豬胎盤營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因在不同妊娠期的表達(dá)

伍治敏，胡光玲，敖 政

(1.高原山地動物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽550025；2.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴陽550025；3.貴州省動物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550025)

胎盤作為連接母體與胎兒的唯一橋梁，胎盤的形態(tài)和功能與子宮內(nèi)胎兒的生長發(fā)育密切相關(guān)。胎盤功能失調(diào)導(dǎo)致的營養(yǎng)供應(yīng)異常被認(rèn)為是胎兒發(fā)育不良的重要原因[1]。氨基酸、葡萄糖、脂肪酸是胎兒和胎盤生長的重要營養(yǎng)物質(zhì)，但從母體輸送到胎兒的大多數(shù)營養(yǎng)物質(zhì)需有特定的機(jī)制來促進(jìn)轉(zhuǎn)運(yùn)[2]。胎盤對營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常與不同妊娠疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如胎盤障礙導(dǎo)致氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)效率降低而誘發(fā)胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩(intrauterine growth retardation,IUGR)[3]。

在模式動物和人類的相關(guān)研究中已發(fā)現(xiàn)，胎盤的溶質(zhì)載體(solute carrier,SLC)是參與氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的重要蛋白[4]。Vallet等[2]通過對豬胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，歸納了239個(gè)SLC基因可能參與不同營養(yǎng)物質(zhì)在母-胎之間的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝。胎盤營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白在不同妊娠時(shí)期可能存在不同表達(dá)模式，其表達(dá)與胎兒的生長發(fā)育密切相關(guān)。在人類和實(shí)驗(yàn)動物中，胎盤氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的異常表達(dá)被發(fā)現(xiàn)可能是胎兒體重過低和過高的重要原因[5]，如氨基酸溶質(zhì)載體家族1中的成員3(SLC1A3)[6]、氨基酸溶質(zhì)載體家族7中的成員2(SLC7A2)[7]。Cameron等[8]發(fā)現(xiàn)，利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)胎盤中SLC2A3表達(dá)會減少綿羊胎兒體重、頭圍、股骨長和脛骨長。在小鼠和大鼠的研究中同樣發(fā)現(xiàn)SLC2A3的表達(dá)下調(diào)與胎兒體重降低有關(guān)[9-10]。在小鼠中，脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(FATP4)基因敲除會導(dǎo)致胚外內(nèi)胚層中FATP4基因表達(dá)缺失而減少對胚胎的營養(yǎng)供應(yīng)，從而造成早期胚胎致死[11]。此外，胎盤能夠適應(yīng)性調(diào)整其形態(tài)發(fā)育和營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)來控制母-胎的營養(yǎng)供應(yīng)，以達(dá)到滿足胎兒生長發(fā)育的最佳營養(yǎng)水平[12-14]。胎兒生長是營養(yǎng)和內(nèi)分泌環(huán)境調(diào)節(jié)遺傳潛能的結(jié)果[15]，因此在整個(gè)妊娠期，胎盤營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白在不同生理?xiàng)l件下可能通過不同的表達(dá)模式來調(diào)控胎兒的生長發(fā)育。

在母豬妊娠過程中，胎兒在不同的發(fā)育階段具有明顯的營養(yǎng)需求差異，這可能與胎盤營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的時(shí)空表達(dá)和胎盤形態(tài)發(fā)育密切相關(guān)。母豬妊娠第40天是胎盤的絨毛膜和尿囊融合階段，妊娠第65天左右胎盤的形態(tài)發(fā)育完整[16]，而妊娠第95天胎盤褶皺開始擴(kuò)展，從而增加了母-胎交換效率以滿足胎兒的快速生長[17]。因此，本研究通過分析妊娠第40、65、95天豬胎盤的氨基酸、葡萄糖、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)模式來探究它們對母-胎營養(yǎng)供應(yīng)的潛在影響，對研究胎盤和胎兒的調(diào)控關(guān)系具有重要科學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物及其飼養(yǎng)管理 15頭遺傳背景和產(chǎn)仔數(shù)接近、胎次在2～4胎的杜洛克經(jīng)產(chǎn)健康母豬由貴州富之源農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供，使用定位欄飼養(yǎng)在同一個(gè)妊娠舍，所有母豬的飼料、飲水、豬舍溫濕度均保持一致。

