施今墨降糖對藥方對2型糖尿病大鼠糖脂代謝及胰島素抵抗的影響

★ 吳梅香 呂嘉婧 羅秀 曹治云 王紅日 陳旭征（.福建中醫藥大學附屬人民醫院 福州 30003；.福建中醫藥大學藥學院 福州 30；3.福建中醫藥大學中西醫結合研究院 福州 30；4.福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室 福州 30；.福建中醫藥大學附屬第二人民醫院 福州 3000）

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一種以慢性高血糖為特征的代謝綜合征，是由于胰島素分泌和/或作用缺陷所引起［1］。胰島素抵抗（insulin resistance，IR）是T2DM的主要病理基礎，也是導致其他諸多慢性并發癥和心腦血管等組織器官發生功能減退或進行性退變的共同病因，而糖脂代謝在胰島素抵抗中發揮著重要作用［2］。因此，改善IR和糖脂代謝成為了防治T2DM急需解決的問題。

T2DM在中醫學又被稱為“消渴病”，以“陰虛”為本，“燥熱”為標。中醫藥論治T2DM的歷史悠久，療效明確。國醫大師施今墨，論治消渴病經驗豐富，其中降糖對藥方采用氣陰雙補的方法，采用黃芪、生地，蒼術、玄參，丹參、葛根三組對藥配伍，益氣養陰固其本，活血化瘀治其標，標本兼治。經過前期的臨床研究驗證了施今墨降糖對藥方在糖尿病的臨床診療中具有顯著的療效［3-4］。本實驗采用糖尿病模型大鼠進行干預，觀察施今墨降糖對藥方對糖尿病大鼠的糖脂代謝以及IR的影響，為進一步研究與驗證施今墨降糖對藥方臨床療效與作用機理。

1 實驗材料

1.1 動物

清潔級SD雄性大鼠30只，4～6周齡，體質量160～180 g，購自上海杰思捷實驗動物有限公司（許可證號碼：SCXK（滬）2013-0006）。大鼠飼養于福建中醫藥大學實驗動物中心，溫度22～25 ℃，濕度60%～70%，12 h光照維持，晝夜循環，自由攝食與飲水。

1.2 藥物

施今墨降糖對藥方：黃芪30 g、生地黃30 g、蒼術15 g、玄參30 g、丹參30 g、葛根15 g，由福建中醫藥大學附屬人民醫院藥劑科提供。

1.3 試劑

鏈脲佐菌素（STZ，麥克林，CAS：18883-66-4）；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）測定試劑盒（南京建成生物工程研究所，生產批號：20181017）；胰島素測試盒（北方生物技術研究所，生產批號：20180928）；血糖試紙（魚躍醫療）；高脂飼料（福建善思生物科技有限公司）。

1.4 儀器

微量血糖測試儀（魚躍醫療）；大鼠體重秤（松竫高精度電子秤）；全自動酶標儀（美國BioTek公司，ELX800）。

2 實驗方法

2.1 造模方法

將30只大鼠以普通飼料進行適應性喂養1周后，采用隨機數字法將SD大鼠隨機分為正常組、模型組、施今墨降糖對藥方3組，每組10只。除正常組外，其余兩組采用STZ腹腔注射結合高脂飼料誘導T2DM模型大鼠。正常組給予普通飼料喂養6周，模型組、施今墨降糖對藥方組均給予高脂飼料（60.7%基礎飼料，15%蔗糖，10%豬油，10%蛋黃粉，4%膽固醇，0.3%膽酚鹽）喂養6周。6周后，空腹12 h，除正常組以外的兩組的大鼠均腹腔注射小劑量STZ（30 mg/kg），正常組腹腔注射等體積的生理鹽水。3 d后模型組、施今墨降糖對藥方組所有大鼠均再次腹腔注射小劑量STZ（30 mg/kg），正常組腹腔注射等體積的生理鹽水。第2次腹腔注射后1周測空腹血糖（FBG），以2次FBG高于11.1 mmol/L或（和）隨機血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病大鼠成模標準［5］。除正常組以外的兩組大鼠全部造模成功。

