水產品中常用麻醉劑及其檢測方法的研究進展

張博文，李雪銀，江改青，黃孟麗

（南京市食品藥品監督檢驗院，江蘇南京 211198）

隨著人們收入的不斷增長和健康意識的不斷提高，越來越多的消費者食用含有豐富蛋白的水產品，水產業在農業發展中的作用和地位日益突出。水產品富含人體所需的多種必需氨基酸，為人類貢獻了1/3的優質蛋白來源，在人類膳食平衡中具有重要地位[1]。隨著消費者對膳食平衡的重視，水產品交易量隨消費需求的增加呈現逐年增長的趨勢[2]。

水產品種類繁多，產量大，造成生產過程和市場流通的管理難度大。近幾年，水產品質量安全問題頻發，引起社會的廣泛關注[3]。由于國家近些年重點打擊水產品養殖過程中違法使用違禁藥物的行為，水產制品例行檢測率有所提高，水產品安全質量總體向好，但經營環節的水產品合格率為89.1%，與水產制品監督合格率98.1%相比仍存在較大差異[4-6]。根據檢測數據，水產品在流通環節比生產環節不合格率更高，表明運輸環節可能添加違禁物質或超標添加非食用物質[7]。在水產品檢測方面，國內對水產品中重金屬類、農藥類、持久性有機污染物有一定的研究，但對水產品中麻醉劑的檢測還處于初始研究階段，對麻醉劑的過度使用的危害還停留在研究階段[8]。

本文綜述了國內外水產品中麻醉劑的使用現狀、危害性、檢測技術等，展望了未來水產品中麻醉劑的使用發展趨勢，為麻醉劑在水產運輸的合理使用提供理論依據，為我國監管部門對水產品中麻醉劑的監測提供參考依據。

1 水產品中常用麻醉劑及其危害

很多水產品在運輸中由于缺氧或不適應環境而死亡，造成巨大的經濟損失[9]。運輸中使用麻醉劑可降低水產品的耗氧和氨排放，從而提高水產品運輸途中的存活率，查閱相應的資料，結合國內外麻醉劑的使用數據，發現丁香酚類物質、間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽（MS-222）、苯佐卡因、CO2、2-苯氧乙醇、鹽酸普魯卡因、利多卡因、布比卡因、丁卡因、美托咪酯和喹哪啶等麻醉劑能用于水產品運輸。目前，常用于水產品運輸的麻醉劑主要為丁香酚類化合物[10]和MS-222[11]。

1.1 丁香酚類麻醉劑使用現狀及其危害

丁香酚類化合物作為麻醉劑，由于其價格低廉、麻醉效果好、復蘇時間短，被廣泛應用于水產品的運輸和保鮮中，丁香酚的最佳麻醉濃度為40 mg/L，MS-222 的最佳麻醉濃度為135 mg/L，麻醉時間分別為2.55 min 和2.58 min；MS-222 和丁香酚對暗紋東方鲀幼魚對應的有效質量濃度分別為120 ～140 mg/L與60 ～70 mg/L，數據顯示要達到相同的麻醉效果，丁香酚類化合物用量更少[12-13]。丁香酚類麻醉劑主要分為6 種，包括丁香酚、異丁香酚、甲基丁香酚、乙酸丁香酚酯、甲基異丁香酚和乙酰基異丁香酚[14]。目前，市場上水產品中丁香酚類物質的檢出率較高，特別是農貿市場，丁香酚的檢出率高達76.9%；網絡平臺抽檢的水產品中丁香酚的檢出率達到23.8%，丁香酚在水產品中的高檢出率引起了監管部門的高度重視[14]。

丁香酚的安全性并沒有被普遍接受，針對丁香油麻醉劑的使用管理，各國仍存在較大的爭議[15]。研究表明，丁香酚會導致小鼠肝臟內癌細胞的發生率增高，國際癌癥研究機構（International Agency for Research on Cancer，IARC）將其列為Ⅲ類致癌物質[16]。歐洲食品安全局（European Food Safety Authority，EFSA）認為丁香酚對皮膚和眼睛具有刺激作用，并且皮膚接觸后會產生過敏反應[17]。目前的實驗結果表明，丁香酚類麻醉劑中異丁香酚會導致大鼠的鼻腔、小鼠的胃腺、前胃、鼻腔和腎臟發生非腫瘤性病變損傷，但也有文獻表明丁香酚可快速代謝，從體內排泄出去，因此關于丁香酚的使用管理仍存在一定爭議[11,18]。

