清喉咽合劑生產工藝中影響玄參成分變化的因素及環節分析

羅朝亮，韋開聽，陳 路，陸永梅

（1 廣西藥用植物園制藥廠 廣西 南寧 530023）

（2 廣西藥用植物園科研部 廣西 南寧 530023）

玄參藥材來源為玄參科植物玄參的干燥根。玄參化學成分主要含有環烯醚萜苷類、苯丙素苷類、揮發油和有機酸等，巴哈苷、哈巴俄苷為環烯醚萜苷類化合物，是玄參主要成分之一。根據《中國藥典》，目前玄參藥材含量質量控制以哈巴苷，哈巴俄苷含量為控制指標。環烯醚萜苷類化合物對光、熱、氧氣、酶不穩定，極易發生氧化或水解；玄參藥材中的哈巴俄苷含量差異大且不穩定。玄參藥材在生產過程中受到溫度、氧氣等因素影響，可能導致哈巴苷、哈巴俄苷降解，致使產品含量降低。為探索玄參成分在生產中的動態變化，本研究對哈巴苷、哈巴俄苷兩項指標性成分進行質量研究，對制劑質量進行控制。

1.清喉咽合劑法定生產工藝

地黃、麥冬、玄參、連翹、黃芩等粉碎成粗粉，取處方量粗粉，用57%乙醇作溶劑，浸漬24 h 后以1 mL/min 的速度滲漉，收集漉液約6 000 mL，減壓回收乙醇并濃縮至約1 400 mL，加水8 00 mL，煮沸30 min，靜置48 h，濾過，濾渣用少量水洗滌，并入濾液中，減壓濃縮至約1 000 mL，加苯甲酸鈉3 g，攪勻靜置24 h，濾過，取濾液，加水使成1 000 mL，攪勻，即得。

2.清喉咽合劑玄參關鍵工藝點動態監測點

見圖1。

圖1 關鍵工藝點動態監測點

3.工藝研究過程

3.1 清喉咽合劑中玄參哈巴苷、哈巴俄苷含量方法測定研究[1,7-8]

儀器與原輔料。（1）實驗儀器與試劑：101-4-S-II電熱恒溫鼓風干燥箱（上海躍進）、FW100 高速萬能粉碎機（泰斯特）、滲漉裝置（自制）、量筒（蜀牛）、98-1-B 型電子調溫電熱套（泰斯特）、ESSENTIA-LC-16 高效液相色譜儀（日本島津）、GR-202 電子天平（日本AND）等。（2）原輔料：地黃（廣西某公司，0301 批）；麥冬（四川樣品，0501 批）；玄參（陜西樣品，0401 批）；連翹（山東樣品，0401 批）；黃芩（山東樣品，0402 批）；乙醇（廣西，0501 批）；苯甲酸鈉（廣西，1201 批）、液相用甲醇、乙腈為色譜純。玄參哈巴苷哈、巴俄苷含量測定方法。（1）色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.03%磷酸溶液為流動相B，按流動相比例表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為210 nm。理論塔板數按哈巴苷與哈巴俄苷峰計算應不低于5 000，流動相比例見表1。（2）對照品溶液制備：精密稱取哈巴苷對照品、哈巴俄苷對照品適量，加30%甲醇配制成每1 mL 含哈巴苷60 μg、哈巴俄苷20 μg 的混合溶液。（3）供試品溶液制備：精密稱取清喉咽合劑3 g（藥材細粉1 g），加至25 mL 量瓶中，加甲醇至24 mL，超聲30 min。放冷加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液。（4）測定方法：精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定，即得。計算公式：供試品含量（%）=C×A×V/A×W。

表1 流動相比例表

3.2 樣品制備

（1）前處理。①地黃、麥冬、玄參前處理：取藥材揀選，洗凈，75 ℃干燥8 h，粉碎成粗粉。取玄參粗粉，檢測哈巴苷、哈巴俄苷含量。連翹揀選后粉碎成粗粉。②黃芩：揀選，沸水中煮10 min，75 ℃干燥8 h，粉碎成粗粉。（2）滲漉。按法定工藝滲漉，收集滲漉液，取樣檢測。（3）滲漉液濃縮。取滲漉液濃縮至1 400 mL，取樣檢測。（4）加水煮沸、靜置、過濾、濃縮。取濃縮液加水攪勻，煮沸30 min，靜置過濾，濾渣用水洗后并入濾液中，攪勻，濃縮，取樣檢測。

