卵泡抑素相關基因3 對腫瘤相關巨噬細胞在乳腺癌增殖、遷移和侵襲中的機制研究

呂凌云，彭宇，魯亞琴，房賀，陳艷，姜玉，汪志平

世界衛生組織國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC）發布的2020 年全球癌癥數據顯示，乳腺癌是目前全球新增發病人數最多的癌癥［1］。在女性人群中，乳腺癌的發病率和死亡率呈現出逐年上升的趨勢。控制乳腺癌的發生與發展，成為防治乳腺癌亟待解決的問題。

腫瘤相關巨噬細胞（tumor-associated macrophages，TAMs）是來源于外周血和組織中的巨噬細胞，占腫瘤質量的50%［2］。乳腺癌患者體內TAMs的積累通常與預后不良、治療耐藥和疾病復發有關［3］。TAMs 是連接炎癥和腫瘤的關鍵細胞，可通過釋放多種細胞因子和基質蛋白酶直接促進腫瘤的發生、發展和轉移，或通過介導腫瘤血管生成和免疫抑制間接促進腫瘤生長［4］。TAMs 已成為癌癥治療的重要靶點。

卵泡抑素相關基因3（follistatin-related gene 3，FSTL3）是一種致癌基因，編碼分泌型糖蛋白，與腫瘤細胞增殖和轉移密切相關［5］。臨床乳腺癌患者的腫瘤上皮細胞中具有FSTL3 高表達，提示FSTL3 可能參與調控乳腺癌的發生、發展，并可作為乳腺癌診斷的潛在血漿標志物［6］。最近有研究發現，FSTL3可通過調控骨形成蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）信號通路，促進M2 型巨噬細胞極化，從而促進腫瘤進展［7］。但FSLT3 是否能夠直接調控巨噬細胞的促腫瘤功能，還不清楚。本研究旨在評估FSTL3 在乳腺癌患者TAMs 中的表達，并探索FSTL3 是否可通過調控巨噬細胞的極化，促進乳腺癌的發展,為將來研究乳腺癌的致病機制和治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源 收集2018 年3 月至2021 年3 月在海軍軍醫大學第一附屬醫院接受切除手術的21 例乳腺癌患者的腫瘤及其癌旁組織（距腫瘤邊緣≥3 mm）。所有患者均是原發病例，手術前未接受放療和化療。該研究方案在海軍軍醫大學第一附屬醫院倫理委員會的監督下獲得批準和實施（CHEC2017-096），患者均簽署知情同意書。

1.1.2 主要材料 人單核細胞白血病細胞株THP-1 和人乳腺癌細胞株MCF7 購自中科院上海細胞庫，胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、DMEM 和RPMI1640 培養基購自Giboco 公司，干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、白細胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、TRIzol 試劑和LipofectamineTM3000 購自Invitrogen 公司，RNA 逆轉錄試劑盒和SYBR Green 試劑購自上海翌圣公司，Percoll 分離液、基質膠、佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）購自Sigma公司，細胞計數試劑盒CCK8 試劑購自南京諾維贊公司，Transwell 小室購自康寧公司，CD14 抗體、CD86 抗體、CD206 抗體購自BD 公司，FSTL3 抗體、3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體購自Proteintech 公司，FSTL3 和GAPDH 引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，si-FSTL3 和si-陰性對照（si-Negative Control，NC）通過Merck 公司合成。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 MCF7 和THP-1 在37℃，5%CO2條件下培養。DMEM 和RPMI1640 培養基中含0.1 mg/ml 鏈霉素、青霉素和10%FBS。MCF7 使用DMEM 培養基培養，THP-1 使用RPMI1640 培養基培養，每2 d 更換1 次新鮮培養基。當細胞在其達到70%～90%密度，進行細胞傳代或實驗。

1.2.2 原代巨噬細胞的分離及培養 將收集的乳腺癌腫瘤及其癌旁組織轉移至培養皿中，使用PBS浸泡并洗滌3 次。將組織剪成細小碎塊，加入2 mg/ml的Ⅳ型膠原蛋白酶和0.25 mg/ml 透明質酸酶重懸組織，并轉移至離心管。37 ℃，180 r/min 恒溫消化2 h，每30 min 吹打1 次。消化所得細胞懸液過40 μm 篩網，收集濾過夜，2 000 r/min 離心5 min。使用PBS 重懸細胞，利用percoll 法分離巨噬細胞。吸取中間白色層巨噬細胞，用于后續實驗。