1.1.2 主要試劑及儀器 總RNA提取試劑盒、β巰基乙醇、StarStain Red Plus核酸染料、瓊脂糖、50×TAE緩沖液、2×TaqPCR StarMix均購自貴州西寶生物有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser)、DL500 DNA Marker均購自寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司；SYBR Select Master Mix購自賽默飛世爾科技有限公司；熒光定量96孔板購自莫納生物科技有限公司。PCR擴(kuò)增儀(C1000 TouchTM)、凝膠成像系統(tǒng)(Universal Hood Ⅱ)及電泳儀(DYY-2C型)均購自Bio-Rad公司；超微量紫外分光光度計(jì)(NanoDrop One)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(Applied Biosystems QuantStudio 3)均購自賽默飛世爾科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及樣品采集 15頭杜洛克母豬平均分為3組，母豬發(fā)情后使用相同公豬的精液通過人工授精配種。在妊娠第40(D40)、65(D65)和95(D95)天通過麻醉(噻拉嗪，2 mg/kg體重)分別取出每組母豬的子宮，快速打開子宮分離出每個(gè)胎兒的胎盤組織，于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 引物設(shè)計(jì)及合成 根據(jù)GenBank中氨基酸溶質(zhì)載體基因(溶質(zhì)載體家族7中的成員1(SLC7A1)、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A10、溶質(zhì)載體家族38中的成員10(SLC38A10)、溶質(zhì)載體家族36中的成員1(SLC36A1)、溶質(zhì)載體家族1中的成員3(SLC1A3)、SLC1A5)、葡萄糖溶質(zhì)載體基因(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(SLC2A1)、SLC2A2、SLC2A3、SLC2A10、SLC2A12和SLC2A13)、脂肪酸溶質(zhì)載體基因(脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(FATP1)、FATP2、FATP3、FATP4、脂肪酸結(jié)合蛋白3(FABP3)、FABP5、FABP7和脂肪酸轉(zhuǎn)位酶(CD36))等的序列，應(yīng)用Primer Premier 6.0軟件設(shè)計(jì)引物，引物信息見表1。引物由北京擎科生物科技有限公司合成。

表1 引物信息

續(xù)表

1.2.3 總RNA提取與PCR擴(kuò)增 根據(jù)總RNA提取試劑盒說明書提取D40、D65、D95胎盤的總RNA并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，對所選取的氨基酸、葡萄糖、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)基因進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系20 μL：2×TaqPCR Star Mix 10 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL，cDNA 1 μL，ddH2O 8.2 μL。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性 2 min；94 ℃ 變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃ 延伸30 s，共30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物用2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 以β-actin為內(nèi)參基因，對3個(gè)妊娠時(shí)期胎盤中氨基酸、葡萄糖、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。PCR反應(yīng)體系10 μL：SYBR Select Master Mix 5 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.3 μL，cDNA 1 μL，ddH2O 3.4 μL。PCR反應(yīng)程序：50 ℃ UDG酶激活2 min，95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸 1 min，共40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。每個(gè)樣品做4個(gè)重復(fù)。采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA)，組間差異采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

由圖1可知，氨基酸溶質(zhì)載體基因SLC7A1、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A10、SLC1A3、SLC1A5、SLC38A10、SLC36A1擴(kuò)增所得產(chǎn)物大小分別為280、223、165、137、140、296、296、168和245 bp，葡萄糖溶質(zhì)載體基因SLC2A1、SLC2A2、SLC2A3、SLC2A10、SLC2A12和SLC2A13擴(kuò)增所得產(chǎn)物大小分別為178、261、134、148、243和167 bp，脂肪酸溶質(zhì)載體基因FATP2、FATP3、FATP4、FATP1、FABP3、FABP5、FABP7和CD36擴(kuò)增所得產(chǎn)物大小分別為185、127、198、180、105、182、300和116 bp，擴(kuò)增所得產(chǎn)物目的片段均與預(yù)期相符，且條帶清晰、明亮、無二聚體出現(xiàn)。

