PCR檢測(cè)高危HPV基因分型對(duì)宮頸癌及癌前病變的診斷價(jià)值分析

袁洋

（南陽市第一人民醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科，河南 南陽 473004）

宮頸癌為臨床常見宮頸疾病，對(duì)其進(jìn)行早期診斷及治療可有效延長(zhǎng)患者生存期，探索合理有效的篩查方案也成為臨床研究的重點(diǎn)［1］。液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)（TCT）為宮頸疾病的主要檢查手段，但其檢查敏感度不足，容易漏診［2］。有研究顯示，高危人乳頭狀瘤病毒（HR-HPV）感染與宮頸癌發(fā)病息息相關(guān)［3］，目前有30 多種HPV 感染可誘導(dǎo)宮頸癌前病變及宮頸癌。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè) HR-HPV 基因分型（DNA）為HR-HPV 檢測(cè)的主要手段，因此HR-HPV DNA PCR 檢查也可輔助診斷宮頸癌［4］。目前臨床對(duì)HR-HPV DNA PCR、TCT 診斷宮頸癌及癌前病變的價(jià)值尚無統(tǒng)一定論，本研究分別采用HR-HPV DNA PCR、TCT 對(duì)宮頸癌及癌前病變患者進(jìn)行診斷，比較其臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2021 年2 月南陽市第一人民醫(yī)院婦科收治的82 例宮頸癌初次篩查患者作為研究對(duì)象。其中，年齡36～64 歲，平均（46.11±3.27）歲；孕次0～5 次，平均（2.31±0.53）次；產(chǎn)次0～4 次，平均（1.73±0.61）次。納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受宮頸癌初次篩查；②均有性接觸史，且處于非經(jīng)者；③無盆腔嚴(yán)重粘連；④既往無宮頸手術(shù)史；⑤無外陰道假絲酵母菌和陰道毛滴蟲等病原體感染等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往合并盆腔放療史；②處于妊娠及哺乳期；③近期有陰道用藥史；④合并子宮切除史；⑤合并惡性腫瘤；⑥合并有精神障礙等。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 HR-HPV DNA PCR 檢測(cè)方法及診斷標(biāo)準(zhǔn)用棉球蘸取無菌生理鹽水后擦去宮頸口外分泌物，再將用宮頸刷收集分泌物，采集子宮頸脫落細(xì)胞樣本。采用PCR 儀經(jīng)過HPV-脫氧核糖核酸提取、PCR 擴(kuò)增（95℃預(yù)變性10 min，94℃變性10 s，58℃退火50 s，38℃延伸5 s，共45 個(gè)循環(huán)）、雜交、洗膜及顯色后進(jìn)行HR-HPV 檢測(cè)，共檢測(cè)16、18、31、33、35、39、45、51、52、56 及58亞型等11 種，根據(jù)藍(lán)色斑點(diǎn)出現(xiàn)情況及出現(xiàn)位置對(duì)病毒DNA 進(jìn)行定性分析。

1.2.2 TCT 檢查方法及診斷標(biāo)準(zhǔn) 患者取截石位，窺陰器擴(kuò)張陰道，無菌棉球去除宮頸口分泌物，通過子宮細(xì)胞刷（液基薄層細(xì)胞試劑盒中配置）置入宮頸管內(nèi)約1 cm 處，輕輕繞宮頸周圍順時(shí)針方向刷5 周，從而收集宮頸口、頸管部位脫落的細(xì)胞樣本，將收集到標(biāo)本的毛刷放置到裝有適量Thin Prep 保存液的無菌玻璃瓶中，搖勻液體后漂洗，密閉送檢。保存液中的混勻細(xì)胞通過Auto Cyte 液基薄層制片機(jī)自動(dòng)制片（直徑約為2 cm），95%酒精固定；巴氏染色后用光學(xué)顯微鏡對(duì)薄層細(xì)胞涂片進(jìn)行檢查，需＞5 000 個(gè)較為清晰的鱗狀上皮細(xì)胞為制片滿意，由有經(jīng)驗(yàn)細(xì)胞學(xué)醫(yī)師閱片診斷。采用TBS 分級(jí)［5］進(jìn)行5 級(jí)分級(jí)：陰性為正常/良性；陽性為非典型鱗狀上皮細(xì)胞（AS-CUS）及以上病變。①正常/良性；②無明確診斷意義的ASCUS；③低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）；④高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）；⑤鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。

1.2.3 病理檢測(cè) 以陰道鏡下宮頸組織病理學(xué)檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，在電子陰道鏡下對(duì)宮頸內(nèi)可疑病灶進(jìn)行定位，取出部分組織進(jìn)行病理檢查。若鏡下未發(fā)現(xiàn)病灶，則在宮頸管口搔刮或進(jìn)行多點(diǎn)取材后送檢，病理結(jié)果均由2 名副主任以上職稱的病理師在對(duì)患者病史未知的情況下進(jìn)行診斷。

1.3 觀察指標(biāo)

