非小細胞肺癌患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平與臨床病理特征和預后的關系

鐘萍 張軍 凌華

近30年來我國肺癌死亡率增加了465%，其中非小細胞肺癌(Non small cell lung cancer，NSCLC)占80%～85%[1]。既往研究表明，即便是Ⅰ期患者，手術治療后仍有30%死于癌癥的復發或轉移[2]。故NSCLC的早期診斷和治療非常關鍵。糖類抗原(Carbohydrate antigen 125，CA125)在癌變后，其血清含量會升高[3]；基質金屬蛋白酶抑制劑-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)可特異性地與MMP-9結合，并抑制其活性，從而對腫瘤的生長表現為負性調節作用[4]；淀粉樣蛋白A(serum amyloid，SAA)不僅與淀粉樣變有關，還與惡性腫瘤存在著密切關系[5]。國內已有部分研究表明，上述血清指標均對于NSCLC具有較好的診斷價值，并認為可能會促進NSCLC患者腫瘤的侵襲、轉移[3-5]，但目前尚缺乏大量臨床研究去證實。故本研究旨在探討NSCLC的臨床病理特點、預后情況與血清CA125、TIMP-1、SAA水平之間的關系。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析本院2016年5月—2018年12月診治的96例NSCLC患者(研究組)臨床資料。納入標準：①均符合NSCLC診斷標準[6]，具體如下：既往存在長期吸煙史或不良空氣環境生活史；臨床癥狀以咳嗽、咯血、胸痛、肺部炎癥等為主；常規胸片或CT檢查顯示肺部存在毛刺、分葉、密度不均的腫塊；支氣管鏡檢查提示存在異型細胞。②均在治療前1周采用電化學發光法檢測血清CA125，采用酶聯免疫吸附法檢測血清TIMP-1、SAA水平；③患者臨床資料完整。排除標準：①繼發轉移性肺癌患者；②檢查時發現合并其他惡性腫瘤者；③隨訪(2019年2月—2021年2月)過程中的失訪人員。另選擇同期本院收治的肺部良性病變患者102例(A組)以及健康體檢者98例(B組)，三組研究對象均衡可比(P>0.05)(見表1)。本研究已經本院醫學倫理委員會批準(2022-05-13)，患者均知情同意。

表1 三組研究對象一般資料對比

二、研究方法

比較A組、B組以及研究組對象血清CA125、TIMP-1、SAA水平；收集研究組患者性別、年齡、TNM分期、病理類型、淋巴結轉移情況、分化程度等臨床病理特征，并分析上述血清指標與研究組患者臨床病理特征的關系；研究組患者均參照相關指南給予4～6個療程化療，化療方案：肺鱗癌患者采用多西他賽聯合順鉑方案：于化療前1 d靜脈滴注地塞米松(吉林敖東藥業集團延吉股份有限公司，國藥準字H22022888)8mg，2次/d，連用3d；并于化療第1d靜脈滴注多西他賽(揚子江藥業集團有限公司，國藥準字H20213629)70 mg/m2，化療第2～4d靜脈滴注順鉑(云南植物藥業有限公司，國藥準字H53021678)75mg/m2。肺腺癌患者采用培美曲塞聯合順鉑方案：化療前1d靜脈滴注地塞米松4 mg，2次/d，連用3d；并于化療第1d靜脈滴注培美曲塞(吉斯美(武漢)制藥有限公司/吉斯美(武漢)制藥有限公司，國藥準字H20213204)500 mg/m2，化療第2～d天靜脈滴注順鉑75 mg/m2。均完成2年隨訪調查，以總生存時間(OS，疾病診斷到末次隨訪或患者死亡時間)作為觀察終點，根據患者預后狀態分為生存組和死亡組，比較兩組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平，并采用Cox回歸分析影響NSCLC患者預后的因素。

三、實驗室檢測

清晨抽取空腹靜脈血5 mL(其中研究組、A組入院次日，B組體檢當日)。以400 r/min 10 min的條件進行離心分離，取上層清液于4℃冷凍保存。血清CA125水平采用電化學發光法檢測，液相試劑為M11單克隆抗體，固相試劑為OC125單克隆抗體，儀器選用全自動化學發光免疫分析儀(深圳邁瑞醫療，型號為CL-6000i)，取樣品50 μl、液相試劑50 μl、固相試劑250 μl，于37℃溫浴7 min。沖洗，然后加入堿性雙氧水激發反應，檢測發光強度，其強度與樣品濃度成正比。血清TIMP-1、SAA水平采用酶聯免疫吸附法檢測，具體操作步驟為，在微孔反應板中每孔加入待檢標本50 μl，設陰陽性對照各2孔、空白1孔，加入相應試劑；每孔加入酶結合物，37℃孵育30 min，洗板5次；每孔加顯色劑，37℃孵育15 min；每孔加終止液1滴，采用酶標儀讀數。

四、統計學分析

SPSS20.0統計軟件分析數據。性別為計數資料，以n(%)表示，行χ2檢驗，進一步兩兩比較行分割χ2檢驗；血清CA125、TIMP-1、SAA水平均為計量資料，以表示，三組間比較行單因素-方差分析，進一步兩兩比較行LSD-t檢驗；不同病理特征以及預后患者的血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較行t檢驗；采用Cox風險回歸模型篩選影響DLBCL預后的危險因素，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、三組研究對象血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

研究組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平均顯著高于A組、B組(P<0.05)(見表2)。

