PCR檢驗法和細(xì)菌培養(yǎng)法在陰道細(xì)菌檢驗中的效果對比

羅曉夏

(北大醫(yī)療魯中醫(yī)院 山東 淄博 255400)

前言:

正常情況下，女性的陰道內(nèi)存在一定的細(xì)菌，這些細(xì)菌相互作用、相互制約，處于一個相對穩(wěn)定的動態(tài)平衡狀態(tài)[1]。但是，在陰道組織受到一定外界細(xì)菌入侵的時候，便會出現(xiàn)一定的平衡失調(diào)問題，導(dǎo)致各種細(xì)菌性陰道疾病的出現(xiàn)，甚至引發(fā)腹部感染和盆腔感染等嚴(yán)重后果。為此，臨床上針對此類患者，需要及時的進(jìn)行必要的診斷，積極進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗，并結(jié)合檢驗結(jié)果實施針對性的治療，以改善預(yù)后。目前，臨床上在進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗的時候，可以選用的檢驗方法有多種不同的類型[2]。不同檢驗方法存在一定的差異，為獲得更為理想的檢驗效果，有必要對不同類型檢驗方法的臨床效果進(jìn)行對比分析。此次研究選擇100例在本院接受陰道分泌物標(biāo)本采集，并行陰道細(xì)菌檢驗的患者資料進(jìn)行觀察和分析，觀察并比較陰道細(xì)菌檢驗中PCR檢驗法和細(xì)菌培養(yǎng)法的檢驗效果?，F(xiàn)將研究詳情整理報道如下。

1 一般資料與方法

1.1一般資料

選擇100例2020年10月-2021年10月期間在本院就診的患者進(jìn)行觀察，所有患者均接受陰道分泌物標(biāo)本采集，并行陰道細(xì)菌檢驗的患者資料進(jìn)行觀察和分析。入組患者中年齡最小者20歲，最大者55歲，平均年齡為(35.25±1.15)歲。通過臨床及檢驗后確診，100例患者中涉及到腸球菌、加特納菌、棒狀桿菌分別有40例、37例、23例。入院后對所有患者均采集陰道分泌物標(biāo)本送檢，分別應(yīng)用PCR檢驗法和細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)

(1)育齡期女性；(2)可收集到完整臨床資料的患者；(3)存在陰道炎癥、私處異味、私處瘙癢、白帶增多等癥狀的患者；(4)入組前已經(jīng)經(jīng)工作人員解釋說明，了解本次研究方案的具體內(nèi)容，并簽署同意書表示愿意配合研究的患者。

1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)處于妊娠期的女性；(2)處于哺乳期的女性；(3)處于生理期的女性；(4)三天內(nèi)存在性生活史者；(5)1 個月內(nèi)存在陰道局部用藥史者。

1.3檢驗方法

1.3.1標(biāo)本采集

采集所有患者的陰道分泌物，具體方法為，將醫(yī)用無菌棉簽插入到患者的陰道后穹隆位置，對棉簽進(jìn)行輕柔的旋轉(zhuǎn)，蘸取適量陰道分泌物后，將棉簽放置于2ml 無菌生理鹽水中進(jìn)行儲存，送往醫(yī)院檢驗科進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗。

1.3.2檢驗用品與設(shè)備

檢驗過程中需要使用陰道瓊脂培養(yǎng)基以及二氧化碳恒溫箱等用品和設(shè)備，相應(yīng)的用品、設(shè)備與提供廠家情況如表1所示：

表1 檢驗相關(guān)用品、設(shè)備與提供廠家情況匯總

1.3.3細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗

將采集所得的患者陰道分泌液標(biāo)本接種在陰道瓊脂培養(yǎng)基中，并將其轉(zhuǎn)移到二氧化碳恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)時間為2天。觀察培養(yǎng)情況，如果培養(yǎng)基形成菌落后，對菌落進(jìn)行篩選，選擇其中呈灰色、半透明狀、光滑的菌群，對其利用生化儀實施生化鑒定。統(tǒng)計其中陽性的細(xì)菌數(shù)，統(tǒng)計陽性率。

