無特定病原體動物飼養屏障設施的消毒管理

丁燕霞

(浙江大學實驗動物中心，浙江 杭州 310058)

實驗動物是整個生命科學研究不可或缺的工具，實驗動物質量的好壞直接影響著實驗結果。屏障設施是實驗動物穩定生存的環境條件，是質量合格的依據，同時也是實驗結果得以保障的基礎。浙江大學實驗動物中心的實驗動物屬于無特定病原體動物(SPF)，這意味著屏障設施在使用過程中要嚴格控制微生物，防止因為人員流動、動物接收、物品傳遞等過程帶來微生物污染，影響實驗動物質量。無特定病原體動物屏障設施消毒與一般實驗動物比較更具嚴格的要求，其措施更應符合科學規范[1]。

1 屏障設施常見的消毒方法

消毒是指用物理化學或生物的方法清除或殺滅環境或媒介物上除芽孢以外的所有病原微生物的過程[2]。常見的消毒方式如下。

1.1物品和動物消毒 進入屏障設施內的物品種類繁多，有飼養生產相關的飼料、消毒劑，也有實驗相關的藥品、細胞、儀器設備等，根據物品的種類和性狀采取以下三種不同的消毒方式。

1.1.1高壓蒸汽滅菌器消毒對于物品消毒的原則為凡是能高溫高壓的物品均采用高壓蒸汽滅菌器消毒，如飼養相關的墊料、飲水、IVC籠具、工作服、實驗相關的記錄紙、手術器械、離心管、動物轉運盒等，均在121 ℃，30 min條件下高溫高壓處理達到消毒滅菌目的。

1.1.2紫外傳遞窗消毒法對于一些不能高溫高壓的物品則首先采取消毒液對物品表面消毒，后經由傳遞窗紫外照射10 min后傳入屏障設施。根據不同的物品采取不同的消毒液消毒方式：拖鞋可以用消毒液浸泡消毒后傳入傳遞窗；實驗儀器，如跑步機、血糖儀等，組裝前需要用酒精擦拭消毒，之后放入傳遞窗消毒；一般的實驗用品及動物，如注射器、飼料等，用消毒液對物品表面噴霧消毒后放入傳遞窗。

1.1.3化學消毒法包括熏蒸和擦拭消毒法，屏障設施使用過程中會遇到更換IVC籠架、小推車、高效過濾器、呼吸麻醉機等，而這些大型物品無法通過傳遞窗進入屏障，一般會采用熏蒸消毒法和擦拭消毒法。IVC，小推車，高效過濾器等物品在進入屏障設施前可以在專用房間里用高錳酸鉀和甲醛進行熏蒸消毒，消毒結束待氣體排出后，經由大物品通道進入屏障設施；大型實驗儀器，則采用75%酒精擦拭表面后，在緩沖間用紫外線消毒十分鐘后傳入屏障設施。

1.2人員消毒 人員不能和物品一樣做到徹底消毒，所以人員采用隔離衣物包裹消毒[3]。人員按相關操作規程進入規定實驗區域外圍后，在門口更換一更拖鞋，進入一更脫掉外套，存放貼身物品，對手噴霧消毒后進入二更，按規定穿戴好隔離服和口罩后，隔離服穿戴完畢后要求頭發、隨身衣物不外露，手套包裹在衣袖內，經由風淋室風淋30 s后進入屏障設施，更換二更拖鞋，之后進入相應的飼養間操作。

1.3環境消毒及消毒劑選擇 屏障設施在啟用后，受到實驗動物和實驗人員的影響，環境中的微生物增加，因此消毒成為了維持屏障內環境的唯一手段。消毒劑是指能殺滅傳播媒介上的微生物并達到消毒要求的制劑，屏障設施內消毒要注重消毒劑的選擇，消毒劑消毒效果的好壞直接影響著屏障設施內的生物潔凈度。

1.3.1屏障設施內消毒劑選擇的一般原則如下：(1)安全、低殘留，對設備或表面盡可能無腐蝕性，對產品無毒，無污染；(2)宜與常規使用的清潔劑相容，水中溶解度高；(3)消毒作用時間長；(4)符合需要控制微生物的類型和數量。

1.3.2選擇消毒劑時要注意消毒液的類型，消毒液的選擇和使用是整個過程中的關鍵環節。屏障設施綜合考慮以上因素，選用季銨鹽類(百毒殺消毒液)、過氧化物類(過氧乙酸消毒液)、含氯消毒劑(三氯異氰尿酸、次氯酸鈉)三類消毒劑進行每月交替輪流使用[4-5]。