表2 三組研究對象血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

二、血清CA125、TIMP-1、SAA水平與臨床病理特征關系

不同性別、年齡、病理類型以及分化程度患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較無顯著差異，不同淋巴結轉移情況患者血清CA125水平比較無顯著差異(P>0.05)。但淋巴結轉移患者血清TIMP-1、SAA水平高于無轉移患者，Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)(見表3)。

表3 血清CA125、TIMP-1、SAA水平與臨床病理特征關系

三、不同預后患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

死亡組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平均顯著高于生存組(P<0.05)(見表4)。

表4 不同預后患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

四、NSCLC患者預后影響因素Cox回歸分析

以NSCLC是否死亡(死亡=1，生存=0)為因變量，以患者年齡(<60歲=1，≥60歲=2)、性別(男=1，女=2)、病理類型(鱗癌=1，腺癌=2)、分化程度(中、高分化=1，低分化=2)、TNM分期(Ⅰ～Ⅱ期=1，Ⅲ～Ⅳ期=2)、淋巴結轉移(有=1，無=2)、血清CA125、TIMP-1以及SAA水平(直接代入實際檢測水平值)為自變量，單因素以及多因素Cox回歸分析均證實CA125、TIMP-1、SAA水平的異常升高、淋巴結轉移以及Ⅲ～Ⅳ期均是導致NSCLC患者預后差的獨立危險因素(P<0.05)(見表5)。

表5 NSCLC患者預后影響因素Cox回歸分析

討 論

近年來，隨著細胞和分子生物學技術的不斷發展，人們對于NSCLC的發病、侵襲和轉移機制的研究不斷深入，并取得了一些階段性的研究成功。但NSCLC的發病率和死亡率仍未有明顯下降。故探索和研發新的血清腫瘤標志物對于NSCLC的診斷以及預后評估至關重要。NSCLC的發生發展與多種癌基因和抑癌基因有關，同時該癌癥還具有分階段變化的獨特生物學行為特點。

腫瘤標志物存在或者水平變化可較好的反映腫瘤的性質、發生、發展等[7]。CA125首次被發現是在1981年，通過卵巢漿液性腺囊瘤與骨髓瘤雜交獲得，主要儲存于細胞內，在正常人血清中含量極低。但一旦人體組織或細胞發生惡變，可立刻進入血液系統中。SAA主要由肝細胞分泌，是一種急性時相反應蛋白，主要運載高密度脂蛋白。研究發現，SAA與細胞粘附、增殖有關，并在部分惡性腫瘤中扮演重要角色[8-9]。燕丕宏[10]等人研究將SAA與CA125、CEA等血清腫瘤標志物聯合用于肺癌診斷，結果顯示均可較好的鑒別肺部的良、惡性腫瘤，但聯合的效果更好。本研究以健康者、肺部良性病變以及NSCLC三組對象為基準，分別對其血清CA125、SAA水平進行檢測，結果顯示研究組患者血清CA125、SAA水平均顯著高于A組、B組，與上述研究結果相一致，綜合分析上述實驗結果，血清CA125、SAA可能在NSCLC組織中起到癌基因的作用。進一步對NSCLC患者臨床病理特征以及預后進行分析，顯示淋巴結轉移患者血清SAA水平高于無轉移患者，Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、SAA水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，死亡組患者血清CA125、SAA水平均顯著高于生存組，同時Cox回歸分析均證實CA125、SAA水平的異常升高均是導致NSCLC患者預后差的獨立危險因素，提示血清CA125、SAA水平均與NSCLC的發生發展密切相關。分析上述結果產生原因，CA125主要在細胞內合成和儲存，NSCLC的發生會對正常細胞組織結構產生破壞，從而導致其中儲存的CA125大量被釋放至血液中，同時血清CA125的半衰期較短，故CA125水平變化可較好的反映腫瘤的近期變化狀態[11-12]。血清SAA可通過抑制腫瘤細胞與基質蛋白的結合，誘導MMPs的表達，從而在腫瘤的轉移、浸潤中發揮重要作用[13]。

TIMP-1是肺癌組織中常見的腫瘤標志物，可參與講解細胞外基質的調節過程，從而增強腫瘤的浸潤和轉移。李佳[14]等人通過將肺癌與健康者體內血清TIMP-1、NNP-9水平進行比較分析，發現兩者可相互作用，共同參與肺癌的發生、侵襲、轉移。本研究結果顯示研究組患者血清TIMP-1水平均顯著高于A組、B組，提示血清TIMP-1可能也在NSCLC組織中起到癌基因的作用。本研究還發現淋巴結轉移、Ⅲ～Ⅳ期患者血清TIMP-1水平均較高，Cox回歸分析也證實TIMP-1異常升高，是導致NSCLC患者預后差的獨立危險因素。筆者認為，TIMPs是MMPs的抑制劑，可能是通過與后者結合降低其活性，從而對MMPs降解基底膜的過程產生抑制作用，從而抑制腫瘤細胞沿著缺損的基底膜以及空隙進行浸潤和轉移[15]。

綜上所述，血清CA125、TIMP-1、SAA水平與NSCLC患者臨床分期、淋巴結轉移等臨床病理特征密切相關，其表達水平增高，是患者預后差的獨立危險因素。本研究需進一步完善和改進，增加體內外實驗，深入探索CA125、TIMP-1、SAA在NSCLC發生發展中的作用機制。