循環miR-485-5p水平與前列腺癌病人病理參數的關系及其對預后的價值

劉國路 李強 李乾 王蘇貴

前列腺癌位列男性惡性腫瘤第6位，死亡因素的第9位，多見于中老年人群[1]。我國2020年前列腺癌發生率在15.6例/10萬人，死亡例數超5萬人[2]。手術切除仍是目前根治前列腺癌的首選方法，術后高復發率是困擾臨床醫師的棘手問題。前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)是癌常用的篩查指標之一，但前列腺炎癥、藥物使用情況等可影響PSA測定結果，其預測腫瘤復發轉移的敏感度、特異度有限[3]。微小核糖核酸(microRNA，miR)是一種單鏈RNA小分子物質，在人體細胞分化、增殖、細胞周期、細胞凋亡、新陳代謝等基因調控過程中具有重要作用，與腫瘤細胞的生長、遷移、浸潤關系密切[4]。有研究表明，miR-485-5p參與大腸癌[5]、肝癌[6]等多種癌癥的發生、發展，與腫瘤細胞的生長、遷移、浸潤關系密切。有研究顯示，通過上調miR-485-5p表達水平可抑制前列腺癌細胞增殖、遷移、侵襲[7]。我們對103例前列腺癌病人循環miR-485-5p水平進行檢測并探討其與前列腺癌病人預后的關系。

對象與方法

一、對象

2016年10月～2018年11月我院收治的前列腺癌病人103例，年齡32～75歲，平均年齡(60.47±6.85)歲。本研究為前瞻性研究，經醫院倫理委員會審批通過。納入標準：(1)符合《前列腺癌篩查中國專家共識(2021年版)》中前列腺癌診斷標準[8]；(2)首次行前列腺癌根治性手術；(3)既往未接受任何形式治療；(4)簽署知情同意。排除標準：合并其他部位惡性腫瘤；重要臟器嚴重功能障礙；伴有免疫缺陷性疾病、血液系統疾病、全身系統性疾??；伴有精神性疾病、認知功能障礙；根治性手術前發現遠處轉移者、轉移性前列腺癌；既往有藥物濫用史、吸毒史及前列腺癌放化療、手術治療史；伴有代謝性腦病、顱內器質性病變、嚴重心腦血管疾病。剔除標準：(1)手術過程中死亡；(2)自行終止治療；(3)依從性差；(4)自然失訪。

二、方法

1.手術治療：參照《中國前列腺癌外科治療專家共識》進行根治性前列腺癌手術[9]，完整切除前列腺、雙側精囊及足夠的外周組織，獲得滿意陰性切緣，去除癌灶并保留尿控功能(盡可能保留勃起功能)，若切緣陽性則根據個體情況行內分泌治療及放化療。

2.前列腺癌腫瘤直接的測定：病人取左側臥位，臀部朝向檢查者，經直腸超聲觀察腺體形態，腺體內腫瘤大小，以最大腫瘤直徑記錄多灶性前列腺癌大小。

3.外周血循環miR-485-5p相對表達量測定：術前抽取空腹靜脈血液3 ml，離心，收集血清，提取總RNA，采用mirPremie micro RNA Isolation Kit試劑盒分離RNA，逆轉錄成cDNA，進行實時熒光定量PCR測定。內參選用GAPDH，以CT值為基礎，2-△△CT法計算外周血循環miR-485-5p相對表達量。引物序列見表1。

表1 PCR引物序列表

4.隨訪：所有病人術后以門診復查、電話等方式隨訪3年，術后第1年，每2個月復查1次；自第2年起，每6個月復查1次，行MRI等影像學檢查及PSA測定。統計隨訪期間復發轉移狀況，出現復發轉移者則終止隨訪。

三、統計學方法

結果

1.不同病理參數前列腺癌病人血清miR-485-5p相對表達量比較見表2。不同年齡、PSA、腫瘤直徑分組病人的miR-485-5p相對表達量比較，差異無統計學意義(P>0.05)；Gleason評分>7分、有微血管侵犯、有淋巴結轉移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相對表達量分別低于Gleason評分≤7分、無微血管侵犯、無淋巴結轉移、Ⅰ-Ⅱ期病人，差異有統計學意義(P<0.05)。