1.2 麻醉劑MS-222 使用現狀及其危害

MS-222 易溶于水、易降解，安全性高[19]。MS-222 作為當前唯一一種合法麻醉劑流通于加拿大、美國市場，但MS-222 要達到相同的麻醉效果，其使用量比丁香酚類麻醉劑多，價格也更高。我國對MS-222 的研究使用開發較晚，目前我國水產品市場仍普遍采用丁香酚類化合物為麻醉劑[19]。

1.3 其他麻醉劑使用現狀及其危害

苯氧乙醇也是一種麻醉劑，常用于獸醫治療和外科方面，由于其麻醉起效快、復蘇時間短，常用于魚類麻醉研究。2-苯氧乙醇價格低，具有殺菌作用，但其復蘇時間長于MS-222 和丁香酚類麻醉劑[20]。苯佐卡因（氨基苯甲酸乙酯）是一種鎮靜藥物，苯佐卡因與MS-222 均為對氨基苯甲酸的衍生物,均被挪威批準在水產養殖業中進行商業運用[21-22]。使用苯佐卡因作為麻醉劑可能導致水產品死亡，苯佐卡因可能會引起高鐵血紅蛋白血癥的嚴重不良反應[23-24]。喹哪啶在魚用麻醉劑中價格相對低廉，可輔助各種活魚運輸，在國外已有廣泛的應用，我國對于喹哪啶和苯佐卡因用于水產品的運輸還處于研究階段[20]。

乙醚作用過于劇烈，導致水產品存活率較低。CO2麻醉對水產品無毒害作用，但在水產品局部組織中積累過多，將導致水產品麻醉過度，也可能導致水產品死亡[15]。此外，CO2麻醉復蘇時間較長，麻醉對象較局限，僅適用于部分水產品。非化學麻醉劑操作煩瑣、復蘇時間長，對水產品有一定的負面影響，如過低的溫度運輸會導致水產品死亡[21]。因此，非化學麻醉劑用于水產品的運輸受到一定的限制。

2 麻醉劑的檢測方法

2.1 丁香酚類麻醉劑檢驗方法

目前，國內外對麻醉劑的安全性、反復麻醉對水產品的危害、麻醉劑殘留對人體健康的影響等研究較少，建立準確的麻醉劑檢驗方法可為水產品質量監管提供技術支持。我國對丁香酚類麻醉劑的檢測常使用氣相質譜法，市場監管總局頒布了《水產品及水中丁香酚類化合物的測定》（BJS 201908）補充檢驗方法[8,25-34]。如表1 所示，目前我國關于丁香酚類化合物的檢測方法較為全面，也有文獻對比，采用乙腈為提取溶劑，丁香酚回收率較高[29，31]。丁香酚化合物的凈化方法主要有固相萃取法、分散固相萃取法、QuEChERS 法，QuEChERS 法對環境污染較小，具有經濟、高效、簡便和快速等優點，近幾年發展較快。QuEChERS 與傳統提取方法相比具有回收率高、穩定性好、能檢測含有水分的樣品、樣品通量高、溶劑使用量少、操作簡單、不污染環境以及分析成本低等特點，被廣泛應用于各個領域的檢測，目前QuEChERS 法已成為檢驗水產中丁香酚含量的一種新興方法[35]。丁香酚化合物的檢測儀器方法主要有高效液相色譜-紫外法（High Performance Liquid Chromatography-Ultraviolet Spectrometry，HPLC-UV）、超高效液相色譜串聯質譜法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）、氣相色譜串聯質譜 法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GCMS/MS）、氣相色譜質譜法（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）和 氣 相 色 譜- 離 子阱串聯質譜法（Gas Chromatography-Ion Trap Mass Spectrometry，GC-IT-MS/MS），其中GC-MS 外標法和其他方法相比，成本低、操作簡單。

表1 文獻中關于丁香酚類麻醉劑檢驗方法分析

2.2 其他麻醉劑檢驗方法

MS-222 的主要檢測方法有高效液相色譜串聯質 譜 法（High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS） 和GC-MS 法。儲成群等[36]通過QuEChERS 前處理方法并采用HPLC-MS/MS 技術能定量黃顙魚/桂花魚中MS-222 的含量。劉海新等[37]通過GC-MS 內標法準確定量魚肉中MS-222 的含量。GC-MS 法成本低、準確率高，GC-MS 法相比HPLC-UV 定性和定量準確度有顯著提高[38]。