2.2 干預方法

建模成功后，正常組、模型組給予等量的生理鹽水灌胃，施今墨降糖對藥方組給予施今墨降糖對藥方，劑量為2.14 g/（kg·d）灌胃，灌胃給藥8周。給藥期間，所有實驗動物予以普通飼料喂養。喂養期間，所有大鼠自由飲水。

2.3 觀察指標

以魚躍血糖儀采用尾部釆血法檢測血糖，采集第2次STZ腹腔注射后1周造模成功時的各組大鼠FBG以及采集口服糖耐量試驗（OGTT試驗）時0 h、0.5 h、1 h、2 h的血糖（將第2次STZ腹腔注射后1周造模成功時的各組大鼠FBG作為干預前FBG，將OGTT試驗時0 h的FBG作為干預8周后的FBG）；末次給藥后，禁食不禁飲12 h，100 g/L水合氯醛3 mL/kg腹腔麻醉后開腹經腹主動脈采血，3 000 r/min離心15 min，取上清液，-80 ℃保存，采用全自動酶標儀檢測TG、TC、空腹胰島素（FINS），操作流程依據說明書規程進行，并計算胰島素抵抗指數（HOMA-IR）。HOMA-IR計算公式為：FINS×FBG/22.5。

2.4 統計學方法

采用SPSS 20.0統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 各組大鼠一般情況及體重比較

3.1.1 各組大鼠一般情況正常組大鼠飲食、進水正常，二便正常，皮毛順滑，精神良好，多動；模型組大鼠體重下降，進食、飲水較多，尿量較多，大便質地偏稀，皮毛較為枯槁，精神較為萎靡；施今墨降糖對藥方組上述情況均比模型組情況較好，較正常組稍次之。

3.1.2 各組大鼠體重比較與正常組比較，模型組大鼠體重明顯減輕（P＜0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對藥方組大鼠體重明顯增加（P＜0.05），接近正常組水平。見表1。

表1 3組大鼠體重比較（ ±s，n=10） g

表1 3組大鼠體重比較（ ±s，n=10） g

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 體重正常組 571.20±57.94模型組 388.20±52.34*施今墨降糖對藥方組 526.50±94.09#

3.2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較

與正常組比較，模型組FBG、HOMA-IR均明顯升高，FINS明顯降低（P＜0.05）；與正常組比較，施今墨降糖對藥方組干預前的FBG有明顯升高（P＜0.05），干預后的FBG、HOMA-IR均無明顯差異（P＞0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對藥方組干預8周后的FBG、HOMA-IR均明顯降低（P＜0.05），FINS明顯升高（P＜0.05）。與本組治療前相比較，施今墨降糖對藥方組干預治療8周后FBG較前明顯下降（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較（ ±s，n=10）

表2 各組大鼠FBG、FINS、HOMA-IR比較（ ±s，n=10）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與本組干預前比較，**P＜0.05。

組別 FBG/（mmol·L-1） FINS/（mU·L-1） HOMA-IR干預前 干預8周后正常組 4.12±0.18 5.03±0.84 54.81±10.19 12.25±0.97模型組 24.64±2.88* 27.13±6.78* 22.64±0.55* 27.34±2.21*施今墨降糖對藥方組 23.39±2.58*# 7.97±2.42#** 43.65±4.92# 15.19±1.17#

3.3 各組大鼠血清TC、TG觀察與正常組比較

模型組TC、TG均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，施今墨降糖對藥方組大鼠血清TC、TG均明顯減低（P＜0.05），接近正常組水平。見表3。

表3 各組大鼠治療后TC、TG水平比較（ ±s，n=10）mmol/L

表3 各組大鼠治療后TC、TG水平比較（ ±s，n=10）mmol/L

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

3.4 各組大鼠OGTT實驗指標比較與正常組比較

模型組在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均明顯升高（P＜0.05），表示模型組存在糖耐量異常；與正常組比較，施今墨降糖對藥方組在FBG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG無明顯差異（P＞0.05）。與模型組相比較，施今墨降糖對藥方組在FBG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG均具有明顯降低（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠OGTT實驗指標比較（ ±s，n=10）mmol/L

