佛山地區(qū)不良妊娠結(jié)局與MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性相關(guān)性研究

楊 康，周少雄，歐陽(yáng)佩雯，莊錫偉，彭健橋

佛山復(fù)星禪誠(chéng)醫(yī)院檢驗(yàn)病理診斷部，廣東佛山 528000

不良妊娠結(jié)局指除正常妊娠以外的病理妊娠及分娩期并發(fā)癥，包括胚胎停育、早產(chǎn)、足月低質(zhì)量新生兒、出生缺陷、自然流產(chǎn)、死胎等，其發(fā)生給患者帶來(lái)巨大的心理及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題之一[1-3]。造成不良妊娠結(jié)局的病因迄今尚不明確，多數(shù)研究者認(rèn)為其與遺傳因素及環(huán)境因素有關(guān)[4-5]。伴隨分子生物學(xué)飛速發(fā)展，近幾年遺傳因素的研究成為熱點(diǎn)之一，尤以亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系研究最為突出。但目前國(guó)內(nèi)外研究表明，MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性存在人群和地區(qū)差異[6-8]，且鮮見(jiàn)佛山地區(qū)的相關(guān)研究報(bào)道。本研究通過(guò)了解佛山地區(qū)不良妊娠結(jié)局女性和正常妊娠女性的MTHFR C677T基因型及基因頻率，探討佛山地區(qū)不良妊娠結(jié)局與MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)系，為臨床醫(yī)生預(yù)防不良妊娠及不良妊娠結(jié)局患者的治療提供科學(xué)依據(jù)，以期減少不良妊娠結(jié)局的發(fā)生。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2019年6月至2021年5月于本院行MTHFR C677T基因多態(tài)性檢測(cè)的不良妊娠結(jié)局女性(病例組)454例和同期正常妊娠女性(對(duì)照組)265例。納入的研究對(duì)象均為漢族，籍貫為本市且無(wú)血緣關(guān)系，本研究獲得了研究對(duì)象知情同意，且符合醫(yī)學(xué)倫理程序。病例組年齡19～47歲，平均(29.3±5.1)歲；包括不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、稽留流產(chǎn)、自然流產(chǎn)、胚胎停育、不良孕產(chǎn)史患者。對(duì)照組年齡19～56歲，平均(30.8±5.0)歲；納入標(biāo)準(zhǔn)為無(wú)不良生育史且至少一次正常生育史，無(wú)家族性遺傳病史，生殖系統(tǒng)正常。兩組女性的年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 XO-01漩渦振蕩器(北京泰普聯(lián)合科技開(kāi)發(fā)有限公司)，5424R型高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)，TL988型熒光定量PCR儀(西安天隆科技有限公司)。地高辛染色液、樣本萃取液、細(xì)胞保存液(濟(jì)南廣音醫(yī)療科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1MTHFR C677T基因多態(tài)性檢測(cè) 采集研究對(duì)象外周血2 mL于乙二胺四乙酸二鉀抗凝劑保存，提取白細(xì)胞。應(yīng)用熒光染色原位雜交技術(shù)測(cè)定白細(xì)胞中MTHFR C677T基因位點(diǎn)。經(jīng)過(guò)95 ℃變性解鏈10 min，60 ℃恒溫特異性雜交并實(shí)現(xiàn)非酶級(jí)聯(lián)熒光信號(hào)放大90 min。經(jīng)雙通道熒光定量PCR儀進(jìn)行測(cè)定結(jié)果，MTHFR C677T基因多態(tài)性測(cè)定結(jié)果共計(jì)3種，分別為野生型(CC型)、突變雜合型(CT型)、突變純合型(TT型)，其中CT型和TT型合稱(chēng)突變型。

1.3.2觀察指標(biāo) 通過(guò)檢測(cè)研究對(duì)象的MTHFR C677T基因多態(tài)性，分析病例組與對(duì)照組MTHFR C677T基因型和基因頻率的分布差異，各基因型發(fā)生不良妊娠結(jié)局的差異并作統(tǒng)計(jì)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。使用χ2檢驗(yàn)分析基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg(HWE)遺傳平衡定律，以P>0.05為符合。計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以95%置信區(qū)間(CI)計(jì)算優(yōu)勢(shì)比(OR)評(píng)估基因型與不良妊娠之間的關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05(雙側(cè))為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HWE遺傳平衡定律檢驗(yàn) 使用χ2檢驗(yàn)對(duì)對(duì)照組女性MTHFR C677T基因型頻率進(jìn)行HWE平衡檢驗(yàn)，基因型分布符合HWE檢驗(yàn)平衡(χ2=0.20，P>0.05),說(shuō)明入組的佛山地區(qū)正常妊娠女性具有區(qū)域群體代表性。

