宮頸癌患者化療前后宮頸上皮組織Bcl-2和MACCI蛋白表達及ROC預測效能

樊 毓， 鄧 罕， 唐 斌

(貴州醫科大學附屬醫院病理科， 貴州 貴陽 550000)

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，經流行病學調查[1]，該病占據我國女性生殖系統惡性腫瘤的首位。由于腫瘤細胞侵襲力強、惡性程度高，極易出現淋巴結轉移，對預后具有較大影響，對此需盡早治療[2]。隨著臨床研究和化療基礎的發展，化療越來越受到學者重視，術前進行化療干預能夠減少宮頸癌不良預后因素，縮小腫瘤，提高手術療效[3]。然而，隨著對腫瘤機制深入研究，學者發現腫瘤發生不僅涉及腫瘤細胞失控性增殖，還與細胞凋亡調節失衡有關，例如細胞死亡和細胞分裂均可決定癌生長速度，故需注重細胞基因檢測[4]。B淋巴細胞瘤-2基因(Bcl-2)是一種細胞凋亡的抑制基因，參與了細胞凋亡調控過程，在腫瘤組織中存在異常表達[5]；結腸癌轉移相關基因1蛋白(MACCI)具有調控HGF/c-Met信號通路功能，作為一種關鍵性信號傳導通路調節因子，在腫瘤侵襲、增殖中具有一定作用[6]。然而，目前臨床關于MACCI、Bcl-2與宮頸癌關系研究報道較少，尚未得出定論，基于此，本文進一步分析MACCI、Bcl-2在預測宮頸癌發生、預后中效能。具體如下文。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析的121例宮頸癌患者(宮頸癌組)、89例宮頸上皮內瘤變(宮頸瘤變組)均在2018年3月至2020年11月期間收集。宮頸癌組患者均為已婚女性，平均年齡(48.39±5.41)歲；中高分化83例，低分化38例；腺癌42例，鱗癌79例；FIGO分期：ⅠBI期39例、ⅠB2期44例、ⅡA期27例、ⅡB期11例。宮頸瘤變組均為已婚女性，平均年齡(48.58±5.88)歲。納入標準：①宮頸癌組患者符合《2012宮頸癌臨床實踐指南》[7]中關于宮頸癌診斷標準，且出現陰道異味(腥臭味)、陰道排血性液或白色液、陰道不規則出血；②宮頸瘤變組符合《ASCCP 2019版指南》[8]中關于宮頸上皮內瘤變診斷標準，且出現陰道分泌物增多、伴或不伴有異味、性接觸后出血；③均需接受MACCI、Bcl-2檢測；③臨床資料齊全。排除標準：①合并癲癇等神經系統疾病者；②合并其他惡性腫瘤者；③合并多臟器功能衰竭或障礙者。

1.2治療方法:根據宮頸癌組患者全身狀況、病情制定個體化治療方案。本次均采用順鉑聯合伊立替康化療方案。第1d靜脈滴注60mg/m2伊立替康、60mg/m2順鉑，持續滴注60min，7d為一療程，每療程第1d重復注射，連續治療2-4個療程。采用實體瘤療效評價標準，完全緩解(CR)：病灶消失；部分緩解(PR)：病灶長徑縮小≥30%；疾病穩定(SD)：病灶長徑縮小但未達PR；疾病進展(PD)：出現新病灶或病灶長徑增加≥20%?；煙o效=SD+PD；化療有效=CR+PR。

1.3檢測方法:主要試劑：Bcl-2為鼠抗人單克隆抗體，MACCI為兔抗人多克隆抗體，均由英國Abcam公司提供；DAB顯色劑由上海寶曼生物公司提供；由北京中山生物公司提供SP免疫組化試劑盒。實驗方法：使用免疫組化SP法檢測MACCI、Bcl-2表達。將宮頸組織連續切片，保持3μm厚度，放入枸櫞酸鹽緩沖液(0.01M)內高壓2min，冷卻15min后，沖洗三次，使用PBS，再滴入生物素-親和素(5%)系統室溫下靜放10min。再加入兔抗MACCI或鼠抗Bcl-2多克隆抗體一抗，在低溫(4℃)環境下過夜孵育，沖洗三次，加入生物素化的山羊抗兔IgG，放置在常溫環境下25min，再沖洗三遍，滴加辣根酶標記鏈霉卵白素(1∶100)，沖洗四次，每次5min，再加入DAB顯色劑，放于室溫狀態下。最后用蘇木素復染2min、脫水、封片、觀察。結果判定：MACCI、Bcl-2表達采用北京航空學院圖像分析管理軟件對切片進行分析，在×100的低倍鏡下攝取bmp圖像，每張切片鎖定5個視野，得出光密度值和每張切片的平均值。細胞凋亡結果分析：每張切片計算5個高倍視野下細胞總數和凋亡細胞數，計算凋亡指數。

