保健食品葉藍明目膠囊制劑工藝及功效成分含量測定研究

李 想，孫思琪，劉曉云，任雪陽，王 宇，董 英，宋若蘭，魏勝利，王秀環，折改梅

（北京中醫藥大學 中藥學院，北京 102488）

視屏終端設備的普及和生活節奏的加快使視疲勞人群的范圍不斷擴大[1]。視疲勞即由于各種病因使得人眼視物時超過其正常的視覺功能所承載的負荷，導致用眼后出現視覺障礙、眼部不適或伴有全身癥狀等，以至于不能進行正常視作業的癥候群[2]，導致的原因可能與眼部因素、神經因素和環境因素有關[3]。針對視疲勞發病率日益上升的趨勢，本研究開發了具有緩解視疲勞功能的保健食品葉藍明目膠囊。其由葉黃素、藍莓、五味子組成，具有緩解視疲勞功能。

葉藍明目膠囊中的葉黃素（xanthophyll）主要包括葉黃素（lutein）和玉米黃質（zeaxanthin），二者為同分異構體[4]。二者均是組成人眼視網膜黃斑區域的重要色素[5-6]，具有緩解視疲勞的功能[7]，為葉藍明目膠囊的功效成分。GB5009.246-2016《食品中葉黃素的含量測定》[8]要求對葉黃素（lutein）和玉米黃質（zeaxanthin）同分異構體采用手性柱分別測定含量，但因葉黃素分子結構中含共軛雙鍵，易氧化變質，檢測樣品時常需臨時新制，對照品價格昂貴，因此檢測成本較高。為降低檢測成本，有研究者嘗試對保健食品中的葉黃素整體含量建立測定方法[9-10]；或采用對照品替代法，即采用價格低廉、性質穩定的蘇丹I代替葉黃素對照品建立含量測定方法[11]。綜上，結合對照品替代法，采用快速、高效、穩定的方法對兩成分的總含量進行檢測，是比較可行的辦法。

本研究以休止角、堆密度、吸濕性、臨界相對濕度為考察指標，篩選了最佳輔料和制劑工藝，并建立了功效成分葉黃素的含量測定方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

S6000高效液相色譜儀（北京華譜）；安捷倫Eclipse Pluse C18色譜柱（北京綠百草）；1901PC紫外可見分光光度計（上海棱光）；JY02S型紫外分析儀（北京君意東方）；BT25S型分析天平（北京賽多利斯）；ASTM D1895型休止角測定儀（奧祥儀器）；YG-3KG小型干粉混合機（進杰工業設備）；BJ-2型崩解時限測定儀（天津天光）；S-400膠囊填充板（惠普金膠囊設備有限公司）。

1.2 試藥

葉黃素粉，藍莓提取物（漢中天然谷）；五味子提取物（陜西嘉禾）；預膠化淀粉（上海麥克林）；藥用糊精（上海麥克林）；玉米淀粉（上海麥克林）；麥芽糊精（上海麥克林）；微晶纖維素（北京惠康源）；硬脂酸鎂（上海麥克林）；二氧化硅（西安晉湘藥用輔料有限公司）；滑石粉（上海麥克林）；甲醇，鹽酸（分析純，北京化工廠）；甲醇（色譜級，Fisher Chemical公司）。

2 方法與結果

2.1 葉黃素含量測定色譜條件[12]

色譜柱：Eclipse Plus C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（95:5，v/v），等度洗脫；柱溫：室溫；檢測波長：445 nm；進樣量：10 μl；流速：0.8 ml/min。

2.2 制劑工藝研究

以休止角、吸濕率和臨界相對濕度為考察指標，篩選填充劑和潤滑劑的種類及用量，手工灌裝并檢查膠囊質量，優化制劑工藝。

2.2.1 填充劑考察 將原料混合粉（葉黃素粉、藍莓提取物、五味子提取物）與不同填充劑按表1方案混合均勻，用乙醇制軟材并制粒，測定顆粒休止角和臨界相對濕度。使用休止角測定儀測定顆粒的流動性。采用固定漏斗法：將漏斗固定于水平放置的帶刻度的底盤上適宜高度處，使漏斗下口距底盤的距離為H，小心地將混合粉沿漏斗壁倒入漏斗中，直至漏斗下面總混合物料的圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，此時用坐標紙測出圓錐體底部的直徑R，測定5次，計算休止角。吸濕率測定：各稱取2 g混合粉，分別置于恒溫25 ℃、不同相對濕度（33 %，43 %，57 %，75 %，84 %，92 %）的環境中，放置7 d后取出，稱定質量并計算吸濕率。以相對濕度為橫坐標，吸濕率為縱坐標，繪制臨界相對濕度曲線。結果見圖1。由表1可見，以藥用糊精為填充劑時，流動性相對較好；不同填充劑與原料混合粉混合后的臨界相對濕度無顯著差別，結果見圖1。最終確定藥用糊精為填充劑。

表1 不同填充劑與原料混合粉混合后的流動性和臨界相對濕度測定結果

圖1 不同填充劑與原料混合粉混合后的臨界相對濕度

2.2.2 潤滑劑考察 首先考察潤滑劑的種類。取原料混合粉，按表2分別在原料混合粉中加入0.4 %硬脂酸鎂、滑石粉、二氧化硅，將原料混合粉與各輔料混合均勻，用乙醇制軟材并制粒，分別測定休止角并計算RSD值。結果表明，加入0.4 %二氧化硅時休止角為36.50°，RSD為1.43 %，對流動性的改善最明顯，因此選用二氧化硅為潤滑劑。