1.3.4PCR 檢驗法檢驗

對含有患者陰道分泌液的生理鹽水實施離心處理，離心速度設(shè)置為每分鐘12000r，離心時間為15分鐘。離心處理完畢后，對上清液予以清除，收集沉淀物。將適量堿性裂解液添加到沉淀物中，并對其實施水浴處理。水浴處理過程中溫度保持為55℃，水浴時間控制在15分鐘。水浴操作完畢，再次進(jìn)行離心處理，離心速度設(shè)置為每分鐘12000r，離心時間為10分鐘。離心處理完畢后，采集適量上清液，制作DNA 模板。利用熒光PCR 儀進(jìn)行循環(huán)處理，獲得檢驗結(jié)果。

1.4觀察指標(biāo)

比較不同檢驗方法下的細(xì)菌陽性檢出率，并比較不同檢驗方法在不同細(xì)菌類型方面的檢出效果。其中，細(xì)菌培養(yǎng)法的陽性檢出判斷標(biāo)準(zhǔn)為：培養(yǎng)基中長出典型菌落，并經(jīng)生化儀鑒定為相應(yīng)的細(xì)菌類型。PCR 檢驗法的陽性檢出判斷標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)檢驗觀察到存在1mm 以內(nèi)的條帶寬度，條帶邊緣整齊，無藥斑和引物二聚體的背景。統(tǒng)計不同檢驗方法下的細(xì)菌檢出陽性總例數(shù)，計算出總的陽性檢出率。并對不同類型細(xì)菌的陽性檢出情況進(jìn)行統(tǒng)計，比較相應(yīng)的檢出率。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

完整收集不同檢驗方法下的引導(dǎo)細(xì)菌陽性檢出情況，計算出總陽性檢出率，以及不同類型細(xì)菌的檢出情況，相應(yīng)的檢出率均以百分比形式表示，均導(dǎo)入到SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件實施統(tǒng)計學(xué)處理,數(shù)據(jù)組間差異的統(tǒng)計學(xué)比較檢驗均采用X2檢驗，檢驗后證實數(shù)據(jù)之間的差異存在統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)均為P小于0.05。

2 結(jié)果

2.1不同檢驗方法在陰道細(xì)菌檢驗中的效果比較分析

統(tǒng)計并比較兩組細(xì)菌陽性檢出率，可得觀察組 高于對比組，且檢驗后證實差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P<0.05)。統(tǒng)計結(jié)果見表2：

表2 不同檢驗方法在陰道細(xì)菌檢驗中的陽性檢出率統(tǒng)計比較

2.2不同檢驗方法在陰道細(xì)菌分布情況方面的檢驗效果對比分析

比較不同檢驗方法在陰道細(xì)菌分布情況方面的檢驗效果，可得觀察組的腸球菌檢出率高于對比組，但組間比較數(shù)據(jù)差異，無統(tǒng)計學(xué)意義，(P>0.05)，統(tǒng)計并比較兩組棒狀桿菌與加特納菌檢出情況，可得觀察組檢出率均高于對比組，且經(jīng)檢驗差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，(均P<0.05)。統(tǒng)計結(jié)果見表3：

表3 不同檢驗方法在陰道細(xì)菌分布情況方面的檢驗效果對比分析(例，%)

3 討論

女性的陰道中存在一定數(shù)量和不同類型的細(xì)菌，在常規(guī)情況下，這些細(xì)菌在女性陰道中會處于一個相對穩(wěn)定和平衡的狀態(tài)，對女性的健康無影響[3-4]。但是，受到一定因素的影響，女性陰道中的細(xì)菌會出現(xiàn)菌群失衡的情況，導(dǎo)致一定陰道炎疾病的出現(xiàn)。陰道疾病的出現(xiàn)會導(dǎo)致陰道炎癥、私處異味、私處瘙癢、白帶增多等癥狀等多種癥狀的出現(xiàn)，影響到女性的身體健康狀況，也帶給患者極大的心理痛苦[5]。因此，針對存在一定癥狀的患者，應(yīng)及時對其實施必要的陰道細(xì)菌檢驗，并根據(jù)檢驗結(jié)果制定針對性的治療方案，以盡快解決女性的身心痛苦。