1.2.3 PMA/IFN-γ 和PMA/IL-4 誘導THP-1 細胞將THP-1 細胞按3×105個/ml 數量鋪至6 孔板內。加入含終濃度50 ng/ml PMA 的培養基誘導24 h后，獲得初始巨噬細胞。棄培養液，PBS 清洗細胞。分別加入含終濃度20 ng/ml IFN-γ 和20 ng/ml IL-4的培養基誘導48 h，使細胞分化為M1 型和M2 型巨噬細胞。

1.2.4 siRNA 細胞轉染 將THP-1 按3×105個/ml數量接種至6 孔板中，在細胞培養箱中培養過夜。按照LipofectamineTM3000 轉染試劑說明將si-FSTL3和si-NC 轉染至THP-1 中。更換新鮮培養基后繼續培養2 d，進行后續實驗。

1.2.5 THP-1 細胞分組以及THP-1 和MCF7 細胞共孵育 將THP-1 細胞分為5 組：使用PMA、PMA/IFN-γ 和PMA/IL-4 誘導THP-1 為初始、M1 型和M2型巨噬細胞，分別為PMA 組、PMA/IFN-γ 組、PMA/IL-4 組；采用脂質體轉染法將si-FSTL3、si-NC 轉染至THP-1，再使用PMA/IL-4 誘導轉染后的THP-1，分別為si-FSTL3 組、si-NC 組。

將MCF7 按3×105個/ml 接種至6 孔板中，細胞培養箱中培養過夜，待細胞完全貼壁后，分別加入各組巨噬細胞上清繼續孵育12 h。孵育后的MCF7細胞用于后續實驗。

1.2.6 流式細胞術檢測巨噬細胞分型 收集各組巨噬細胞，PBS 洗滌細胞2 次。隨后利用不同熒光標記的CD14 抗體、CD86 抗體、CD206 抗體在4℃孵育40 min，染色后細胞重懸在流式細胞分析染色液（flow cytometry staining，FCS）buffer 中進行上機檢測。使用FlowJo 10.0 軟件進行流式數據分析，用前向角散射（forward scatter，FSC）和側向角散色（side scatter，SSC）設門圈出活細胞群，通過CD14 設門圈出巨噬細胞群；通過CD86 設門圈出M1 型巨噬細胞；通過CD206 設門圈出M2 型巨噬細胞。

1.2.7 CCK8 細胞增殖實驗 將各組細胞按5×104個/ml 數量接種于96 孔板中，細胞培養箱中培養過夜，待細胞完全貼壁后。分別繼續培養24、48 和72 h。根據CCK8 檢測試劑說明進行細胞增殖實驗，使用酶標儀檢測450 nm 波長下的吸光值。

1.2.8 細胞侵襲實驗 在小室（transwell）中鋪上基質膠，小室浸沒在含DMEM 培養基的24 孔板中。將各組MCF7 按3×105個/ml 數量接種至小室中。在細胞培養箱中培養24 h。取出小室置于室溫，使用4% 的多聚甲醛固定20 min，再用0.1% 結晶紫染色20 min，最后用PBS 洗滌2 次后在顯微鏡下拍照并計數，隨機取10 個視野，取平均數，每組重復6 次。

1.2.9 細胞劃痕實驗 將MCF7 按3×105個/ml 數量接種至6 孔板中，細胞培養箱中培養過夜，待細胞完全貼壁后。用槍頭尖端在各組細胞上進行垂直劃痕。使用PBS 洗滌細胞2 次，在顯微鏡下拍照記錄。繼續培養24 h 后再次拍照記錄，通過Image J 軟件進行距離測量，每組重復6 次。

