運豬車輛消毒效果的檢測分析

章杭建，倪柏鋒，虞一聰，謝榮輝，趙靈燕，徐 輝

(浙江省動物疫病預防控制中心，浙江 杭州 311199)

自2018年8月3日遼寧沈陽發生我國第一起非洲豬瘟疫情起到2019年4月7日，我國內地30個省份均已全部遭遇非洲豬瘟疫情“侵襲”，造成巨大經濟損失[1]。流行病學調查結果表明，被污染的車輛和人員是非洲豬瘟病毒傳播、擴散的主要方式之一，加強運輸車輛洗消中心建設和管理，做好運輸車輛、人員和物品的清洗消毒，是切斷非洲豬瘟病毒傳播途徑的重要手段[2]。我國現已查明的111起家豬疫情中，病毒來自于人員、車輛攜帶的非洲豬瘟病毒傳播占比達到了41.5%[3]。為了解浙江省運豬車輛洗消中心車輛消毒效果狀況，作者于2019年10月，對2家運豬車輛洗消中心的10輛運豬車進行了采樣檢測。本文就這次檢測的方法和結果分析作了介紹。

1 材料

1.1試劑 滅菌0.9%生理鹽水(實驗室自制)、胰酪大豆胨瓊脂培養基(TSA)(批號：8297692)、二氯異氰脲酸鈉(批號：2019041011)碘酸混合溶液(批號：90874)。

1.2試驗耗材 無菌50 mL和15 mL離心管，無菌10 mL和1 mL吸管，無菌90 mm培養皿。

1.3設備 培養箱(BINDER KB115)、渦旋震蕩器(kylin-Bell VORTEX-5)、搖床(Thermo MAXQ 4000)、生物安全柜(Thermo 1300 SERIES A2)、高壓滅菌器(TOMY SX-700)。

2 方法

2.1洗消中心消毒程序

2.1.1洗消中心A 運豬車去豬場運豬前需經過洗消中心消毒并取得消毒證明，憑消毒證明才能到豬場運豬。運豬車進入洗消中心時，洗消中心工作人員先檢查車輛是否干凈，如果發現運豬車存在豬糞、豬毛等污染物，該車輛不得進入消毒程序。經檢查符合要求的車輛方可駛入消毒房，用3%碘酸混合溶液噴霧2 min以上。

車輛駛出消毒房后用高壓水槍對車輛噴灑3%碘酸混合溶液，使運豬車車廂等表面均噴濕為止。駕駛室內座位、門、腳墊等則用手動噴霧器噴灑消毒。

2.1.2洗消中心B 運豬車入場前的要求及檢查同洗消中心A。檢查后運豬車駛入含0.2%二氯異氰脲酸鈉的消毒池內，使車輪完全被消毒液浸泡，浸泡約5 min。輪胎消毒后駛出消毒池，用高壓水槍以0.2%二氯異氰脲酸鈉溶液噴灑沖洗車輛，使車輛各部位都沖洗到位。駕駛室內座位、門、腳墊等則用手動噴霧器噴灑消毒。

2.2樣品采集

2.2.1采樣 消毒前后分別采樣。用5 cm×5 cm滅菌規格板放在被檢物體表面，用浸有生理鹽水的無菌棉拭子1支，在規格板內橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉動棉拭子。將棉拭子剪去手接觸部分后，放入含10 mL無菌生理鹽水的50 mL一次性無菌離心管中。小型物體采樣則用浸有生理鹽水的無菌棉拭子直接涂抹物體表面約25 cm2面積。采樣后，將樣品置于2-8 ℃條件下保存、運輸。

2.2.2采樣部位 車輪(輪胎、輪轂)內外側各1個點、每個擋泥板各1個點、車底盤4個點、車廂外表面和車頭4個點、車廂內表面4個點，上車踏板、腳踏板、腳墊、方向盤、檔把、內外門把手各1個點，用棉拭子直接涂抹表面采樣，每個點采集面積均為100 cm2。