2.2MTHFR C677T 基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組分布差異 病例組CC型255例(56.18%)、CT型147例(32.37%)、TT型52例(11.45%)、CT+TT型199例(41.4%)，C等位基因頻率72.35%、T等位基因頻率27.64%。對(duì)照組CC型166例(62.64%)、CT型89例(33.58%)、TT型10例(3.77%)、CT+TT型99例(37.35%)，C等位基因頻率79.4%、T等位基因頻率20.60%。兩組基因型頻率和等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.72、8.93，P<0.05)。兩組CC型頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.19，P=0.665)，兩組CT型頻率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.58，P=0.424),兩組TT型頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.31，P<0.05)。兩組女性等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.93，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不良妊娠結(jié)局女性與正常妊娠女性MTHFR C677T基因型、等位基因頻率比較[n(%)]

2.3MTHFR C677T 各基因型發(fā)生不良妊娠結(jié)局情況比較 以入組所有研究對(duì)象中MTHFR 677 CC型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)為對(duì)照(設(shè)定數(shù)值為1.000)，結(jié)果顯示，CT型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)與CC型女性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.19，P=0.665)；TT型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)為CC型女性的3.385倍(95%CI：1.674～6.847，χ2=12.67，P<0.01)；(CT+TT)型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)與CC型女性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.89，P=0.089)。

3 討 論

不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率在臨床呈逐年遞增趨勢(shì)，其發(fā)生與母體遺傳因素的關(guān)系已成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)[9]。MTHFR基因編碼的MTHFR是葉酸代謝通路中的關(guān)鍵酶，酶活性的下降會(huì)降低體內(nèi)葉酸的利用率，并引起血液同型半胱氨酸水平的升高，從而影響機(jī)體纖溶系統(tǒng)和凝血系統(tǒng)，使機(jī)體血液處于高凝狀態(tài)，進(jìn)一步升高胎兒生長(zhǎng)受限、流產(chǎn)、神經(jīng)管畸形等不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率[8,10-13]。至今，已發(fā)現(xiàn)MTHFR基因有多種突變，最常見(jiàn)的是C677T位點(diǎn)的突變，此類(lèi)突變具有明顯的病理意義，其中CC型女性葉酸代謝酶活性正常，CT型葉酸代謝酶活性較低，TT型葉酸代謝酶活性最低。因此，有學(xué)者認(rèn)為，MTHFR C677T基因多態(tài)性與不良妊娠結(jié)局的發(fā)生相關(guān)[2]。

筆者通過(guò)對(duì)MTHFR C677T基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組中的分布進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，其中病例組的TT型頻率(11.45%)明顯高于對(duì)照組(3.77%)，同時(shí)MTHFR C677T等位基因頻率在病例組和對(duì)照組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，病例組的等位基因T頻率(27.64%)明顯高于對(duì)照組(20.60%)，與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致[2,14-15]，提示MTHFR 677位點(diǎn)TT型女性及發(fā)生等位基因T突變的女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)可能更高。但也有研究報(bào)道，MTHFR C677T基因多態(tài)性與不良妊娠結(jié)局無(wú)相關(guān)性[16]，這可能與MTHFR C677T基因多態(tài)性存在地區(qū)和種族差異相關(guān)。另外，本研究對(duì)MTHFR C677T各基因型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示MTHFR 677位點(diǎn)TT型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)為CC型女性的3.385倍，提示TT型女性不良妊娠結(jié)局發(fā)生率可能更高。

綜上所述，MTHFR C677T基因存在多態(tài)性，在不同地區(qū)人群中存在差異。研究結(jié)果表明，MTHFR C677T基因多態(tài)性與女性妊娠不良結(jié)局的發(fā)生具有一定關(guān)系，其中MTHFR 677位點(diǎn)TT型女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，女性妊娠前應(yīng)行MTHFR C677T基因多態(tài)性檢測(cè)，臨床可依據(jù)女性基因型的不同，在其妊娠前、妊娠期采取個(gè)性化預(yù)防措施，以期降低不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率。本研究存在的局限有：(1)納入的樣本量較小；(2)未對(duì)不同基因型女性進(jìn)行不同用藥劑量設(shè)計(jì)及藥物治療效果的監(jiān)測(cè)。未來(lái)可進(jìn)行大樣本量、多中心研究以明確MTHFR C677T基因多態(tài)性與女性發(fā)生不良妊娠結(jié)局的關(guān)系。