1.2.10 實時熒光定量聚合酶鏈式反應法 按照RNA 提取試劑說明書方法提取各組細胞RNA，使用反轉錄試劑盒將RNA 反轉錄成cDNA。隨后使用SYBR Green 進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qualitative real time polymerase chain reation，qRTPCR)。FSTL3 上游引物：5’-GTGCCTCCGGCAACATTGA-3’下 游 引 物：5’-GCACGAATCTTTGCAGGGA-3'；GAPDH 上游引物：5’-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3’，下游引物：5’-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-3。反應條件：95℃預變性1 min；95℃20 s，60℃1 min；72℃延伸5 min，共40個循環。GAPDH 為內參基因，采用2－ΔΔCT法計算FSTL3 的相對表達量，實驗重復3 次。

1.2.11 Western blotting 法 在各組細胞中加入RIPA 裂解液（含蛋白酶抑制劑）裂解細胞，離心收集上清液。通過BCA 法測定上清液的蛋白濃度，按30 μg/孔進行SDS-PAGE 凝膠電泳。隨后依次進行轉膜、抗原封閉、一抗孵育（4℃，12 h）。第2 天加入熒光二抗孵育，最后加入曝光液在凝膠成像儀下拍照。一抗稀釋比例：FSTL3（1∶1 000）、GAPDH（1∶3 000）。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析。計量資料以±s表示，組間單因素比較使用Student’st檢驗分析，雙因素比較使用two-way ANOVA 分析。P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌TAMs 分型和FSTL3 表達量檢測

采用流式細胞術檢測乳腺癌腫瘤及其癌旁組織中巨噬細胞分型，結果顯示腫瘤組織中CD206 陽性的巨噬細胞比例高于癌旁組織，兩者比較差異具有統計學意義（P<0.05），而CD86 陽性的巨噬細胞比例與癌旁組織相比無明顯差異。見表1。說明乳腺癌TAMs 呈M2 型極化。qRT-PCR 結果顯示腫瘤組織中TAMs 的FSTL3 mRNA 表達水平高于癌旁組織，差異具有統計學意義（P<0.05），說明乳腺癌TAMs 高表達FSTL3。見表2。

表1 乳腺癌及其癌旁組織中TAMs 分型檢測（%，±s，平行樣例數n=3）

表1 乳腺癌及其癌旁組織中TAMs 分型檢測（%，±s，平行樣例數n=3）

注：與癌旁組織比較aP<0.001

組織腫瘤組織癌旁組織CD206 55.35±2.32a 15.23±1.25 CD86 12.72±0.23 14.36±0.57

表2 乳腺癌及其癌旁組織中FSTL3 的mRNA 水平（± s，平行樣例數n=3）

表2 乳腺癌及其癌旁組織中FSTL3 的mRNA 水平（± s，平行樣例數n=3）

注：與癌旁組織比較aP<0.001；FSTL3 為卵泡抑素相關基因3

FSTL3 mRNA 12.32±0.97a 1.01±0.21組織腫瘤組織癌旁組織

2.2 PMA/IFN-γ 和PMA/IL-4 誘導THP-1 分型鑒定和FSTL3 表達量檢測

對PMA、PMA/IFN-γ 和PMA/IL-4 誘導后的THP-1 巨噬細胞進行細胞分型鑒定，流式細胞術結果顯示，與PMA 組相比，PMA/IFN-γ 組CD86 陽性細胞的比例增加，差異具有統計學意義（P<0.05）。與PMA 組相比，PMA/IL-4 組CD206 陽性細胞的比例增加，差異具有統計學意義（P<0.001）。見表3。說明PMA/IFN-γ 和PMA/IL-4 分別誘導THP-1 為M1 和M2 型巨噬細胞成功。qRT-PCR 和Western blot 結果顯示與PMA 組相比，PMA/IL-4 組細胞FSTL3 mRNA 和蛋白表達水平增加，差異具有統計學意義（P<0.001），而PMA 組和PMA/IFN-γ 組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表4、圖1。說明PMA/IL-4 誘導后的M2 型THP-1 巨噬細胞FSTL3 表達水平增加，與乳腺癌TAMs 表型更為接近，因此選擇此組細胞進行后續研究。

