miR-187、MMP2、CEA在膽囊癌患者中的表達水平及臨床意義

楊 陽，賈萬理△，晉 婕

1.西安高新醫院輸血科，陜西西安 710075；2.西安金域醫學檢驗所有限公司，陜西西安 710018

膽囊癌是起源于膽道系統的惡性腫瘤，占膽道系統腫瘤的80%～95%，發病率位居消化道腫瘤第6位，其惡性程度高，預后較差，嚴重影響患者的健康[1]。根治性手術是膽囊癌最有效的治療方法，但由于膽囊癌起病初期癥狀不明顯，大多數患者就診時已處于晚期，只有不到20%的患者可進行手術切除治療，導致膽囊癌整體預后較差[2]。因此，尋找潛在的生物標志物對膽囊癌進行早期診斷，對改善患者預后具有重要意義。微小RNA-187(miR-187)在許多惡性腫瘤中可異常表達，參與了腫瘤的發生、發展[3]。基質金屬蛋白酶2(MMP2)在人體內主要由腫瘤細胞分泌，可促進血管生成及腫瘤的生長、轉移[4]。癌胚抗原(CEA)是一種可觸發機體免疫應答的糖蛋白，在多種腫瘤細胞中高表達[5]。本研究主要探討miR-187、MMP2、CEA在膽囊癌中的表達水平，分析其對膽囊癌的診斷價值及對患者預后的影響，旨在為膽囊癌的早期診斷和預后評估提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 采用回顧性研究方法，收集2016年1月至2018年6月西安高新醫院腫瘤科收治的膽囊癌患者102例作為癌癥組，其中男56例，女46例；平均年齡(66.8±7.3)歲。納入標準：(1)符合《膽囊癌診斷和治療指南(2019版)》[6]的相關診斷標準；(2)患者為首次診斷膽囊癌，且經術后病理檢查確診；(3)患者臨床資料完整。排除標準:(1)合并其他惡性腫瘤；(2)合并肝炎、肝硬化等肝臟疾病；(3)合并心腦血管疾病；(4)有精神疾病史。另外收集100例膽囊良性腫瘤患者作為良性組，其中男55例，女45例；平均年齡(66.2±7.7)歲，均經術后病理檢查確診。收集同期100例體檢健康者作為對照組，其中男55例，女45例；平均年齡(66.5±7.2)歲。3組研究對象性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2檢測方法 所有入組的研究對象空腹抽取靜脈血4 mL注入無添加劑的真空干燥管，顛倒混勻數次，靜置30 min后以3 000 r/min的速度離心10 min，取上清液保存于-80 ℃的超低溫冰箱中待測。miR-187采用實時熒光定量PCR檢測，儀器為ABI 7300實時熒光定量PCR儀，生物安全柜由上海力申科學儀器有限公司生產。MMP2采用酶聯免疫吸附試驗檢測，試劑盒由上海巧伊生物科技有限公司提供。CEA采用貝克曼DXI-800全自動免疫分析儀及其配套試劑進行檢測。所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行，室內、室間質控均在控。

1.3觀察指標陽性判定標準 miR-187采用2-ΔΔCt法計算相對表達量，>1判定為陽性；MMP2≥68.0 μg/mL判定為陽性；CEA≥35 U/mL判定為陽性。

2 結 果

2.13組miR-187、MMP2、CEA水平比較 癌癥組miR-187、MMP2、CEA水平明顯高于對照組及良性組，良性組miR-187、MMP2、CEA水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組miR-187、MMP2、CEA水平比較

2.2miR-187、MMP2、CEA對膽囊癌的診斷效能 ROC曲線分析結果顯示，miR-187、MMP2、CEA聯合檢測診斷膽囊癌的曲線下面積(AUC)為0.908，靈敏度和特異度分別為92.2%和80.0%，見表2和圖1。

表2 miR-187、MMP2、CEA單獨及聯合檢測對膽囊癌的診斷效能

圖1 miR-187、MMP2、CEA單獨及聯合檢測診斷膽囊癌的ROC曲線

2.3膽囊癌患者預后的影響因素分析 COX回歸分析結果顯示，Nevin分期、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移情況及miR-187、MMP2、CEA水平是膽囊癌患者預后的獨立影響因素(P<0.05)，見表3。

表3 膽囊癌患者預后的影響因素分析

3 討 論

膽囊癌是臨床上比較少見的一種惡性腫瘤，具有生長迅速、惡性程度高、預后差等特點[7]。由于膽道系統疾病多不具有特征性表現，故膽囊癌患者確診時多已進展為晚期，常常出現周圍組織侵犯或全身性轉移，導致患者預后較差。膽囊癌主要采用根治性手術進行治療，但術后放化療效果往往不理想，患者平均生存時間僅有5～24個月[8]。因此，早發現、早診斷是提高患者治療效果、改善預后的重要手段。

miRNA是一種存在于動植物體內的非編碼單鏈小分子RNA，具有調控組織細胞生長、分化、凋亡的作用，可通過不同機制調控腫瘤細胞的增殖、凋亡、轉移[9]。成亞飛等[10]研究發現，miR-187在膽囊癌患者中異常表達，且與患者臨床病理特征有關。MMP2是基質蛋白酶家族的重要成員，在加速新生血管形成、促進腫瘤生長及遠處轉移等方面具有重要作用[11]。田德福等[12]研究顯示，血清MMP2水平在膽囊癌患者中較高，其表達情況在患者預后評估中有一定價值。CEA是一種酸性糖蛋白，在健康者體內水平較低，在胃腸道腫瘤、膽管癌、胰腺癌患者中水平均可升高，但其診斷靈敏度和特異度不高[13]。本研究結果顯示，miR-187、MMP2、CEA水平在膽囊癌患者中明顯升高，高于體檢健康者和膽囊良性腫瘤患者，說明上述指標水平與膽囊癌的發生、發展密切相關。ROC曲線分析結果表明，miR-187對膽囊癌的診斷效能優于MMP2、CEA，將3項指標聯合檢測可進一步提高診斷效能，靈敏度和特異度分別可達92.2%、80.0%，具有較高的診斷價值，可用于輔助臨床診斷。

Nevin分期是臨床上常用的膽囊癌分期標準，分期越高，膽囊癌的惡性程度越高，發生轉移的風險就越大，如發生廣泛性轉移則根治性手術意義不大[14]。膽囊癌的手術治療方式還應結合膽囊癌TNM分期而定，分期越高，腫瘤進展越迅速，發生轉移的風險越大，預后越差[15]。分化程度可用于評估腫瘤細胞與正常細胞的相似度，衡量腫瘤的惡性傾向，分化程度低是預后不良的危險因素[16]。淋巴結轉移是導致膽囊癌患者預后不良的危險因素，充分評估淋巴結轉移情況對高危患者接受輔助抗癌治療具有重要意義[17]。本研究采用COX回歸分析膽囊癌患者預后的影響因素，結果顯示，Nevin分期、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移情況及miR-187、MMP2、CEA水平是膽囊癌患者預后的獨立影響因素(P<0.05)，臨床可根據上述指標對患者的預后情況進行初步評估。

綜上所述，miR-187、MMP2、CEA水平在膽囊癌患者中明顯升高，是影響患者預后的因素，且3項指標聯合檢測有助于膽囊癌的早期診斷。