糧食中真菌毒素檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

劉 嵐

（新疆維吾爾自治區(qū)糧油產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，新疆 烏魯木齊 830017）

糧食是人類(lèi)不可或缺的物質(zhì)基礎(chǔ)，若糧食安全無(wú)法得到有效保證，會(huì)引發(fā)一系列社會(huì)問(wèn)題[1]。其中，真菌毒素在糧食中的影響極其廣泛，目前已知的真菌毒素已達(dá)400 余種，約有3/4 被確定對(duì)人體健康會(huì)產(chǎn)生影響，根據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球每年約有2%的糧食因真菌毒素污染而無(wú)法食用，讓本就面臨糧食危機(jī)的各國(guó)雪上加霜[2]。隨著人們糧食安全意識(shí)的覺(jué)醒，食品安全問(wèn)題已然占據(jù)主導(dǎo)地位，針對(duì)真菌毒素帶來(lái)的影響，必須采取必要的技術(shù)監(jiān)測(cè)行動(dòng)，在快速檢測(cè)領(lǐng)域主動(dòng)作為，幫助人們遠(yuǎn)離真菌毒素帶來(lái)的糧食污染，營(yíng)造良好的食品安全社會(huì)氛圍。

1 真菌毒素檢測(cè)概述

真菌毒素（Mycotoxins）是由真菌生長(zhǎng)代謝產(chǎn)生的毒素統(tǒng)稱(chēng)，真菌毒素對(duì)于糧食的影響巨大，諸多糧食極易受到真菌的感染，進(jìn)而產(chǎn)生損害人體健康的真菌毒素，根據(jù)相關(guān)研究證實(shí)，真菌毒素屬于潛在的致癌物質(zhì)，一旦誤食將嚴(yán)重威脅人們的生命安全[3-5]。 目前，全球約有100 余個(gè)國(guó)家及地區(qū)，出臺(tái)了比較嚴(yán)格的真菌毒素限量規(guī)定，且形成了豐富的真菌毒素快速檢測(cè)方法，為真菌毒素的有效控制提供了出路。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)對(duì)于真菌毒素的研究也在快速推進(jìn)，重點(diǎn)在于突出對(duì)檢測(cè)技術(shù)的創(chuàng)新，嘗試?yán)眉夹g(shù)手段打造檢測(cè)閉環(huán)。在糧食中較為常見(jiàn)的真菌毒素，包括玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）、赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）、黃曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）及伏馬毒素（Fumonisins，F(xiàn)Bs）等類(lèi)型，且在《食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中，對(duì)不同類(lèi)型的真菌毒素進(jìn)行了明確的規(guī)定，以確保糧食的食用安全[6-8]。因此，面對(duì)日益復(fù)雜的真菌毒素問(wèn)題，必須要依據(jù)更有效的快速檢測(cè)方式，避免其對(duì)人體健康帶來(lái)傷害，力求持續(xù)改善糧食的安全現(xiàn)狀。

2 真菌毒素快速檢測(cè)技術(shù)

2.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法誕生于20 世紀(jì)70年代，是較早的檢測(cè)技術(shù)之一，具有準(zhǔn)確、快速、特異等特征，可對(duì)諸多類(lèi)型的真菌毒素進(jìn)行快速檢測(cè)，加之其較為合理的檢測(cè)成本，在糧食安全領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[9]。

根據(jù)對(duì)酶聯(lián)免疫法測(cè)定原理分析，即將具備良好免疫活性的抗原、抗體預(yù)先結(jié)合至所準(zhǔn)備的固相載體表面，在開(kāi)展技術(shù)檢測(cè)時(shí)依據(jù)規(guī)范的程序，將樣品與酶標(biāo)抗原或抗體相結(jié)合，借助反應(yīng)形成抗原或抗體復(fù)合物[10]。在結(jié)合反應(yīng)完成后，分析酶標(biāo)抗原或抗體與樣品抗原或抗體的比例，再對(duì)反應(yīng)液中的多余物質(zhì)進(jìn)行清洗，以酶反應(yīng)底物進(jìn)行催化獲得有色產(chǎn)物[11]。結(jié)合其檢測(cè)反應(yīng)的原理，可有效分析兩者之間的反應(yīng)關(guān)系，即其顏色的變化程度與抗體或抗原比例有關(guān)，因此可通過(guò)定性或定量分析，獲得真菌毒素在樣品中的具體含量值。

有研究者利用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行了實(shí)踐，其針對(duì)牛奶制品及嬰兒奶制品中的AFM1含量進(jìn)行檢測(cè)，在此過(guò)程中制備了黃曲霉毒素M1(AFM1)特異性的單克隆抗體，由此進(jìn)一步增加了檢測(cè)的靈敏性和準(zhǔn)確性[12]。ROSSI 等[13]利用酶聯(lián)免疫法，對(duì)肉雞及其飼料進(jìn)行了AFB1的檢測(cè)，通過(guò)制備AFB1特異性單克隆抗體，分別測(cè)得其含量為1.25 μg·kg-1和1.41 μg·kg-1，實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)方式的成功應(yīng)用。

2.2 液相色譜法

在真菌毒素的檢測(cè)中，液相色譜法屬于常用方式之一，其優(yōu)勢(shì)在于能夠同時(shí)實(shí)施定性及定量分析。結(jié)合真菌毒素檢測(cè)的實(shí)際情況，在檢測(cè)的過(guò)程中往往易受到諸多條件干擾，甚至產(chǎn)生相互制約的情況，為使檢測(cè)能達(dá)到最佳效果，在檢測(cè)實(shí)踐環(huán)節(jié)應(yīng)注重綜合分析，以最佳配比呈現(xiàn)檢測(cè)的精準(zhǔn)性。