表4 M1 型和M2 型巨噬細胞中FSTL3 的mRNA 和蛋白水平（± s，平行樣例數n=3）

表4 M1 型和M2 型巨噬細胞中FSTL3 的mRNA 和蛋白水平（± s，平行樣例數n=3）

注：與PMA 組比較aP<0.001；IFN-γ 為干擾素-γ，IL-4 為白細胞介素-4，PMA 為佛波酯，FSTL3 為卵泡抑素相關基因3，GAPDH 為3-磷酸甘油醛脫氫酶

FSTL3 蛋白0.24±0.11 0.38±0.13 1.21±0.12a組別PMA 組PMA/IFN-γ 組PMA/IL-4 組FSTL3 mRNA 1.00±0.24 0.92±0.26 6.35±0.87a

圖1 M1 型和M2 型巨噬細胞中FSTL3 蛋白水平檢測

表3 誘導THP-1 為M1 及M2 型巨噬細胞鑒定（%，± s，平行樣例數n=3）

表3 誘導THP-1 為M1 及M2 型巨噬細胞鑒定（%，± s，平行樣例數n=3）

注：與PMA 組比較aP<0.001；IFN-γ 為干擾素-γ，IL-4 為白細胞介素-4，PMA 為佛波酯

CD206 8.34±2.12 8.25±2.32 89.92±3.39a組別PMA 組PMA/IFN-γ 組PMA/IL-4 組CD86 7.24±1.28 87.12±4.25a 9.74±1.74

2.3 TAMs 促進MCF7 細胞增殖

收集PMA 和PMA/IL-4 誘導后的THP-1 巨噬細胞上清與MCF7 細胞共孵育，采用CCK8 檢測MCF7 細胞24、48、72 h 的增殖情況。結果顯示與PMA 組相比，PMA/IL-4 組細胞的增殖能力增加，在72 h 時差異具有統計學意義（P<0.01）。見表5。說明TAMs 上清能夠促進乳腺癌細胞增殖。

表5 M2 型巨噬細胞對MCF7 細胞增殖能力的影響（± s，平行樣例數n=3）

表5 M2 型巨噬細胞對MCF7 細胞增殖能力的影響（± s，平行樣例數n=3）

注：與PMA 組比較aP＜0.01；IL-4 為白細胞介素-4，PMA 為佛波酯

72 h 0.74±0.04 0.97±0.12a組別PMA 組PMA/IL-4 組24 h 0.28±0.03 0.28±0.02 48 h 0.45±0.02 0.47±0.02

2.4 TAMs 促進MCF7 細胞遷移和侵襲

收集PMA 和PMA/IL-4 誘導后的THP-1 巨噬細胞上清與MCF7 細胞共孵育，通過Transwell 實驗檢測對MCF7 細胞侵襲能力的影響。結果顯示與PMA 組相比，PMA/IL-4 組細胞侵襲能力增加，差異具有統計學意義（P<0.001）。見圖2A、表6。采用細胞劃痕檢測對MCF7 細胞遷移能力的影響。結果顯示與PMA 組相比，PMA/IL-4 組細胞24 h 內相對遷移能力增強，差異具有統計學意義（P<0.001）。見圖2B、表6。說明TAMs 上清能夠促進乳腺癌細胞遷移和侵襲。

圖2 M2 型巨噬細胞對MCF7 細胞侵襲和遷移能力的影響

表6 M2 型巨噬細胞對MCF7 細胞侵襲和遷移能力的影響（± s，平行樣例數n=6）

表6 M2 型巨噬細胞對MCF7 細胞侵襲和遷移能力的影響（± s，平行樣例數n=6）

注：與PMA 組比較aP＜0.01；IL-4 為白細胞介素-4，PMA 為佛波酯

組別PMA 組PMA/IL-4 組相對遷移率（%）16.32±0.77 24.24±2.16a侵襲細胞數（個）143±6 248±8a

2.5 沉默FSTL3 對TAMs 極化影響

使用si-NC 和si-FSTL3 分別轉染THP-1 細胞后，再使用PMA/IL-4 進行誘導，通過qRT-PCR 和Western blotting 檢測FSTL3 的mRNA 和蛋白表達水平。結果顯示與si-NC 組相比，si-FSTL3 組細胞FSTL3 的mRNA 和蛋白表達水平降低，差異具有統計學意義（P<0.01）。見圖3、表7。說明沉默FSTL3 有效拮抗PMA/IL-4 誘導的TAMs FSTL3 表達水平增加。通過流式細胞術檢測si-NC 組和si-FSTL3 組巨噬細胞分型，結果顯示與si-NC 組相比，si-FSTL3 組CD206 陽性細胞的比例減少，差異具有統計學意義（P<0.001），而2 組間CD86 陽性細胞的比例無明顯差異。見表8。說明沉默FSTL3 有效拮抗PMA/IL-4 誘導THP-1 向M2 型TAMs 極化。

