瓜類細(xì)菌性果斑病生防菌的篩選、鑒定及發(fā)酵液抑菌穩(wěn)定性研究

王雪妍， 岳丹丹， 潘夢(mèng)詩(shī)， 張志龍， 張英濤

（河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司，鄭州 450008）

瓜類細(xì)菌性果斑病是由燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N（Acidovorax avenaesubsp.citrulli）引起的種傳性細(xì)菌病害，可侵染葉子也可侵染果實(shí)［1-2］. 目前該病害的防治手段主要以化學(xué)防治為主，但化學(xué)防治手段不利于環(huán)境保護(hù)，且殘留的藥物會(huì)危害人畜健康，因此生物防治成為解決化學(xué)防治弊端的重要措施. 本試驗(yàn)從土壤中分離篩選得到一株瓜類細(xì)菌性果斑病的生物防治菌株BP-12，并對(duì)其進(jìn)行了鑒定，又從溫度耐受性、pH耐受性以及紫外照射時(shí)間耐受性3個(gè)方面對(duì)該菌株發(fā)酵液的抑菌穩(wěn)定性展開(kāi)研究.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源

土壤樣品取自河南省周口市種植西瓜的土壤. 病原菌來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌種編號(hào)ACCC05732.

1.1.2 培養(yǎng)基

NB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L、牛肉膏3 g/L、NaCl 5 g/L，pH 7.3.

NA培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L、牛肉膏3 g/L、NaCl 5 g/L、瓊脂18 g/L，pH 7.3.

KB培養(yǎng)基：蛋白胨20 g/L、K2HPO41.5 g/L、MgSO4·7H2O 1.5 g/L、瓊脂18 g/L、甘油10 mL/L，pH 7.2.

1.2 方法

1.2.1 生物防治菌株的篩選

初篩：取10 g 土壤樣品，加入裝有90 mL 無(wú)菌水和8～10 個(gè)已滅菌的玻璃珠的三角瓶中，180 r/min 振蕩30 min，充分打散土樣，梯度稀釋后取100 μL涂布于NA平板，30 ℃，培養(yǎng)1～2 d；挑取具有明顯差異的菌落，經(jīng)平板劃線純化后，編號(hào)并保藏備用.

復(fù)篩：挑取病原菌種于NB培養(yǎng)基中，30 ℃，180 r/min，培養(yǎng)48 h；吸取病原菌液2 mL于KB平板上，輕輕晃動(dòng)平板，將菌液布滿整個(gè)平板，放置5～10 min；將平板傾斜吸出多余的菌液，開(kāi)蓋在無(wú)菌環(huán)境中晾干培養(yǎng)基平板表面［3］，將初篩得到的菌株點(diǎn)種到平板上，30 ℃，培養(yǎng)48 h；篩選出具有抑菌圈的菌株，并將其進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，選擇拮抗作用穩(wěn)定且效果較好的菌株.