一種油乳劑獸用疫苗冷鏈運輸方法的標準化建立

王福清，亢和平，邢 瑞，杜繼紅，趙麗霞，郭建軍，楊冬梅，烏日罕，郭 宇，齊 彪，張林沖

（1.中科醫藥行業生產力促進中心，北京 100038；2.金宇保靈生物藥品有限公司，內蒙古 呼和浩特 010111；3.北京市獸藥飼料監測中心，北京 101127；4.內蒙古自治區動物疫病預防控制中心，內蒙古 呼和浩特 010000；5.內蒙古自治區農畜產品質量安全中心，內蒙古 呼和浩特 010000）

0 引言

隨著我國規模化養殖的逐年發展，動物疫病的防控水平也隨之不斷提高，獸用疫苗作為動物疫病防控的主要措施，其質量對于動物疫病的防控效果起著至關重要的作用。獸用疫苗通常情況下是指用于免疫接種以達到預防動物病毒病、細菌病或寄生蟲病的生物制品。按照疫苗株構建技術或抗原設計技術的應用情況，可以分為傳統疫苗、亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗以及抗獨特型疫苗等。

獸用疫苗的生產工藝依據疫苗的材料、用途、劑型、接種方式、感染性不同，一般包括：培養、滅活、濃縮、純化、凍干、乳化、灌裝等關鍵技術。近些年，獸用疫苗的生產工藝有了長足的發展，尤其在大規模反應器、先進的純化技術用于獸用疫苗生產后，生產規模、產品質量都得到了顯著提升。

但是，疫苗質量的管控是一項系統工程，生產疫苗所用原輔材料的質量、生產工藝的水平、佐劑的效果以及疫苗的保存條件均對疫苗的“安全、高效、均一、穩定”的特性影響顯著。近些年，各企業對于原輔料均建立了嚴格的質量標準，生產工藝也從硬件、軟件不斷開發提升，佐劑也從傳統的鋁佐劑、弗氏佐劑等傳統佐劑陸續增加了納米材料佐劑、γ-干擾素（IFNγ）、白細胞介素（Interleukins，ILs），脂質體、免疫刺激復合物（ISCOMs）等新型免疫佐劑。但是，對于疫苗“高效、穩定”影響巨大的疫苗儲存、運輸技術未見深入研究報道。

冷鏈運輸是指運輸的全過程中運輸貨物始終保持一定的溫度，包括裝卸搬運、變更運輸方式以及更換包裝設備等環節。近些年，冷鏈運輸技術逐步成熟，包括移動制冷技術、保溫箱制造技術、冷鏈運輸監控及管理技術等方面發展有明顯提升。本文通過對獸用疫苗冷鏈運輸技術的發展現狀和水平進行總結和分析，為獸用疫苗的冷鏈技術進行深入研究，從而確保合格疫苗從生產端到用戶端的冷鏈保障，降低疫苗有效成分的裂解率，從而提高疫苗的“高效、穩定”特性，為疫苗的防疫效果打下堅實基礎。

1 材料

口蹄疫O 型疫苗、其它輔助材料，金宇保靈生物藥品有限公司。離心機，美國Beckman。其它耗材、試劑，金宇保靈生物藥品有限公司。

2 方法

2.1 保存方法。將口蹄疫O 型疫苗取樣檢測破乳146S、劑型，然后將疫苗分為3 組，每組12 個樣品，分別存放于-20℃、2～8℃以及25℃，每月取樣檢測146S、觀察劑型。

2.2 檢驗方法。采用蔗糖梯度離心法檢測146S；通過滴水試驗檢測疫苗劑型。

3 疫苗保存溫度標準建立方法

依據疫苗的特性，獸用疫苗的保存溫度一般包括-20℃、2～8℃兩種保存方法。其中活疫苗主要為凍干疫苗，該類疫苗一般需要在-20℃條件下儲存和運輸，防止病毒或細菌死亡導致效力降低；滅活疫苗一般需要添加佐劑，該類疫苗主要在2～8℃下儲存或運輸，不但要防止溫度過高，也要防止溫度低于0℃導致疫苗凍結，溫度異常會導致疫苗變性或疫苗的劑型發生改變。

3.1 疫苗保存溫度對有效性影響。疫苗保存溫度對于疫苗的效力有明顯的影響，疫苗保存溫度標準的建立是疫苗運輸條件設定的關鍵。試驗以口蹄疫O 型疫苗為例開展了一種疫苗的保存溫度標準建立，通過表1 可以看出，該口蹄疫疫苗在2～8℃下的裂解率最低，-20℃下裂解率在第10 個月達到94.8%，25℃在第8 個月達到100%。因此，從裂解率來看，口蹄疫O 型疫苗為了保證其效力，保存溫度應為2～8℃。詳細數據見表1；不同溫度下口蹄疫O 型疫苗穩定性對比如圖1 所示。