圖3 沉默FSTL3 對TAMs 中FSTL3蛋白表達水平的影響

表7 沉默FSTL3 的mRNA 和蛋白表達（± s，平行樣例數n=3）

表7 沉默FSTL3 的mRNA 和蛋白表達（± s，平行樣例數n=3）

注：與si-NC 組相比aP<0.01；FSTL3 為卵泡抑素相關基因3，GAPDH 為3-磷酸甘油醛脫氫酶

FSTL3 蛋白0.43±0.08 0.22±0.07a組別si-NC 組si-FSTL3 組FSTL3 mRNA 1.00±0.12 0.26±0.04a

表8 沉默FSTL3 對TAMs 極化影響（%，± s，平行樣例數n=3）

表8 沉默FSTL3 對TAMs 極化影響（%，± s，平行樣例數n=3）

注：與si-NC 組相比aP<0.001；FSTL3 為卵泡抑素相關基因3，TAMs 為腫瘤相關巨噬細胞

CD206 87.13±2.63 43.21±3.63a組別si-NC 組si-FSTL3 組CD86 8.93±1.36 8.34±1.73

2.6 沉默FSTL3 拮抗TAMs 對MCF7 細胞的促增殖作用

收集si-NC 組和si-FSTL3 組上清與MCF7 細胞共孵育，采用CCK8 檢測MCF7 細胞24、48、72 h 的增殖情況。結果顯示與si-NC 組相比，si-FSTL3 組細胞的增殖能力減弱，在72 h 時差異具有統計學意義（P<0.05）。見表9。說明沉默FSTL3 有效拮抗TAMs 促進MCF7 細胞增殖的能力。

表9 沉默FSTL3 對TAMs 促MCF7 細胞增殖作用中的影響（± s，平行樣例數n=3）

表9 沉默FSTL3 對TAMs 促MCF7 細胞增殖作用中的影響（± s，平行樣例數n=3）

注：與si-NC 組相比aP＜0.05；IL-4 為白細胞介素-4，PMA 為佛波酯，FSTL3 為卵泡抑素相關基因3

72 h組別24 h 48 h 0.82±0.09 0.63±0.08a PMA 組PMA/IL-4 組0.29±0.01 0.29±0.04 0.52±0.02 0.46±0.02

2.7 沉默FSTL3 拮抗TAMs 對MCF7 細胞的促遷移和侵襲作用

收集si-NC 組和si-FSTL3 組上清與MCF7 細胞共孵育，通過Transwell 實驗檢測對MCF7 細胞侵襲能力的影響。結果顯示與si-NC 組相比，si-FSTL3組細胞侵襲數量減少，差異具有統計學意義（P<0.05）。見圖4A、表10。采用細胞劃痕檢測對MCF7 細胞遷移能力的影響。結果顯示與si-NC 組相比，si-FSTL3 組細胞24 h 內相對遷移能力減弱，差異具有統計學意義（P<0.05）。見圖4B、表10。說明沉默FSTL3 有效拮抗TAMs 促進MCF7 細胞遷移和侵襲的能力。