M，DL500 DNA Marker；1～23，分別代表SLC7A1、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A10、SLC1A3、SLC1A5、SLC38A10、SLC36A1、SLC2A1、SLC2A2、SLC2A3、SLC2A10、SLC2A12、SLC2A13、FATP2、FATP3、FATP4、FATP1、FABP3、FABP5、FABP7和CD36M,DL500 DNA Marker;1-23,Represent SLC7A1,SLC7A2,SLC7A3,SLC7A4,SLC7A10,SLC1A3,SLC1A5,SLC38A10,SLC36A1,SLC2A1,SLC2A2,SLC2A3,SLC2A10,SLC2A12,SLC2A13,FATP2,FATP3,FATP4,FATP1,FABP3,FABP5,FABP7 and CD36,respectively圖1 豬胎盤營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因PCR檢測結(jié)果Fig.1 PCR detection results of nutrition transport-related genes in porcine placenta

2.2 氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因在不同妊娠期豬胎盤中的表達(dá)

由圖2可知，氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)基因在不同妊娠期胎盤中均有表達(dá)。D65胎盤中的SLC7A10、SLC38A10和SLC7A4基因相對表達(dá)水平顯著高于D40胎盤(P<0.05)，而SLC7A2基因顯著低于D40胎盤；D65胎盤的SLC1A3和SLC7A4基因相對表達(dá)水平均顯著低于D95胎盤(P<0.05)。SLC36A1、SLC1A5、SLC7A1、SLC7A3基因相對表達(dá)量在3個(gè)妊娠期均差異不顯著(P>0.05)。

2.3 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因在不同妊娠期豬胎盤中的表達(dá)模式

由圖3可知，在葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體所有基因中，D65和D95胎盤的SLC2A3和SLC2A13基因相對表達(dá)量顯著高于D40胎盤(P<0.05)，D95胎盤中SLC2A1、SLC2A2和SLC2A12基因相對表達(dá)量顯著低于D40和D65胎盤(P<0.05)。SLC2A10基因相對表達(dá)量在3個(gè)妊娠期均差異不顯著(P>0.05)。

相同基因不同時(shí)期，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下同The same genes at different times,values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05);While with the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05).The same as below圖2 不同妊娠期豬胎盤氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的相對表達(dá)量Fig.2 The relative expression of amino acid transport-related genes in porcine placenta at different gestation periods

圖3 不同妊娠期豬胎盤葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的相對表達(dá)量Fig.3 The relative expression of glucose transport-related genes in porcine placenta at different gestation periods

2.4 脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因在不同妊娠期豬胎盤中的表達(dá)模式

由圖4可知，在脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體相關(guān)基因中，D65胎盤的FATP2、FATP4、FABP3、FABP5、FABP7和CD36基因相對表達(dá)量顯著高于D40胎盤(P<0.05)，而FATP1、FATP4和CD36基因相對表達(dá)量顯著低于D95胎盤，F(xiàn)ABP3基因相對表達(dá)量顯著高于D95胎盤(P<0.05)。FATP3基因相對表達(dá)量在3個(gè)妊娠期均差異不顯著(P>0.05)。

圖4 不同妊娠期豬胎盤脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的相對表達(dá)量Fig.4 The relative expression of fatty acid transport-related genes in porcine placenta at different gestation periods