采用液相色譜法時(shí)，需要結(jié)合真菌毒素的特點(diǎn)，如部分自發(fā)光的真菌毒素檢測(cè)，可利用熒光檢測(cè)器的液相色譜法分析，或根據(jù)檢測(cè)對(duì)象的具體特點(diǎn)，對(duì)照熒光所產(chǎn)生的強(qiáng)度變化進(jìn)行分析，以強(qiáng)化檢測(cè)設(shè)備的準(zhǔn)度[14]。在熒光信號(hào)增強(qiáng)方面，可選擇運(yùn)用溴碘或環(huán)糊精等衍生劑幫助衍生。目前，國(guó)內(nèi)研究者對(duì)于該檢測(cè)方法也有相關(guān)研究。例如，何學(xué)超等[14]在糧食對(duì)黃曲霉毒素B 族的檢測(cè)中，對(duì)不同檢測(cè)方法前處理技術(shù)的比較分析，包括以柱后衍生、熒光檢測(cè)、紫外檢測(cè)為主的分離檢測(cè)技術(shù)，以及免疫親和柱凈化、硅膠凈化、固相萃取等，證實(shí)液相色譜法的應(yīng)用極具優(yōu)勢(shì)。

此外，有研究者對(duì)玉米產(chǎn)品的玉米赤霉烯酮進(jìn)行檢測(cè)，采用反相高效液相色譜法選取粉碎后的玉米樣品，再利用90%的乙腈溶液，結(jié)合提取、過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)、蒸發(fā)、濃縮、分離、儀器檢測(cè)及定量等過(guò)程，對(duì)玉米中的玉米赤霉烯酮進(jìn)行了測(cè)定，其日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.8%，日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.0%，檢出限為10 μg·kg-1[15-16]。

2.3 氣相色譜法

氣相色譜法在真菌毒素的檢測(cè)中，多用于對(duì)弱熒光或弱吸收，以及不含發(fā)色或熒光基團(tuán)的檢測(cè)[17]。其主要是源于該檢測(cè)方法的特殊性，可對(duì)缺少羥基基團(tuán)的A 類(lèi)單端孢霉烯族化合物實(shí)施檢測(cè)，檢測(cè)的效果優(yōu)于其他檢測(cè)方式，因此也成為該類(lèi)真菌毒素的有效檢測(cè)方法。

通常情況下，氣相色譜法利用電子捕獲檢測(cè)器對(duì)真菌毒素進(jìn)行檢測(cè)，但分析前的衍生化屬于氣相色譜法的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，一般以硅烷化試劑作為衍生試劑，以避免受樣品基質(zhì)及檢測(cè)要求差異性帶來(lái)的影響，全面提升檢測(cè)的有效性和精確性。例如，俞瓊等[17]在研究中針對(duì)玉米中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇實(shí)施檢測(cè)，以氯仿-乙醇對(duì)樣品實(shí)施處理，在硅膠柱凈化后，使用甲苯-丙酮和二氯甲烷-甲醇分別進(jìn)行洗柱和洗脫，配合電子捕獲檢測(cè)器對(duì)玉米樣品實(shí)施測(cè)定，其檢出限為10 μg·kg-1。

2.4 免疫膠體金

免疫膠體金屬于一種較為創(chuàng)新的快速檢測(cè)技術(shù)，在實(shí)踐應(yīng)用中表現(xiàn)出諸多的優(yōu)勢(shì)，包括時(shí)間短、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等，尤其是不需要依賴專(zhuān)業(yè)儀器，可隨時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，因此也被廣泛應(yīng)用于大批量樣品的檢測(cè)領(lǐng)域[18-20]。由于該技術(shù)未來(lái)的廣泛應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，以及在不同真菌毒素中的應(yīng)用，目前已經(jīng)成為一種極具普遍性的快篩檢測(cè)方法。

在具體的應(yīng)用環(huán)節(jié)，可利用結(jié)合墊作為膠體金標(biāo)記特異性抗體的承載，再利用試紙條對(duì)樣本進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)試劑緩慢移動(dòng)至真菌毒素抗原區(qū)域，通過(guò)與膠體金標(biāo)志試劑間的反應(yīng)，使檢測(cè)帶上顯示顏色，以此作為判斷真菌毒素含量的對(duì)照依據(jù)。根據(jù)現(xiàn)階段的研究成果顯示，免疫膠體金主要應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)閱畏N真菌毒素的檢測(cè)，同時(shí)在多種真菌毒素檢測(cè)中也有應(yīng)用案例。桑曉霞等[20]在檢測(cè)中結(jié)合新抗體的應(yīng)用，制備了免疫膠體金檢測(cè)試紙，在AFB1檢測(cè)中的檢出限為1 μg·kg-1，且與黃曲霉毒素?zé)o交叉反應(yīng)。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，隨著食品安全要求的不斷提升，對(duì)于真菌毒素的檢測(cè)也將更加嚴(yán)格，必須持續(xù)挖掘真菌毒素快速檢測(cè)技術(shù)的潛力，配合現(xiàn)階段的糧食安全監(jiān)測(cè)需求，做好各類(lèi)糧食的檢測(cè)分析，確保為社會(huì)提供安全可靠的糧食。從技術(shù)層面上看，包括酶聯(lián)免疫法、液相色譜法、氣相色譜法和免疫膠體金等在內(nèi)的快速檢測(cè)技術(shù)，仍然需要加緊創(chuàng)新與實(shí)踐，保證快速檢測(cè)技術(shù)的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性和普及性，以及采取更加豐富的檢測(cè)技術(shù)手段，做好糧食安全領(lǐng)域的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)工作，竭力為社會(huì)糧食安全提供強(qiáng)大的技術(shù)支持。