圖4 沉默FSTL3 對TAMs 促進MCF7 細胞侵襲和遷移的影響

表10 沉默FSTL3 對TAMs 促進MCF7 細胞侵襲和遷移能力的影響（± s，平行樣例數n=6）

表10 沉默FSTL3 對TAMs 促進MCF7 細胞侵襲和遷移能力的影響（± s，平行樣例數n=6）

注：與si-NC 組比較aP＜0.05；FSTL3 為卵泡抑素相關基因3，TAMs 為腫瘤相關巨噬細胞

相對遷移率（%）20.15±1.38 12.63±0.43a組別si-NC 組si-FSTL3 組侵襲細胞數（個）145±5 109±7a

3 討論

乳腺癌是全球女性癌癥相關死亡的主要原因之一，由于其高復發率和轉移率，導致其死亡率呈逐年上升趨勢［8］。目前的乳腺癌治療是以手術治療為主，再輔以放療、化療內分泌治療、靶向治療等綜合治療，但乳腺癌的存活率因分期不同仍有很大差異［9］。乳腺癌的發生發展與長期的慢性炎癥有關，炎癥下巨噬細胞浸潤，分化為經典活化巨噬細胞M1 型和替代活化巨噬細胞M2 型［10］。Sousa 等［11］發現，在乳腺癌的腫瘤微環境中，乳腺癌細胞分泌因子調節巨噬細胞向M2 型分化。Li 等［12］發現，通過抑制TAMs 的數量來重塑免疫抑制性腫瘤微環境（tumor microenvirmment，TME），能夠抑制乳腺癌的免疫逃逸和轉移。Mu 等［13］的研究表明，乳酸可以通過細胞外調節蛋白激酶/信號轉導與轉錄激活因子（extracellular regulated protein kinases/signal transducer and activator of transcription3，ERK/STAT3）信號通路刺激巨噬細胞M2 型極化，以促進乳腺癌增殖、遷移和血管生成，從而驅動乳腺癌發展。本研究顯示，乳腺癌患者的腫瘤組織中的TAMs 呈M2型極化，極化后的TAMs 可以促進乳腺癌細胞的增殖以及遷移，說明巨噬細胞向M2 型巨噬細胞極化在乳腺癌的發生發展中扮演重要角色。

近年越來越多的研究表明，FSTL3 與癌癥的發病機制相關。FSTL3 在非小細胞肺癌組織中的表達增加，在體外和體內，敲低FSTL3 顯著抑制了肺癌細胞的活力和遷移、侵襲能力［14］。Razanajaona 等［15］發現，在乳腺癌中FSTL3 通過抵消激活素來促進腫瘤細胞的增殖。此外最新研究發現FSTL3 家族成員可作為乳腺癌的替代標志物，也可以作為人類浸潤性乳腺癌的預后標志［16］。本研究發現，乳腺癌TAMs 中FSTL3 的表達明顯增加，暗示FSTL3 影響TAMs 在乳腺癌中的作用。已有文獻報道，在許多疾病模型中，FSTL3 被證明和巨噬細胞之間存在相互作用。在動脈粥樣硬化中，FSTL3 促進巨噬細胞中的脂質積累，刺激巨噬細胞分泌炎性細胞因子和趨化因子從而加重疾病的進展［17］。Liu 等［7］發現，在胃癌患者中FSTL3 表達與M2 浸潤呈正相關，FSTL3 的過表達促進M2 型TAMs 的增殖，FSTL3敲低后降低了胃癌細胞遷移和侵襲能力。此外，FSTL3 還可以通過促進巨噬細胞和成纖維細胞極化和T 細胞耗竭形成抑制性免疫微環境來加速結腸癌的發生［18］。本研究發現PMA/IL-4 誘導THP-1 向M2 型TAMs 極化后，FSTL3 的表達水平增加，而沉默FSTL3 有效拮抗PMA/IL-4 誘導THP-1 向M2 型TAMs 極化，說明FSTL3 能夠促進巨噬細胞向M2 型極化的過程。當FSTL3 過表達時，能夠促進TAMs對于MCF7 增殖、遷移及侵襲的作用，而沉默FSTL3，將拮抗TAMs 對MCF7 細胞的促進惡化作用。上述結果說明在乳腺癌中，FSTL3 通過促進TAMs 的M2 型分化，促進了癌細胞的增殖、遷移和侵襲。

綜上所述，乳腺癌患者腫瘤組織中存在的TAMs 呈M2 型極化，FSTL3 在TAMs 中呈現高表達。FSTL3 通過促進TAMs 的M2 型極化增加了MCF7 細胞的增殖、遷移和侵襲。以上結果初步明確了FSTL3 及M2 型TAMs 在乳腺癌發生發展中的作用，可為進一步探討乳腺癌增殖和轉移機制提供新的思路。