表2 不同潤滑劑與原料混合粉混合后的流動性

進一步考察二氧化硅的用量。按表3取原料混合粉及輔料，混合均勻，分別測定休止角，并計算RSD值。結果見表3。由表3 可見，藥用糊精用量16.5 g，二氧化硅用量0.5 g時，休止角為33.90°，流動性達標。最終確定配方量中藥用糊精用量為原料粉重的22 %，二氧化硅為原料粉重的0.66 %。

表3 二氧化硅用量考察結果

2.2.3 混合時間考察 將原料混合粉與輔料按比例置于混合機中，分別混合5，10，20，25 min，制成總混合粉。觀察總混合粉色澤和均勻度，并抽取5個點（左上、右上、左下、右下、中間），按2.1項下色譜條件測定葉黃素含量，驗證混合均一性。根據表4，混合20 min與混合25 min后粉末色澤均勻度均較好。混合20 min的總混合粉，抽取5個點（左上、右上、左下、右下、中間），測定葉黃素的含量，驗證混合均勻度，并計算RSD。葉黃素的含量平均值為18.96 mg/g，RSD為1.44 %（＜5 %），表明混合均勻，結果見表5。最終確定混合時間為20 min。

表4 混合時間考察結果

表5 混合結果驗證

2.2.4 膠囊灌裝 采用量筒法測定堆密度[13]。測得顆粒堆密度為0.497 g/ml，計算得0號膠囊的理論裝量為0.34 g，1號膠囊的理論裝量為0.27 g。

分別取0號空心膠囊和1號空心膠囊100粒于膠囊板中，稱取粉末，進行手工試裝至滿，隨機測定5粒膠囊實際裝入的粉末量。測得0號膠囊實際平均裝量為0.307 g，故選擇0號膠囊。最終確定裝量規格為每粒裝0.3 g。

2.2.5 膠囊檢查

2.2.5.1 裝量差異檢查 按以上工藝制備3批顆粒并灌裝，考察成品率與裝量差異，并測定葉黃素含量。結果見表6。經檢查，裝量差異符合要求。

表6 膠囊裝量差異檢查和含量測定結果

2.2.5.2 崩解時限檢查 按《中國藥典》2020年版崩解時限檢查法膠囊劑檢查方法[14]進行。結果顯示，6次測定，膠囊均在30 min內全部崩解并通過篩網，符合要求。

根據上述研究，最終確立制劑工藝為：藥用糊精添加用量為原料粉重的22 %，二氧化硅添加用量為原料粉重的0.66 %，混合20 min。灌裝0號膠囊，裝量規格為每粒0.3 g。

2.3 葉黃素含量測定方法學考察

本品中葉黃素為主要功效成分。參考相關文獻和法規[15-17]，建立葉黃素檢測方法，并進行方法學考察。

2.3.1 溶液制備

2.3.1.1 對照品溶液制備 取葉黃素粉40 mg，精密稱定，置入100 ml量瓶，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.1.2 供試品溶液制備 取膠囊內容物約0.1 g，精密稱定，置入具塞錐形瓶，加甲醇100 ml，搖勻，超聲5 min，補足失重，濾過，即得。

2.3.1.3 陰性樣品溶液制備 除葉黃素粉外，按處方比例稱取其他原輔料，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.3.2 專屬性實驗 按2.3.1項下方法制備對照品溶液，供試品溶液和陰性樣品溶液，精密吸取10 μl進樣，對比出峰時間。在與葉黃素相應的保留時間處陰性樣品溶液無色譜峰，其他成分對葉黃素的含量測定無干擾，表明本方法具有專屬性。

圖2 專屬性實驗HPLC圖譜

2.3.3 檢出限 按2.3.1.1項下方法制備對照品溶液，稀釋后精密吸取10 μl進樣。以信噪比（S/N）為3:1時濃度為檢出限（1.13 μg/ml）。

2.3.4 線性關系考察 按2.3.1.1項下方法制備對照品溶液，吸取適量對照品溶液并稀釋成40，20，10，5，2 μg/ml的溶液。精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。葉黃素標準曲線回歸方程為：Y=30124X-32104（R2=0.9997），表明在2～80 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.3.5 精密度 按2.3.1.2項下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，連續進樣6次，測定其峰面積。計算得峰面積RSD為0.60 %，表明儀器精密度良好。

2.3.6 加樣回收試驗 按2.3.1.2項下方法制備供試品溶液，分別加入相當于成品含量50 %，100 %，150 %的對照品溶液，平行3份，測得平均加樣回收率為99.13 %，RSD為2.84 %，結果見表7。

表7 葉黃素加樣回收試驗結果

2.3.7 樣品含量測定 結果見表6。3批葉藍明目膠囊中葉黃素的平均含量為18.87 mg/g。

3 討論

本研究嘗試使用葉黃素粉替代葉黃素對照品建立含量測定方法，可解決葉黃素對照品昂貴、不易保存的問題，從源頭和生產過程控制膠囊質量，并節約成本，克服企業難以進行常態化檢測的困難。本研究建立的含量測定方法可同時測定保健食品中葉黃素和玉米黃質。本研究建立了葉藍明目膠囊的制劑工藝。在輔料選擇方面，常見的填充劑有藥用糊精、淀粉、微晶纖維素、麥芽糊精、預膠化淀粉等，常用的潤滑劑有硬脂酸鎂、滑石粉、二氧化硅等。由于膠囊劑要求填充物料有良好的抗吸濕性和流動性，最終確定以藥用糊精為膠囊填充劑，二氧化硅為潤滑劑。通常要求混合粉末休止角小于40°時才符合生產需求。本研究中添加相當于原料粉重0.66 %的二氧化硅時，休止角為33.90°，符合生產要求，因此無需制粒，可節約制粒成本，避免物料損失。