2 結 果

2.1對比兩組MACCI、Bcl-2表達:宮頸癌患者的MACCI、Bcl-2表達含量高于宮頸瘤變組(P<0.05)。見表1。

表1 對比兩組MACCI Bcl-2表達情況

2.2分析各項指標診斷宮頸癌價值：ROC曲線分析顯示，MACCI、Bcl-2表達分別診斷宮頸癌的AUC值為0.924、0.968。具體見表2。ROC曲線見圖1。

圖1 MACCI、Bcl-2診斷宮頸癌的ROC曲線

表2 分析MACCI Bcl-2診斷價值

2.3比較不同療效的MACCI、Bcl-2表達：宮頸癌患者化療后MACCI、Bcl-2表達含量低于化療前(P<0.05)。見表3。

表3 對比化療前后MACCI Bcl-2表達

2.4分析相關性：Spearman法分析，療效與MACCI、Bcl-2呈正相關性(P<0.05)。見表4。

表4 分析療效與MACCI Bcl-2相關性

2.5分析各項指標預測療效價值：ROC曲線分析顯示，MACCI、Bcl-2預測療效的AUC值分別為0.765、0.937。具體見表5。ROC預測曲線見圖2。

表5 分析MACCI Bcl-2預測宮頸癌療效價值

圖2 MACCI、Bcl-2預測療效的ROC曲線

3 討 論

宮頸癌是因人乳頭瘤病毒感染引起的病變，據統計，全球約有40萬新發病例，位居婦科惡性腫瘤之首[9]。宮頸癌早期可出現下身腫痛、陰道排液、接觸性出血，對日常生活造成一定影響，因此需盡早診療。化療作為癌癥術前常用方案，能夠通過縮小腫塊，為手術成功打下良好基礎，但隨著相關研究增多，學者發現即便接受化療、手術干預后，宮頸癌復發率仍較高，因此尋找可靠的監測指標已迫在眉睫。有研究顯示[10]，細胞凋亡在腫瘤發生、發展、轉歸中均具有一定價值，其中MACCI、Bcl-2均參與了腫瘤抗凋亡過程。

Bcl-2屬于抗凋亡基因，廣泛存在于卵巢、宮頸、膀胱、乳腺、胃等組織內，能夠通過多種途徑抑制細胞凋亡，在腫瘤發生、發展中具有緊密關系，是近年來備受關注的基因之一。目前認為Bcl-2抗凋亡的機制在于：①維持細胞鈣穩態；②防止激活凋亡蛋白酶；③抑制Bak、Bax細胞毒作用；④抗氧化。Bax基因是Bcl-2的拮抗因子，與Bcl-2呈相反作用，當Bax蛋白占據優勢時，代表癌細胞趨于凋亡，反之當Bcl-2蛋白占據優勢時，代表癌細胞區域存活[11]。本次結果顯示，宮頸癌患者的Bcl-2表達含量高于宮頸瘤變組，說明Bcl-2表達含量與宮頸癌發生存在一定關聯，尤其是受到癌變因子活性影響，導致Bcl-2表達升高。而化療后患者Bcl-2表達有所降低，是因化療藥物能夠通過遏制腫瘤發展勢頭，促使凋亡細胞增多，抑制癌細胞活躍，從而降低Bcl-2表達，減少癌癥轉移和復發，提高治愈率，反向說明Bcl-2與宮頸癌患者預后存在一定關聯[12]。

MACCI基因定位于染色體7p21.1，是一種結腸癌轉移相關基因，主要生理功能是參與信號通路傳導調節，可調控腫瘤生長及轉移，促進腫瘤侵襲和增殖。有研究表明[13]，當MACCI與c-Met啟動子相結合后，可激活促分裂原活化蛋白激酶和HGF/c-Met傳導通路，驅動MACCI正反饋循環，一旦傳導信號被激活，可導致c-Met基因發生磷酸化，引發各種生物學反應，尤其在腫瘤細胞增殖、侵襲以及上皮間質轉化、血管生成中均具有一定作用。本次結果顯示，宮頸癌相比于宮頸上皮內瘤變患者MACCI蛋白表達更高，提示MACCI蛋白表達異常與腫瘤發生存在一定關系，且較良性腫瘤患者更高，說明在癌細胞早期發生中具有重要作用。同時宮頸癌患者化療后MACCI蛋白表達有所降低，是因通過化療藥能夠抑制腫瘤增殖及轉移，從而降低MACCI蛋白表達。為了進一步佐證MACCI、Bcl-2與宮頸癌發生、發展的關系，本次建立了ROC曲線模型分析，結果顯示，MACCI、Bcl-2分別診斷宮頸癌的AUC值為0.924、0.968，預測宮頸癌療效的AUC值為0.765、0.937，說明MACCI、Bcl-2在評估宮頸癌發生、發展、預后轉歸中均具有較高效能。然而，在分析指標相互影響關系時，通過Pearson模型分析，結果顯示，MACCI與Bcl-2呈正相關性，說明兩者存在相互影響關系，可起到一定協同作用，且在分析療效與兩者關系時，結果顯示，療效與MACCI與Bcl-2表達均呈正相關性，說明MACCI與Bcl-2共同參與了宮頸癌發生、發展。

綜上所述，MACCI、Bcl-2在宮頸癌患者中，存在高表達，且與宮頸癌發生、轉歸存在一定關聯，通過連續監測，能夠對預后評估起到重要作用。但本研究也存在一定局限性，首先取材局限可能帶來誤差，其次化療藥選擇、取量是否會影響MACCI、Bcl-2表達未深入探索，對此關于MACCI、Bcl-2預測效能還有待進一步探索。