表1 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解對比（μg/ml）

圖1 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗146S 裂解率對比

3.2 疫苗保存溫度對穩定性的影響。疫苗保存溫度不僅影響疫苗的效力，同時對于疫苗的劑型也會存在很多不確定性因素。試驗仍以口蹄疫O 型疫苗為例開展了一種疫苗的保存溫度對疫苗穩定性影響的摸索。口蹄疫O 型疫苗是一種水包油包水型雙相疫苗，通過不同溫度保存可以看出，在2～8℃下該疫苗的劑型12 個月保持穩定，-20℃下1 個月發生分層，25℃下1 個月發生分層。因此，從穩定性來看，口蹄疫O 型疫苗為了保證其穩定性，保存溫度應為2～8℃。詳細數據見表2。

表2 不同保存溫度下口蹄疫O 型疫苗穩定性對比

通過以上試驗，從疫苗的有效性、穩定性兩個方面評價了口蹄疫O 型疫苗的保存溫度應為2～8℃。

4 疫苗保存、運輸環節關鍵點建立

建立疫苗保存溫度的標準后，應就疫苗保存、運輸的整個環節進行梳理，確定疫苗整個運輸過程可能影響溫度的環節，并建立相應制度以確保疫苗始終在標準溫度下進行操作和轉運。

4.1 疫苗出庫關鍵點建立。疫苗出庫包括裝卸、改變運輸方式、改變包裝設備等操作，該階段疫苗的溫度與疫苗的出庫時長有直接關系，出庫時長由轉運距離、單次出庫量決定。因此，在疫苗的出庫過程中應設定相應標準，盡量實現“門對門”，“快速”的操作原則，保證疫苗離開冷庫后及時轉運至冷鏈運輸車中。

4.2 疫苗運輸關鍵點建立。疫苗運輸過程中存在很多不確定性，冷鏈設備制冷異常、制冷不開、長時間停車等異常情況均會對疫苗的保存溫度造成影響。因此，該環節應建立溫度監控系統，如在線溫度遠程監控、冷鏈溫度記錄儀等設備。目前，溫度監控或記錄已陸續成為疫苗廠家必要冷鏈保障的方法，很多廠家采用車載溫度記錄儀、隨車電子溫度連續記錄儀、遠程監控APP 等相結合的方式監控疫苗運輸過程溫度。

5 疫苗終端儲存、使用關鍵點建立

5.1 疫苗終端儲存關鍵點建立。獸用疫苗在終端用戶處的儲存往往會被獸用疫苗廠家和用戶所忽略，其實該環節也是疫苗溫度保障的關鍵環節。獸用疫苗因使用環境的因素，往往會存在疫苗儲存量過大以及儲存條件不佳的情況。一般用戶會選擇將疫苗儲存在冰箱中，因儲存量大疫苗會貼壁，會造成貼壁疫苗溫度過低而發生凍結的可能；或者因冰箱沒有溫度校驗或故障，導致溫度不準造成疫苗高溫。因此，一方面如果采用冰箱儲存應保證單個冰箱的儲存數量，避免疫苗貼壁儲存，最好經驗證后再確定儲存量；其次要在冰箱中放置溫度計，定時觀測冰箱溫度，以保證冰箱溫度正常。

5.2 疫苗使用關鍵點建立。疫苗在使用前應做回溫處理，疫苗如果不回溫，直接接種動物，由于有30 多℃的溫度差，極易引起豬只“冷應激”，豬只痛感增強，甚至會導致免疫失敗。但是回溫過程應在監控范圍內進行，不能長時間回溫，可以采用水浴回溫、自然回溫等方法，回溫后應及時使用，避免回溫過度對疫苗質量造成影響。

6 儲存、運輸、使用不當示例

在疫苗儲存、運輸和使用過程中，因溫度異常的情況時有發生，如因制冷設備異常、環境溫度等因素使疫苗低于0℃導致疫苗凍結或高于8℃；油乳劑疫苗長時間儲存溫度超出2～8℃的范圍會導致有效成分裂解、疫苗分層，從而導致注射效力低、安全差等問題。如圖2 所示是由于低溫、高溫導致油乳劑疫苗發生分層的示例圖片。

圖2 油乳劑疫苗低溫（-15℃）凍結、高溫（37℃）后發生分層

7 討論與小結

綜上所述，本文建立了一種“儲存溫度評估—運輸環節關鍵點控制—終端用戶儲存、使用關鍵點管理”的流程規范，該方法就獸用疫苗從生產到終端使用過程的冷鏈保障提供了一種方法，以實現合格疫苗經運輸后不發生“安全、效力、均一、穩定”等質量方面的變化。