對于水產品中2-苯氧乙醇的測定方法較少，外文文獻中有報道，KLIMáNKOVá 等[39]用SPMEGC-MS/MS 檢測出魚肉組織和魚血漿組織中2-苯氧乙醇的含量。目前，通過高效液相色譜儀測定2-苯氧乙醇含量的檢驗方法較為常見，但通過高效液相色譜儀測定水產品中2-苯氧乙醇的文獻還未有報道[40-42]。

利多卡因和苯佐卡因均可通過高效液相色譜檢測定量[43-44]。利多卡因和苯佐卡因也可被GC-MS 定量，但關于檢測水產品中利多卡因和苯佐卡因含量的文獻還未有報道，目前關于水產品中麻醉劑2-苯氧乙醇、利多卡因、苯佐卡因等其他類麻醉劑的檢測還處于研究階段。

2.3 多種麻醉劑檢驗方法

丁香酚類麻醉劑及MS-222 是水產品運輸中常用的麻醉劑，因此需建立一種能同時檢測丁香酚類麻醉劑及MS-222 麻醉劑的方法。但現有檢測方法都是僅針對單一種類的麻醉劑的檢測，不利于對多種麻醉劑的檢測，需開發制定快速、高效且能檢測多種麻醉劑的檢測方法[37]。翟紋靜等[26]建立了一種三重四極桿氣質聯用質譜法同時測定6 種丁香酚類麻醉劑和MS-222 麻醉劑的檢測方法，準確度、精密度均符合國家標準GB/T 27404—2008，該方法能同時檢測水產品中7 種麻醉劑含量是由于丁香酚類麻醉劑微溶于水而易溶于有機溶劑，而MS-222 易溶于水[21,45]。如表2 所示，翟紋靜等[26]根據國家監管的需求研究了一種能同時檢測市場上常用的兩種類別的麻醉劑的方法，但由于這兩種化合物極性相差較大，提取方法還需進一步優化，并且該方法需使用兩種內標化合物，提高了檢驗成本；鄭向華等[20]通過固相萃取-液相色譜-電噴霧串聯質譜成功測定水產品中三卡因、苯佐卡因、喹哪啶的含量；李圓圓等[21]通過全自動固相萃取儀器LC MS/MS 同時檢測出7種類別的麻醉劑（苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、辛可卡因、普魯卡因、普魯卡因胺和氯普魯卡因），但該方法對前處理條件和儀器條件要求較高，需選擇最優的前處理條件和儀器條件，而且該方法需采用基質標定量確保結果的準確性；HUANG 等[46]通過固相微萃取（Solid-Phase Microextraction，SPME）與GC-MS 相結合的方法活體檢測5 種麻醉劑[2-苯氧乙醇、丁香酚、異丁香酚、4-氨基苯甲酸乙酯（苯佐卡因）和MS-222]，使得用GC/MS 同時檢測多種類別的麻醉劑成為了可能，但該方法適用于活體快速、微量檢測麻醉劑，并且該方法精密度還有待提高。以上幾種方法，由于存在各種問題，目前并不能滿足檢驗需求。

表2 文獻中關于多種麻醉劑檢驗方法分析

3 結語

為實現活體水產品長距離運輸，在運輸中使用麻醉劑成為一種必然的趨勢，但在水產品中過度使用麻醉劑會危害消費者的身體健康，也會引起社會的廣泛關注，因此合理監管水產品中麻醉劑含量非常重要。目前，水產品中麻醉劑的檢驗方法過于局限，并且其檢驗方法沒有統一的規范和使用依據。目前的文獻中報道的麻醉劑的研究對象多為魚類，關于其他甲殼類水產品麻醉劑的檢驗方法案例較少，研究對象不夠全面，仍需使用不同檢驗方法對不同水產品基質進行考察。應從食物安全角度出發，建立能同時監測多種水產品基質、多種類型麻醉劑的檢測方法以及檢驗依據。隨著對水產品中麻醉劑的研究的不斷深入，進一步開發高靈敏度、高分辨率、對多種麻醉劑同時檢測的檢驗方法，以及該方法能在不同基質下檢測，這也是未來水產品質量安全研究的一個重要方向。