食品中誘惑紅測定方法驗證

張艷紅，董 浩

（石河子質(zhì)量與計量檢測所，新疆石河子 832000）

關(guān)鍵字：方法驗證；誘惑紅；檢出限；準(zhǔn)確度；精密度

誘惑紅，國際染料索引稱為食用紅色17，它是由4-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯磺酸經(jīng)重氮化后與6-羥基-2-萘磺酸鈉耦合而成的合成染料。誘惑紅是我國在1990 年批準(zhǔn)的一批食品著色劑。人工合成色素作為食品添加劑常被用于食品生產(chǎn)加工，它可以增加食品美觀和提高人們的食欲，但使用過量會對人體產(chǎn)生有害作用，因此我國規(guī)定了誘惑紅使用限量和檢測方法[1-4]。

《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定了汽水、硬糖、糕點和冰淇淋中誘惑紅的測定方法，其測定原理是誘惑紅在酸性條件下被聚酰胺粉吸附，而在堿性條件下解吸附，再用紙色譜法進(jìn)行分離后，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性、定量[5]。

方法驗證是指實驗室通過核查，提供客觀有效的證據(jù)證明自身滿足檢測方法規(guī)定要求的過程，即證實該實驗室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、環(huán)境、人員等條件能滿足該方法，適用于實驗室新引入的標(biāo)準(zhǔn)方法[6]。方法驗證過程中關(guān)鍵的參數(shù)取決于方法的特性和可能測到的樣品基質(zhì)的檢測范圍，至少應(yīng)測定準(zhǔn)確度和精密度。對于痕量化學(xué)分析實驗室，實驗室還應(yīng)確保獲得適當(dāng)?shù)臋z出限和定量限。通常情況下定量分析方法驗證的參數(shù)包括但不限于選擇性、線性范圍、檢出限、定量限、精密度（重復(fù)性和再現(xiàn)性）及準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，批號C10125000，純度80.0%（德國LGC Labortion）。

UV1750 紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的測定

稱取誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.012 5 g，用水溶解后定容至100 mL，濃度為100 μg/mL，分別吸取0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL 和1.0 mL于10 mL 比色管中，加水稀釋至刻度，其濃度分別為0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、8.0 μg/mL 和10.0 μg/mL， 于500 nm 下 測 定 吸光值[5]。

1.2.2 空白值測定及方法檢出限的計算

依據(jù)《環(huán)境監(jiān)測分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》（HJ 168—2020）[7]檢出限的一般確定方法如下。

按照樣品分析的全部步驟，重復(fù)n（≥7）次空白試驗，將各測定結(jié)果換算為樣品中的濃度或含量，計算n次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按公式計算方法檢出限：

式中：MDL為方法檢出限，μg/mL；n為樣品的平行測定次數(shù)；t為自由度為n-1、置信度為99%時的t分布值（單側(cè)）；S為n次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差。其中，當(dāng)自由度為n-1，置信度為99%時的t值可參考表1 取值。

表1 t 值表

1.2.3 精密度的測定

吸取濃度為100 μg/mL 的誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 mL 于10 mL 比色管中，加水稀釋至刻度，溶液的濃度為5.0 μg/mL，此濃度配制成10 個樣品，于500 nm 下測定吸光值，按下式計算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)（精密度）：

1.2.4 準(zhǔn)確度的測定

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法對樣品進(jìn)行處理，在該樣品中加入100 μg/mL 誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2 mL，按照樣品處理方法進(jìn)行處理，與原樣品一同在500 nm 下測定其吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線回歸方程計算樣品中的濃度，然后根據(jù)加入標(biāo)準(zhǔn)濃度，計算其回收率。

2 結(jié)果與分析

根據(jù)《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南》（GB/T 27417—2017）、《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）對本實驗的線性范圍、檢出限、精密度和準(zhǔn)確度進(jìn)行相關(guān)評價。

2.1 線性范圍

根據(jù)《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南》（GB/T 27417—2017）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定準(zhǔn)確定量的方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.99，本實驗按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的測定條件進(jìn)行測定，其線性回歸方程為y=0.058 8x+0.004 9，相關(guān)系數(shù)為0.999 7，線性范圍為0 ～10.0 μg/mL，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖1 所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

2.2 檢出限

根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定，食品中誘惑紅的檢出限為取樣量為10 g 時，檢出限為25 mg/kg，本實驗誘惑紅的檢出限為0.013 μg/mL，符合標(biāo)準(zhǔn)方法要求。檢出限結(jié)果見表2。

表2 空白值的測定結(jié)果及方法檢出限的計算結(jié)果

2.3 精密度

根據(jù)《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南》（GB/T 27417—2017）規(guī)定，被測組分含量1 μg/kg 時，實驗室內(nèi)變異系數(shù)為30%，10 μg/kg 時，實驗室內(nèi)變異系數(shù)為21%；根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定，在重復(fù)條件下獲得的2 次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%[5]。本實驗測得誘惑紅的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）為1.35%， 符合標(biāo)準(zhǔn)方法要求。精密度結(jié)果見表3。

表3 試樣精密度測定結(jié)果

2.4 準(zhǔn)確度

根據(jù)《合格評定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗證指南》（GB/T 27417—2017）規(guī)定，當(dāng)濃度水平為1 ～100 mg/kg 時，回收率為90%～110%。根據(jù)方法條件，本實驗測定的加標(biāo)回收率為93.7%～101.6%，平均值為97.3%，其結(jié)果在GB/T 27417—2017 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍內(nèi)，說明本實驗條件可行有效。準(zhǔn)確度結(jié)果見表4。

表4 準(zhǔn)確度測定結(jié)果

3 結(jié)論

按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定，對誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)工作曲線線性范圍、空白值最低檢出限、精密度、加標(biāo)回收率的驗證，表明該實驗室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、環(huán)境、人員等條件能滿足《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法，因此本所實驗室對《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍的產(chǎn)品可按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法開展檢測。另外，對其他用分光光度法測定的項目也可按照本文的驗證方法進(jìn)行方法評價，以此確定該項目實驗室能否開展。