎病毒感染導致。在1989年東京國際非甲非乙型肝炎學術會議上，正式定名為戊型肝炎（HE）[1]。戊型肝炎病毒（hepatitisEvirus，HEV）是一種經腸道傳播的肝炎病毒，豬是主要的病毒儲庫[2]。我國豬場養殖中，存在較為復雜的戊肝病毒流行情雜，往往具備較高的感染率，且同一區域可能會存在不同基因型混合感染的情況。病毒會進行基因重組，可以不斷遺傳進化在防治上存在一定難度[3]。

我國許多地區已有豬HE流行的報道，目前云南省尚沒有文獻報道。將云南省楚雄地區主要規模化豬場及屠宰廠的豬作為研究對象，通過血清學調查分析的方式，了解豬戊型肝炎的流行情況，掌握云南省楚雄地區是否有該病的存在及其流行分布情況，為深入開展云南省楚雄地區豬HE的病毒分離、分子流行病學調查、傳播途徑、發病機制研究及建立相應的檢測和防制技術奠定基礎[4-8]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清來源

2015年6月至2016年4月，隨機選擇云南省楚雄地區幾個大型屠宰場和養殖場，采集血液樣品，共計307份。置于37 ℃溫箱1 h，3 000 r/min室溫離心10 min，取上清，置于--20℃冰箱中凍存待檢，樣品采集情況見表1。

表1 血清樣本采集情況

1.1.2 儀器材料

1.5 mL離心管、高速離心機、低溫冰箱、移液槍、恒溫培養箱、洗板機（BioTekElx50TM）、酶標儀（BioTekElx800TM），由云南農業大學動物醫學實驗教學中心提供。

1.1.3 檢測試劑盒

檢測過程中，應用到的方法是酶聯免疫法，試劑盒是在北京萬泰生物藥業股份有限公司購買的豬戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒。

1.2 試驗方法

將試劑盒平衡至室溫約30 min。選擇50 mL濃縮洗滌液（20×），通過蒸餾水進行稀釋，使其變為1 000 mL，以備后續使用。通過微孔板按照順序進行樣品編號，設置3個陰性對照孔、2個陽性對照孔、1個空白對照孔，其中，空白對照空中無需添加酶標試劑與樣品。所有孔中加入100 μL樣品稀釋液，隨后將待檢樣品及10 μL的隱性對照與陽性對照，通過輕微振蕩后，使其混合均勻。封板后，將其放置于溫度為37 ℃的環境中，半小時后，將封板膜去掉，利用洗板機進行洗滌，通常要洗5遍，最后一次應盡量減少其中水分。除空白孔外，所有對照孔均應加入100 μL的酶標二抗。同樣，通過封板膜進行封板處理，將其放置在37 ℃環境中，放置半小時后，將封板膜揭掉，用洗板機進行5遍洗滌，盡量將其中水分排干。將顯色劑A、B放如各孔中，加入量均為50 μL，并振蕩均勻，放置于37 ℃避光環境下，顯色15 min。將50 μL終止液加入到每個孔洞中，搖晃均勻，通過450 nm/630 nm酶標儀雙波長，進行各孔A值測定。

1.3 結果判定

陰性對照孔A值不可超過0.1，若通過實際測量發現存在A值超過0.1的孔，應將該孔舍棄，如果大于0.1的孔超過1個，應重復實驗。陽性對照孔A值不應低于0.8，若有兩孔A值在0.8下，則需要重復實驗。

臨界值計算中，需要求得陰性對照孔A值均值，隨后加上0.16，得出的數則為臨界值。若樣品A值≥臨界值，說明抗體反應陽性，相反，則說明抗體反應陰性。

1.4 統計學處理

利用SPSS統計學軟件，進行所有數據的統計學分析。

2 結果與分析

（1）在所檢測的307份血清樣品中，共有173份陽性血清，總體陽性率為56.35%。表明豬戊型肝炎在云南楚雄地區的流行較嚴重，檢測結果見表2。

表2 樣品中HEV-IgG抗體的診斷結果

（2）在所檢測的307份血清樣品中，129份采自育肥豬，81份呈陽性，陽性率為62.79%，73份采自仔豬，21份呈陽性，陽性率為28.77%。表明育肥豬戊肝感染率高于仔豬戊肝感染率。育肥豬與仔豬的戊肝感染在統計學上存在顯著性差異（P＜0.05），檢測結果見表3。

表3 不同年齡段豬血清樣品HEV-IgG抗體診斷結果

（3）在所檢測的307份血清樣品中，88份采自母豬，62份呈陽性，陽性率為70.45%，17份采自公豬，9份呈陽性，陽性率為52.94%。表明性別對抗體水平測定值有影響，母豬的戊肝感染率顯著高于公豬的感染率（P＜0.05），檢測結果見表4。

表4 母豬、公豬血清樣品HEV-IgG抗體診斷結果

（4）在所檢測的307份血清樣品中，有178份來自各個養殖場，檢測陽性率為51.68%，129份來自屠宰場，檢測陽性率為62.79%。結果發現屠宰場豬比養殖場豬出現較高的血清抗體陽性率，檢測結果見表5。

表5 不同場所豬血清樣品HEV-IgG抗體診斷結果

3 討論

（1）戊型肝炎暴發流行的主要傳播途徑是經水傳播，因為飲用了沒有經過煮沸的河水，導致該疾病的流行，接觸污水可能是維持感染HEV的重要危險因素[9]。

（2）統計學分析表明云南省楚雄地區豬HEVIgG陽性率與年齡呈顯著相關，本研究中育肥豬陽性率要高于仔豬的，這與國內報道不同年齡段表現出不同的HEV-lgG陽性率，3月齡以上豬戊肝血清抗體陽性率要高于3月齡以下豬的陽性率的結果相一致[10]。統計學分析也表明母豬的戊肝感染率顯著高于公豬的感染率（P＜0.05）。屠宰場豬比養殖場豬出現較高的血清抗體陽性率。目前，國內外文獻對不同種用豬戊肝感染率差異未見報道，統計學分析的結果是由于豬感染戊肝后不同種用豬自身產生抗體的差異還是統計樣品數量大小差異因素造成還有待進一步探索[11-12]。相關報道中顯示，如果豬場存在良好的飼養條件，則不會存在較高的戊型肝炎病毒感染率，研究中發現云南省楚雄地區豬存在較高的戊型肝炎病毒陽性率[13]。

4 結束語

關于云南省流行HE的基因型情況，還有待于進行病毒學鑒定。實驗主要應用到的是酶聯免疫吸附測定法，在此基礎上，調查該地區大型豬場及屠宰場的戊型肝炎病毒流行情況，了解豬HE在楚雄地區的發生流行情況及其流行規律，探索有效的防制方法，對建立公共衛生防疫措施具有重要科學意義和應用價值。