陰道分泌物檢查是評價女性泌尿生殖道健康水平的重要指標(biāo)，陰道細(xì)菌檢驗中，通過采集患者的陰道分泌物進(jìn)行檢查，可以較為直觀的掌握患者陰道內(nèi)炎癥的感染情況，對其陰道內(nèi)菌體失調(diào)情況等進(jìn)行分析，進(jìn)而制定合理的治療方案[6-7]。在進(jìn)行陰道細(xì)菌檢驗的時候，可以選擇采用不同的檢驗方法[8]。目前PCR 檢驗法、細(xì)菌培養(yǎng)法是應(yīng)用較多的檢驗方法，但關(guān)于不同檢驗方法的臨床應(yīng)用效果，以往的對照研究還不夠豐富。為此，此次研究選擇對上述兩種檢驗方法的應(yīng)用效果進(jìn)行對比分析。經(jīng)本組對比研究發(fā)現(xiàn)，統(tǒng)計并比較兩組細(xì)菌陽性檢出率，可得觀察組的陽性檢出率為91.00%(91/100)，高于對比組的75.00%(75/100)，且檢驗后證實差異有統(tǒng)計學(xué)意義。通過比較不同檢驗方法在陰道細(xì)菌分布情況方面的檢驗效果發(fā)現(xiàn)，觀察組的腸球菌檢出率為36.00%(36/100)，高于對比組的35.00%(35/100)，組間比較數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，統(tǒng)計并比較兩組棒狀桿菌與加特納菌檢出情況，可得觀察組的檢出率分別為21.00%(21/100)和34.00%(34/100)，均高于對比組的12.00%(12/100)和28.00%(28/100)，且經(jīng)檢驗差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。以往王太林等學(xué)者的研究指出[9]，與細(xì)菌培養(yǎng)法相比較，在陰道細(xì)菌檢測中應(yīng)用PCR檢驗法可以獲得更高的陽性檢出率。此次研究與其研究結(jié)果基本一致。通過上述結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在陰道細(xì)菌檢驗中，應(yīng)用PCR檢驗法進(jìn)行檢驗可以獲得更為理想的檢驗效果，整體檢驗效果優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法。其中應(yīng)用的細(xì)菌培養(yǎng)法是一種較為常見的檢驗方法，以往在臨床檢驗中得到了十分廣泛的應(yīng)用。但是，細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行細(xì)菌檢驗的過程中，整個檢驗的步驟較為復(fù)雜，繁瑣，操作時間較長，對檢驗時的外界環(huán)境條件的要求也相對較高。因此，整個檢驗的效率偏低，且極易受到外界環(huán)境的影響，出現(xiàn)檢出率偏低等問題。為了獲得精確的檢驗結(jié)果，有時還需要多次進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)檢驗，消耗的時間較多。PCR 檢驗法是一種新型的檢驗方法，簡便、快速、敏感性高，特異性強。具備PCR 的敏感性、DNA 雜交特異性等優(yōu)勢，該方法可以應(yīng)用一定的熒光定量檢測技術(shù)來獲得檢驗結(jié)果，因此陽性檢出率相對較高[10]。

綜上所述，陰道細(xì)菌檢驗中可以應(yīng)用不同的檢驗方法。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用PCR檢驗法可以獲得較為理想的檢驗效果，細(xì)菌陽性檢出率較高，且對不同類型細(xì)菌的檢查效果更為理。整體檢驗效果優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法，故值得臨床廣泛應(yīng)用及推廣。