1.3.3根據不同房間區域，不同消毒方式，屏障內不同物品采取不同的消毒頻率。如飼養間地面每天用消毒液浸泡的拖把拖地兩次；每天換籠工作結束后對房間進行噴霧消毒；房門及門把手每兩周擦拭消毒一次；飼養間墻面，天花板，房間回風口初效清洗、房間置物架等是每月消毒一次；小鼠的IVC籠架每季度清洗消毒一次。

2 消毒管理過程中存在的問題

在日常的消毒管理中，由于人員混雜，實驗人員未選擇正確的消毒措施，導致物品消毒不徹底影響屏障環境；傳遞窗數量有限，實驗人員在物品未達到消毒時間時就拿出來使用，給屏障環境帶來了污染風險；高壓蒸汽滅菌器在使用過程中發生故障，維修周期影響物品的消毒使用；飼養管理人員知識水平參差不齊，大部分都不具備實驗動物疫病防控知識，對屏障內無菌操作和消毒工作的意識淡薄，導致消毒過程中不注意把控細節，忽略掉邊邊角角的消毒，造成設施內飼養環境消毒不徹底，消毒頻率不足無法達到消毒效果；動物中心采購人員購買消毒劑的數量偏多，各區域領用不及時造成消毒劑過期；各飼養區域為操作方便，長時間使用同一類消毒物品導致病原微生物產生耐藥性，以及消毒液使用過程中不按說明書操作，不按規定比例隨意配制消毒液，影響消毒效果[6-7]。

3 改進措施

3.1加強消毒管理制度 中心制定了一系列的消毒管理制度來規范飼養員的操作，定期對屏障設施內外環境、倉庫、空調機房等區域消毒。此外還做好滅蚊滅蠅、除蟲防野鼠等工作，避免有害生物傳播疫病。外來實驗動物進入屏障設施時，檢查是否具備質量合格證，動物外包裝是否完好不漏氣；檢查合格后對動物的外包裝進行充分消毒后傳入屏障設施。

3.2規范消毒劑的使用 消毒劑的購買由獸醫清點庫存后定期把采購計劃告知采購部門，按照區域使用量采購，這樣從源頭上規范了消毒劑的輪換使用，同時也杜絕了消毒劑存放過期的情況。同時中心獸醫制定了一系列的消毒劑領用與監督使用制度，配有消毒劑配制表，消毒試劑標簽，規定每位飼養員配制好消毒劑后，在容器上貼標簽，注明品名、濃度、用途、配制時間、有效期、配制人，做好配制記錄。獸醫每季度結合監控回放和消毒劑配制記錄表抽查是否規范使用消毒劑，避免濫用消毒劑。

3.3加強傳遞窗使用管理 日常操作過程中，出現隱患最多的就是供實驗人員傳遞物品的傳遞窗，規范了傳遞窗的使用就等于進入屏障設施內的物品消毒基本得到了保障。工作人員在傳遞窗上張貼了傳遞窗使用規范，在一定程度上減少了違規使用傳遞窗的操作；其次，工作人員會不定期在傳遞窗旁邊監督實驗人員使用傳遞窗，如發現物品消毒方式不正確，及時制止并糾正；最后，對于違規使用傳遞窗的實驗人員，中心制定了違規人員處理辦法，進入屏障設施人員每人有初始12分的信用分，如嚴重違規，扣完12分，并取消進入屏障設施的資格[8]，2個月后方可重新參加培訓獲得準入資格。

3.4設施設備的定期維護檢測 規范高壓滅菌器的使用，只有持有特種設備操作上崗證的工作人員才可以操作滅菌器。設施設備組做好安全檢查，重點檢查安全閥、蒸汽發生器、水位開關，鍋爐門蓋的密封圈等；設施設備的定期檢驗和維護，做好巡檢和維護記錄，確保設備的安全有效使用[9]。獸醫每季度用生物指示劑來檢測高壓滅菌器的滅菌效果，以保證進入屏障設施內物品都能夠達到徹底消毒的目的。

4 結語

屏障環境設施運行的成本高，責任重大，消毒管理是設施運行中的關鍵環節。制定科學的消毒方案并嚴格實施，加強實驗操作人員的管理，進而提供給實驗動物一個科學，標準的生存環境，以便獲得可靠的研究成果。同時加強對工作人員的教育培訓，讓他們掌握消毒的基本知識，培養無菌操作意識，從而能夠更好的為實驗動物和實驗人員服務。