①HR-HPV DNA PCR 診斷與病理診斷結(jié)果比較：統(tǒng)計(jì)HR-HPV DNA PCR 檢查結(jié)果對(duì)癌前病變及宮頸癌的檢出情況，并與病理診斷進(jìn)行比較。②TCT 診斷與病理診斷比較：統(tǒng)計(jì)TCT 檢查結(jié)果對(duì)癌前病變及宮頸癌的檢出情況，并與病理診斷進(jìn)行比較。③TCT、HR-HPV DNA PCR 與病理診斷比較：以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析TCT、HR-HPV DNA PCR 檢查診斷宮頸癌的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度。靈敏度=檢測(cè)結(jié)果為陽性且確為陽性例數(shù)/確診為陽性例數(shù)×100%，特異度=檢測(cè)結(jié)果為陰性且確為陰性例數(shù)/確診為陰性例數(shù)×100%，準(zhǔn)確度=（檢測(cè)結(jié)果為陽性且確為陽性例數(shù)+檢測(cè)結(jié)果為陰性且確為陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%［6］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷情況

HR-HPV DNA PCR 檢測(cè)診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷的符合率為84.15%（69/82）。見表1。

表1 HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷情況（例）

2.2 TCT 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷情況

TCT 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷的符合率為76.83%（63/82）。見表2。

表2 TCT 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷情況（例）

2.3 HR-HPV DNA PCR 與TCT 診斷價(jià)值比較

HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為86.67%、81.08%、84.15%，TCT 診斷HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為68.89%、86.49%、76.83%。HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度高于TCT，差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。見表3、表4。

表3 HR-HPV DNA PCR、TCT 診斷癌前病變及宮頸癌結(jié)果比較（例）

表4 HR-HPV DNA PCR、TCT 診斷價(jià)值比較（%）

3 討論

近年來研究顯示，我國宮頸癌發(fā)病率呈上升趨勢(shì)且存在年輕化（20～30 歲女性群體中發(fā)病率上升）現(xiàn)象［7-8］，約占女性惡性腫瘤總發(fā)生例數(shù)1/4，而我國宮頸癌病例約占全球1/3，目前宮頸癌5 年生存率平均為41%，且早期手術(shù)治療治愈率高達(dá)80～90%。宮頸癌的發(fā)展過程是量變到質(zhì)變的連續(xù)演變過程，其是一種可預(yù)防可治愈的疾病，臨床診斷成為研究該病癥的熱點(diǎn)，本研究亦采用HRHPV DNA PCR、TCT 技術(shù)應(yīng)用于宮頸癌及癌前病變篩查。

宮頸癌的癌前病變狀態(tài)較長(zhǎng)，其逐漸發(fā)展的過程也是臨床檢出及阻斷的過程。TCT 是近年宮頸細(xì)胞學(xué)的新技術(shù)，可對(duì)細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行系統(tǒng)程序化處理，薄層涂片細(xì)胞成分齊全易于觀察［9］。本研究結(jié)果顯示，TCT 診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷的符合率為76.83%（63/82），說明TCT 診斷宮頸疾病有一定診斷價(jià)值，但仍存在錯(cuò)檢、漏檢的問題，分析其原因?yàn)門CT 受標(biāo)本采集、閱片與染色技術(shù)的影響較大，容易出現(xiàn)錯(cuò)檢、漏檢，且其價(jià)格較為昂貴，限制了其臨床應(yīng)用。HR-HPV感染發(fā)生后，HR-HPV 病毒可通過將自身DNA 整合入宿主細(xì)胞中，抑制機(jī)體免疫殺傷；同時(shí)機(jī)體免疫炎癥反應(yīng)長(zhǎng)期刺激可損傷宮頸組織，進(jìn)而引起上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能改變，并釋放多種蛋白阻斷宿主細(xì)胞周期，最終導(dǎo)致宮頸細(xì)胞癌變［10］。本研究結(jié)果顯示，HR-HPV DNA PCR 檢測(cè)診斷癌前病變及宮頸癌與病理診斷的符合率為84.15%（69/82）。

本研究結(jié)果還顯示，HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為86.67%、81.08%、84.15%，TCT 診斷HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為68.89%、86.49%、76.83%，HR-HPV DNA PCR 診斷癌前病變及宮頸癌的靈敏度高于TCT［11］，比較有差異，提示HR-HPV DNA PCR 在宮頸癌及癌前病變篩查中診斷價(jià)值更高，與既往研究一致。分析其原因：①各種流行病學(xué)分析及生物信息學(xué)研究表明，HR-HPV 感染與宮頸疾病的發(fā)生密切相關(guān)，不同疾病進(jìn)展的宮頸癌及癌前病變患者HR-HPV 表達(dá)情況存在差異，HR-HPV DNA PCR 可通過檢測(cè)HR-HPV DNA 表達(dá)情況，分析HR-HPV 病毒侵及宮頸細(xì)胞的程度為宮頸癌及癌前病變?cè)\斷提供依據(jù)［12］；②檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性受覆蓋樣本情況、閱片重復(fù)性影響，相較TCT，HR-HPV DNA PCR 檢測(cè)覆蓋率更高，重復(fù)性也更好，從而能夠得到客觀的結(jié)果，避免模糊判斷帶來的靈敏度降低。值得注意的是，本研究樣本量較小，且為單中心研究，HR-HPV DNA PCR、TCT 在宮頸癌及癌前病變篩查中應(yīng)用價(jià)值，仍有待進(jìn)一步大樣本量、多中心研究予以驗(yàn)證。

綜上所述，HR-HPV DNA PCR、TCT 在宮頸癌及癌前病變篩查中有良好的應(yīng)用價(jià)值，HR-HPV DNA PCR 的診斷價(jià)值更高，值得臨床進(jìn)一步的研究與應(yīng)用。