3 討 論

在妊娠中后期，豬胎兒的營養(yǎng)需求增加以應(yīng)對肌肉生長[18]、器官發(fā)育[19]以及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[20]等，因此胎盤氨基酸、葡萄糖、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)基因的表達(dá)顯著上調(diào)可能是由于需要轉(zhuǎn)運(yùn)更多營養(yǎng)物質(zhì)以滿足胎兒的快速生長[2]。本研究發(fā)現(xiàn)，SLC38A10、SLC7A4、SLC1A3、SLC2A3、FATP1、FATP2、FATP4、FABP5、FABP7、CD36等氨基酸、葡萄糖、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的表達(dá)水平隨著妊娠進(jìn)程呈上調(diào)趨勢，表明妊娠后期胎豬在快速生長且對營養(yǎng)物質(zhì)的需求在逐漸增加。

氨基酸、葡萄糖和脂肪酸作為胎兒生長發(fā)育過程中不可或缺的營養(yǎng)物質(zhì)，胎盤的營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常會導(dǎo)致胎兒發(fā)育不良甚至死亡。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠第65和95天氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因SLC38A10、SLC7A4、SLC1A3的轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào)。SLC38A10介導(dǎo)谷氨酰胺、谷氨酸鹽和天冬氨酸的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)，并且在參與神經(jīng)傳遞的途徑中起作用[21]。有研究報(bào)道，SLC7A4、SLC1A3是在豬的胎盤中呈高表達(dá)的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因[2]。SLC7A4通過細(xì)胞內(nèi)底物的差異反式刺激促進(jìn)擴(kuò)散來運(yùn)輸陽離子氨基酸，其可能參與精氨酸的遞送，用于合成一氧化氮[22]。一氧化氮能夠促進(jìn)血管形成而增加妊娠后期胎盤血流[23]。SLC1A3是一種高親和力谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在綿羊研究中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)下調(diào)與IUGR有關(guān)[24]。谷氨酸是胎盤組織中最豐富，也是妊娠后期豬胎兒中沉積最多的氨基酸[25]，同時(shí)谷氨酸也是精氨酸和谷氨酰胺等氨基酸的重要前體物質(zhì)。本研究發(fā)現(xiàn)，豬胎盤中SLC7A2基因的表達(dá)水平在妊娠后期顯著下調(diào)可能與底物水平相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，胎盤中SLC7A2表達(dá)量在妊娠第30天達(dá)到最高，但是隨著妊娠進(jìn)程SLC7A2對底物的親和力降低和對反式刺激的依賴性變?nèi)?，從而?dǎo)致在妊娠中后期SLC7A2表達(dá)量降低[26-27]。因此，SLC1A3、SLC38A10、SLC7A4可能是妊娠后期重要氨基酸供應(yīng)的轉(zhuǎn)運(yùn)基因。

葡萄糖作為胎兒生長發(fā)育的主要能量來源，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)不足是導(dǎo)致人類胎兒IUGR的病因[28]。本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠95 d胎盤的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體基因SLC2A1、SLC2A2和SLC2A12的mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)，這可能與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的特異性底物和競爭性轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。SLC2A2基因在小鼠、牛、馬以及豬胚胎中已有報(bào)道[29-32]，其在豬妊娠早期大量表達(dá)[33]。在馬妊娠早期胎盤中，SLC2A1和SLC2A3是子宮內(nèi)膜和胚胎細(xì)胞膜中表達(dá)量最高的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[30]，與本研究結(jié)果一致，說明SLC2A1和SLC2A2可能是妊娠早期的主要葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。SLC2A1能夠協(xié)助葡萄糖從母體血液轉(zhuǎn)運(yùn)至子宮內(nèi)膜上皮，然后通過SLC2A3介導(dǎo)從尿囊絨毛運(yùn)輸?shù)教后w內(nèi)[34]。有研究報(bào)道，SLC2A3基因隨妊娠進(jìn)程逐漸成為豬胎盤絨毛膜中的主要葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體，這可能是其他轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)下調(diào)的重要原因[34]。SLC2A13是質(zhì)子/肌醇共轉(zhuǎn)運(yùn)體，肌醇在胚胎發(fā)育或功能的某些方面具有重要作用[2]，這可能是豬胎盤中SLC2A13基因的轉(zhuǎn)錄水平在妊娠第65和95天顯著增加的潛在原因。這些結(jié)果表明葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體基因在不同妊娠期呈現(xiàn)差異表達(dá)，這可能與胎兒的葡萄糖需求有關(guān)。