表4 各組大鼠OGTT實驗指標比較（ ±s，n=10）mmol/L

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別 FBG OGTT-0.5 h PGOGTT-1 h PGOGTT-2 h PG正常組 5.03±0.84 8.10±0.47 6.21±0.39 6.46±0.95模型組 27.13±6.78* 32.63±0.64* 29.15±4.33*27.47±3.97*施今墨降糖對藥方組 7.97±2.42# 10.70±3.82# 11.18±4.53# 9.43±3.85#

4 討論

現代醫學研究表明，IR是T2DM發生發展的核心問題，也是其發病的重要的病理生理基礎，而全身的糖脂代謝紊亂，則起著加重組織及機體胰島素抵抗的作用。大量的中醫藥研究發現，充分運用中醫藥整體結合及辨證論治的特點，對于改善胰島素抵抗及糖脂代謝方面有著明顯的效果，可以起到調節糖脂代謝，降低糖脂毒性，多途徑、多環節地改善IR的作用［6-7］。

施今墨降糖對藥方是施今墨名老中醫在長期治療消渴病的臨床過程中得出的經驗方，由黃芪、生地、玄參、蒼術、丹參、葛根三組對藥組成。中醫方面，黃芪補脾胃之中氣，固下焦之元氣，生地滋陰、涼血、固腎，兩藥合用共奏健脾氣，固腎陰；蒼術化脾濕，升脾氣，玄參退熱降濁，兩藥配伍，共奏滋陰清熱、健脾降濁之功。全方補益氣血，調整陰陽固本的同時，不忘活血化瘀治標。葛根升發脾胃陽氣，布散全身津液，丹參活血化瘀、行血止痛，兩藥共奏活血化瘀，條達氣血，生津止渴之功［8］。現代藥理學中，黃芪在治療T2DM的臨床療效早已被證實，黃芪多糖作為黃芪主要的生物活性成分之一，胡桂禎等［9］通過研究發現，黃芪多糖具有改善胰島素抵抗、增加胰島素敏感性、調節脂質代謝、抗炎、抗氧化、保護胰島β細胞等多種藥理作用。李莉［10］研究發現，生地黃既可以改善胰島β細胞的功能，緩解胰島素抵抗，還可以改善糖脂代謝，降低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性。田會東等［11］通過對蒼術-玄參對藥對T2DM的網絡藥理研究發現蒼術-玄參對藥中的活性成分能通過多靶點、多通路起到治療T2DM的作用，為蒼術-玄參對藥治療T2DM的藥理分析提供了新的科學論據。劉倩等［12］通過研究指出，黃芪與葛根的配伍，促進了脂肪組織脂聯素（APN）、瘦素（LEP）的分泌，減少了腫瘤壞死因子α、白介素-12的分泌，抑制了趨化素、趨化素受體mRNA的表達，從而達到改善T2DM大鼠糖脂代謝的作用。柳剛等［13］的研究證實了丹參有保護T2DM大鼠腎臟的作用，可以抑制轉化生長因子β1（TGF-β1）、纖溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）等細胞因子的表達。以上研究皆為施今墨降糖對藥方治療T2DM提供了科學依據。

本研究結果表明，STZ腹腔注射結合高脂飼料可以造成大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR的明顯升高，FINS和體重的明顯降低，說明T2DM造模成功。與模型組相比較，施今墨降糖對藥方組T2DM大鼠的FBG、TC、TG、OGTT-0.5 h PG、OGTT-1 h PG、OGTT-2 h PG、HOMA-IR均明顯下降，FINS升高，并且改善了大鼠體重。研究結果證實了施今墨降糖對藥方可緩解T2DM大鼠的體重下降，降低T2DM大鼠的高血糖水平，增強其對糖負荷的耐受性，促進T2DM大鼠的血脂代謝，減輕胰島功能的受損程度，降低胰島素抵抗。這一研究結果為臨床防治糖尿病糖脂代謝紊亂以及胰島素抵抗提供了新的治療思路以及實驗依據。但其作用機理以及作用靶點尚未明確，仍有待進一步研究。