支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢及培養結果分析

張碧志，余澤明，曾躍芬，郭艷瓊，李紅賓

（1.昆明醫科大學第一附屬醫院皮膚科，云南 昆明 650031；2.昆明醫科大學第一附屬醫院呼吸科，云南 昆明 650031）

肺部真菌感染是指真菌侵入肺臟，所致肺臟組織的感染，起病隱匿、無特異性臨床表現及體征，漏診率高，預后差，死亡率高。目前臨床上對于肺部真菌感染診斷主要通過臨床表現結合實驗室檢查，如痰涂片真菌鏡檢［1］、G 試驗［2］、GM 試驗［3］及胸部CT 檢查綜合考慮，仍然難以能及時、準確診斷肺部真菌感染，故臨床上肺部真菌感染多為經驗性診斷［4-5］。故如何改良、完善現有的肺深部真菌感染的診斷手段和開發新方法，提高肺部真菌感染的檢出率，仍是臨床工作者面臨的挑戰［6］。支氣管纖維鏡是一種可以從呼吸道和肺泡中獲得肺泡上皮內液體的檢查方法，該項檢查目前主要應用于診斷肺部感染，尤其是免疫受損宿主中由機會性微生物引起的肺部感染［7］。目前支氣管肺泡灌洗液直接進行真菌鏡檢與培養鮮有報道，故我們使用該方法并結合患者影像學診斷做了分析，報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 昆明醫科大學第一附屬醫院2020 年10 月至2021 年7 月支氣管肺泡灌洗室行經支氣管鏡肺泡灌洗患者。

1.2 納入標準 ① 行經支氣管肺泡灌洗液檢查明確診斷患者；② 患者及其家屬知情、同意本研究。排除標準：① 嚴重心腦血管疾病患者；② 肝腎嚴重病變患者；③ 拒絕本研究檢查患者。

1.3 研究方法 對256 例患者的支氣管肺泡灌洗液進行真菌鏡檢及培養，分析患者臨床資料及檢查結果。

1.4 真菌鏡檢、培養及鑒定 支氣管肺泡灌洗液2ml置于凍存管中靜置2h，沉淀，棄上清液，使用無菌吸液器吸取1ml 液體至沙保氏培養基，置于35℃恒溫培養箱中培養，14d 無真菌生長判定為真菌培養陰性。管底吸取10ul 支氣管肺泡灌洗液于載玻片上，加入真菌熒光染液進行真菌直接鏡檢。酵母菌用科馬嘉顯色進行鑒定，絲狀真菌依據顯微鏡下形態學和生化特征鑒定［8］。

1.5 統計學方法 采用SPSS 21.0 進行統計分析，計數資料用（n，%）表示。

2 結果

2.1 一般資料 2020 年10 月至2021 年7 月昆明醫科大學支氣管灌洗室行經支氣管肺泡灌洗256 例患者，培養陽性20 例（7.81%），其中男性患者13 例（65%），女性7 例（35%），最小年齡18 歲，最大年齡73 歲，平均年齡（72.21±22.42）歲。

2.2 真菌鑒定結果 18 例培養出酵母菌，鑒定出白色念珠菌6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌2 例（11.11%，2/18），克柔1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 種及以上念珠菌并存8 例，白色念珠菌與其他種類念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔與其他念珠菌共存1 例（0.55%，7/18）。絲狀真菌2 例，均為黑曲霉，詳見表1。

表1 支氣管肺泡灌洗液培養深部真菌病原菌

2.3 真菌檢查結果與影像學診斷相關分析 通過統計患者影像學診斷及其支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢及培養進行分析，真菌鏡檢結果找到菌絲19 例（7.42%，10/256），肺部陰影5 例，肺部結節8 例，肺占位病變4 例，咯血1 例，空洞病變1 例。大量孢子4 例（1.56%，4/256），肺部陰影2 例，肺部結節1 例，肺占位病變1 例。少量孢子16 例（6.25%，16/256），肺部陰影8 例，肺部結節3 例，咯血1例，肺不張1 例，胸腔積液2 例，肺部腫瘤1 例。肺部陰影患者真菌鏡檢和培養陽性最高（38.46%），其次是肺部結節和肺占位性病變，分別是30.77%、12.82%，詳見表2。

表2 支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與影像學診斷分析

3 討論

肺部真菌感染是指真菌侵入肺臟所致感染，由于無特殊癥狀和體征，診斷相對困難，肺部穿刺活檢找到真菌是診斷金標準，但該項檢查對患者具有一定創傷，因此不常用。支氣管纖維鏡檢是近年呼吸系統疾病診斷應用較普遍的檢查方法，相較于肺穿刺活檢術創傷性小。本次實驗共收集256 例患者的支氣管肺泡灌洗液，真菌鏡檢找到菌絲19 例（7.42%，19/256），大量孢子4 例（1.56%，4/256）、少量孢子16 例（6.25%，16/256）；真菌培養陽性20 例，其中酵母菌18 例，鑒定白念珠菌為6 例（33.33%，6/18），光滑念珠菌為2 例（11.11%，2/18），克柔念珠菌1 例（0.55%，1/18），其他念珠菌1 例（0.55%，1/18），2 種及以上念珠菌并存8 例（白念珠菌與其他種類念珠菌共存7 例（38.89%，7/18），其次克柔念珠菌與其他念珠菌共存1 例），另有絲狀真菌2例，均為黑曲霉。真菌檢查結果與臨床診斷相關分析結果顯示，肺部陰影患者真菌鏡檢和培養陽性最高，占38.46%，其次是肺部結節和肺部占位性病變，分別占30.77%、12.82%。支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與培養陽性率不高，主要見于肺部陰影及肺部結節患者。有文獻指出，支氣管肺泡灌洗液在某種情況認為是液體式的肺部活檢［9］，本研究中，對支氣管肺泡灌洗液進行直接真菌鏡檢及培養陽性率低下，其可能因素首先考慮人群中肺部真菌感染發生率并不高，其次本研究標本僅為全部支氣管肺泡灌洗液中的極少部分，極大降低真菌鏡檢及培養的陽性率，另外，該項檢查并非診斷肺部真菌感染的金標準，綜上原因可能導致本研究結果的陽性率低下。本研究結果表明，支氣管肺泡灌洗液真菌鏡檢與培養陽性率較低，對于侵襲性肺部真菌感染的敏感性和特異性相較于其他臨床實驗室檢查無特殊優勢。