必需脂肪酸及其長鏈多不飽和脂肪酸衍生物(如二十二碳六烯酸和花生四烯酸)對胎兒的正常生長發(fā)育尤為重要。母體循環(huán)中脂肪酸能夠通過被動擴(kuò)散方式被胎兒吸收，但是單純的擴(kuò)散速度不足以滿足妊娠后期胎兒的脂肪酸需求[35]。因此，胎兒生長所需的大部分脂肪酸必需依賴于胎盤中的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體[36]。本研究發(fā)現(xiàn)，豬胎盤中FATP1、FATP2、FATP4、FABP5、FABP7、CD36等脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因的mRNA表達(dá)水平在妊娠中后期顯著上調(diào)，而妊娠中期FABP3基因轉(zhuǎn)運(yùn)體相對表達(dá)量顯著高于妊娠早期和妊娠后期。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP3可能促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞對花生四烯酸的攝取而參與早期發(fā)育過程，如胚胎附植、血管生成、器官發(fā)生等[37]，其在妊娠后期表達(dá)降低，可能是一種保護(hù)性胎盤適應(yīng)機(jī)制，使胎兒在不同發(fā)育階段攝取不同的必需脂肪酸。在大鼠的研究中，Knipp等[38]發(fā)現(xiàn)FABP的表達(dá)水平隨孕齡不斷升高，可能與妊娠后期胎兒的快速生長有關(guān)。雌激素能夠上調(diào)子宮內(nèi)FABP7的表達(dá)[39]，而雌激素水平與妊娠期呈正相關(guān)，這可能也是FABP7隨著妊娠期表達(dá)量上調(diào)的原因之一。研究發(fā)現(xiàn)，母豬背膘過厚(>20 mm)導(dǎo)致胎盤CD36、FATP1基因表達(dá)量下調(diào)，這與胎兒循環(huán)中的脂質(zhì)含量下降一致[40]。Ao等[41]發(fā)現(xiàn)，胎盤中FATP4基因表達(dá)下調(diào)可能是導(dǎo)致胎兒循環(huán)脂肪酸水平降低而引發(fā)克隆豬體重偏低的重要原因。FATP4的作用主要包括將長鏈脂肪酸激活成?；o酶A，從而使脂肪酸衍生物參與脂質(zhì)代謝途徑[42]，F(xiàn)ATP1也可以促進(jìn)長鏈脂肪酸的細(xì)胞攝取[43]。隨著孕齡增加，胎兒對長鏈不飽和脂肪酸的需求量增加，胎盤脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的轉(zhuǎn)運(yùn)能力也增加[44]。此外，大量證據(jù)表明從母體循環(huán)獲得的脂肪酸在圍產(chǎn)期大量沉積在胎兒組織中[45]，這表明妊娠后期胎兒對脂肪酸的需求量在不斷增加。因此，豬胎盤中FATP1、FATP2、FATP4、FABP5、FABP7、CD36等相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體基因可能是妊娠中后期調(diào)控胎盤脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)而影響胎兒生長發(fā)育的重要基因。

4 結(jié) 論

豬胎盤中SLC38A10、SLC7A4、SLC1A3、SLC2A3、FATP1、FATP2、FATP4、FABP5、FABP7、CD36等基因的表達(dá)在妊娠第65和95天上調(diào)，說明這些營養(yǎng)轉(zhuǎn)運(yùn)基因可能是胎兒生長和發(fā)育的重要調(diào)控因子。結(jié)果可為建立提高豬胎兒宮內(nèi)發(fā)育質(zhì)量的新策略提供理論依據(jù)。