表2 不同病理參數前列腺癌病人血清miR-485-5p相對表達量比較

2.影響前列腺癌病人術后復發轉移的因素:截止隨訪結束，103例前列腺癌病人共有10例失訪。剩余93例前列腺癌病人中35例(37.63%)出現復發轉移，58例(62.37%)未出現復發轉移。Cox回歸分析顯示,Gleason評分、分期、miR-485-5p相對表達量是影響前列腺癌病人術后復發轉移的獨立因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響前列腺癌病人術后復發轉移的單因素與多因素分析

3.血清miR-485-5p水平預測前列腺癌病人術后復發轉移的價值:ROC曲線結果顯示，血清miR-485-5p水平預測前列腺癌病人術后復發轉移的最佳截斷點為1.02，靈敏度為74.29%，特異度為75.86%，AUC為0.795。見圖1。

圖1 血清miR-485-5p相對表達量預測前列腺癌病人術后復發轉移的ROC曲線

4.不同血清miR-485-5p水平的前列腺癌病人生存情況:以術前血清miR-485-5p相對表達量預測前列腺癌病人術后復發轉移的最佳截斷點(1.02)為分界線，將miR-485-5p相對表達量>1.02記為miR-485-5p高表達，miR-485-5p相對表達量≤1.02記為miR-485-5p低表達。41例miR-485-5p低表達病人無病生存21例，52例miR-485-5p高表達病人無病生存37例；miR-485-5p高表達病人的無病生存曲線優于miR-485-5p低表達病人，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖2。

圖2 不同血清miR-485-5p相對表達量的前列腺癌病人的Kaplan-Meier無病生存曲線

討論

目前，臨床針對前列腺癌主要采用手術、放化療及內分泌治療的綜合治療措施，但仍存在較高的復發轉移風險。miR是一類非編碼單鏈RNA，在細胞內穩定存在，可通過完全和不完全堿基配對與靶基因結合，轉錄后可調節多個基因的表達使靶基因降解或抑制靶基因翻譯發揮調控功能，參與上皮細胞、內皮細胞、巨噬細胞的生理、病理過程，在前列腺癌等多種惡性腫瘤的發生、發展中具有重要調控作用[10]。miR-485-5p是抑癌基因之一，有研究證實，上調miR-485-5p表達可抑制前列腺癌細胞增殖、遷移、侵襲[7]。

本研究發現，Gleason評分>7分、有微血管侵犯、有淋巴結轉移、Ⅲ期病人的miR-485-5p相對表達量分別低于Gleason評分≤7分、無微血管侵犯、無淋巴結轉移、Ⅰ-Ⅱ期病人，提示miR-485-5p相對表達量與前列腺癌病人病情關聯的病理參數有關，可能與以下機制有關：(1)miR-485-5p相對表達量降低可增強細胞外基質金屬蛋白酶活性，促進細胞外基質降解，增強癌細胞侵襲、遷移風險；(2)miR-485-5p相對表達量降低可負性調控腫瘤有關蛋白，提高周期蛋白依賴性激酶1、細胞周期素B1活性，進而縮短細胞周期，促進癌細胞增殖、分化。miR-485-5p在多種惡性腫瘤中起到抑癌基因作用，可與對應靶點相互作用形成雙閉環負反饋系統，Wang 等[11]研究顯示，miR-485-5p可使順鉑耐藥細胞中的部分耐藥基因失活，抑制抗癌藥物轉移至細胞外，進而提升癌細胞對抗癌藥物的敏感性。鄭瑞等[12]研究指出，胃癌病人存在miR-485-5p低表達現象，miR-485-5p可通過調控Wnt/β-catenin通路抑制胃癌細胞的增殖、轉移。

miR-485-5p可通過抑制線粒體呼吸及癌細胞膜表面信號傳遞，以降低癌細胞的轉移、進展風險[13]；miR-485-5p也可通過阻斷上皮間質轉化來抑制癌細胞轉移[14]。本研究Cox回歸分析顯示Gleason評分、分期、miR-485-5p相對表達量是影響前列腺癌病人術后復發轉移的獨立因素，提示miR-485-5p相對表達量是影響前列腺癌病人預后的因素。miR-485-5p高表達病人的無病生存曲線優于miR-485-5p低表達病人，提示miR-485-5p相對表達量與前列腺癌病人預后有關，miR-485-5p低表達病人術后復發轉移風險更高。

miR-485-5p表達情況與前列腺癌病人病理參數及預后有關，miR-485-5p低表達病人預后不良風險高。受時間、精力、經濟等多方面限制，本研究仍存在不足之處，為單中心研究，樣本量較小，隨訪時間短，miR-485-5p在前列腺癌中的分子機制也值得進一步的探討，后期將針對不足之處進一步完善研究。