2.3細菌總數測定

2.3.1樣品前處理 將樣品管置于搖床，450 r/min震蕩10 min后，再置于漩渦震蕩器1500 r/min震蕩1 min。

2.3.2樣品稀釋 用1 mL一次性無菌吸管吸取1.0 mL樣品，置于含9.0 mL無菌生理鹽水的15 mL一次性無菌離心管作10倍系列稀釋，每個稀釋度換1支吸管。

2.3.3稀釋度選擇 消毒前的樣品一般選擇10-1或10-2稀釋度；消毒后的樣品，一般選擇原液或10-1稀釋度。

2.3.4樣品接種、培養 吸取樣品液0.1 mL接種于TSA平板，每個樣品接種3個平板，37 ℃培養18～24 h。

2.3.5菌落計數 參照《食品微生物學檢驗 菌落總數測定》(GB4789.2-2016)介紹的方法，計算每個樣品細菌總數[4]。

2.4消毒效果評價

2.4.1比較每個采樣部位消毒前后細菌總數，計算殺滅率，殺滅率≥90%表示消毒有效[5-8]。

2.4.2若某一部位消毒前菌落≤10 CFU/cm2，表明該部位本身含菌量很低難以區分消毒效果，則表示消毒效果不確定。在計算消毒有效率時不計入樣品總數。

2.4.3計算公式：

3 結果

洗消中心A和B車輛各采樣部位消毒前和消毒后細菌總數如下(表1～2)。

表1 洗消中心A細菌總數測定結果

4 結果分析

根據細菌總數測定結果，A洗消中心5輛運豬車共35個采樣部位中，消毒有效部位6個，消毒無效部位20個，消毒效果不確定部位9個，按照消毒有效率公式計算，消毒有效率為23.08%。B洗消中心35個采樣部位中，消毒有效、消毒無效和消毒不確定數分別為17個、9個和9個，消毒有效率為65.38%(表3-4)。

表3 洗消中心A消毒有效率

表4 洗消中心B消毒有效率

5 討論

本次檢測中A洗消中心5輛被檢測運豬車消毒有效率為23.08%。按不同采樣部位測算，車輪消毒有效率為20.00%，檔泥板、底盤、車廂內表面和上車踏腳板等的消毒有效率分別為0、25.00%、40.00%和40.00%，車廂外表面和方向盤等消毒效果無效或不確定。B洗消中心5輛運豬車消毒有效率為65.38%。按不同采樣部位計算，車輪、擋泥板、底盤、車廂外表面、車廂內表面、上車踏腳板等和方向盤等消毒有效率分別為50.00%、80.00%、60.00%、20.00%、50.00%、80.00%和20.00%。從檢測的結果來看，B洗消中心車輛消毒效果優于A洗消中心，可能與所采用的消毒劑和消毒程序不同有關。從A、B兩個洗消中心車輛不同采樣部位的檢測結果來看，車廂外表面和方向盤等消毒效果不確定的結果頻率較高，主要原因是消毒前細菌含量≤10 CFU/cm2，對于這一類情況如何界定其消毒效果，在方法學上如何改進尚待研究。

目前洗消中心車輛消毒效果評價缺乏行業標準，作者主要參考國家衛生健康委員會《消毒與滅菌效果的評價方法與標準》(GB15981—1995)、《食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定》(GB4789.2—2016)、《醫療機構消毒技術規范》(WS/T367—2012)等標準和規范設計檢測實驗和評價方法。在采樣點選擇、細菌殺滅率、菌落數限值等方面仍值得進一步探索。運豬車消毒效果評價方法的建立有助于開展我國現階段不同區域環境條件下屠宰場衛生狀況的調查、各類消毒方法比較、有效消毒劑選擇等活動，為制定屠宰場消毒衛生標準提供基礎性數據。本文提出的消毒有效率概念僅適用于特定區域特定場所特定物體表面的消毒效果評價，如何進一步標準化擴大其適用范圍尚待更深入的研究。