4.玄參哈巴苷含量測定

4.1 玄參哈巴苷含量測定方法（同3.1.2 檢測方法）

4.2 玄參哈巴苷含量測定方法專屬性

（1）對照品與陰性對照：陰性樣品中哈巴苷無相關干擾峰影響，哈巴俄苷會落在一個峰高巨大拖尾峰上，受干擾嚴重，高效液相色譜法（high performance liquid chromatography, HPLC）見圖2。（2）對照品與供試品：供試樣品中哈巴苷有相關峰響應，哈巴俄苷落在一個峰高巨大拖尾峰上，受干擾嚴重。高效液相色譜圖見圖3。越相似色譜峰保留時間越相近，紫外特征吸收越相近，哈巴俄苷通過色譜柱分離-紫外吸收檢查要求色譜柱分離條件從色譜柱，流動相要求很高，研究時間長復雜，清喉咽合劑中哈巴俄苷受雜質峰干擾，無法定量檢測，而哈巴苷專屬性較強，因此選擇哈巴苷作為控制指標。（3）哈巴苷、哈巴俄苷保留時間及相對標準偏差（relative standard deviation, RDS）滿足小于2%的要求，見表2。

表2 保留時間及偏差

圖2 對照品與陰性對照高效液相色譜法圖譜

圖3 對照品與供試品高效液相色譜法圖譜

4.3 哈巴苷重復性試驗連續進樣6 次，對照品峰面積平均值254 667.3、RSD 為0.45%，供試品峰面積平均值119 170.5、RSD 為1.04%，重復性標準偏差滿足小于2%。

4.4 玄參哈巴苷加樣回收率試驗

加樣回收率供試品溶液制備：精密稱取清喉咽合劑0.6 g，移入體積數對照品濃度相同的量瓶中，加甲醇至24 mL 后超聲30 min。放冷加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。含量低于0.1%的回收率應滿足92%～102%，試驗回收率范圍為95.3%～100.2%，符合要求。

4.5 對照品線性范圍

取 同 一 個 哈 巴 苷 對 照 品 分 別 進 樣2 μL，5 μL，10 μL，15 μL，20 μL，求 進 樣 體 積 與 對 照 品 峰 面 積線 性 方 程， 結 果y = 25 313x+6 942.9，R= 0.999 4，R = 0.999 70。

5.實驗結果

5.1 玄參在不同烘干條件哈巴苷、哈巴俄苷含量變化[9-10]

數據顯示溫度越高，降解越快，可考慮控制溫度與時間減少哈巴苷降解，見表3。

表3 玄參藥材不同烘干條件哈巴苷、哈巴俄苷含量變化表

5.2 合劑生產各關鍵工序點哈巴苷含量變化（溶液已折算相對密度）

見表4。

表4 清喉咽合劑生產過程中哈巴苷含量變化表

5.3 另取合劑成品進行滅菌條件考察

蒸汽105 ℃條件下滅菌0.5 h，含量平均下降38.40%；滅菌1.0 h，含量平均下降52.59%；滅菌1.5 h，含量平均下降60.63%。100 ℃條件下滅菌0.5 h，含量平均下降33.27%；滅菌1.0 h，含量平均下降41.69%；滅菌1.5 h，含量平均下降51.10%。80 ℃條件下滅菌0.5 h，含量平均下降25.41%；滅菌1.0 h，含量平均下降33.59%；滅菌1.5 h，含量平均下降40.09%。

以上數據顯示，合劑中哈巴苷在煮沸100 ℃、105 ℃加壓滅菌過程降解明顯，在80 ℃滅菌，降解比100 ℃時少約8%，滅菌效果需認證。

6.結論

玄參經揀選、洗凈、干燥后哈巴苷、哈巴俄苷含量下降約4.8%，主要損失在干燥過程。玄參哈巴苷提取轉移率為35.9%～41.5%，其中滲漉工序轉移率可達68.6%～78.4%，濃縮過程損失較大，滲漉液濃縮后哈巴苷含量損失為24.6%～31.3%。合劑煮沸1 h 后含量下降約40%。提示玄參哈巴苷、哈巴俄苷在水溶液中受熱不穩定，可能進一步分解成其他成分，該步驟尚需進一步探索。濃縮環節的損失破壞較大，建議縮短濃縮時間及控溫，以減少哈巴苷、哈巴俄苷的降解。