TAMs、PRL?3和C?erbB?2與乳腺癌淋巴結轉移及預后的相關性

王麗娟 林曉茹 陳云婷 陳露文

乳腺癌的早期診斷及治療對患者預后有積極影響，了解影響患者預后的危險因素，采取針對性預防措施也是降低患者預后不良的重要手段。以往研究顯示，腫瘤微環境的改變與乳腺癌的發生有密切的聯系［1］。腫瘤相關巨噬細胞（Tumor?asso?ciated macrophages，TAMs）占間質細胞的50%以上，是腫瘤微環境中的重要成份，眾多研究表明TAMs 與多種惡性腫瘤發生、發展、預后關系密切，多種腫瘤中均存在TAMs 浸潤［2］。研究表明，肝再生磷酸酶（Regenerative Phosphatase?3 ，PRL?3）與腫瘤轉移之間存在聯系，在胃癌、直腸癌等多種惡性腫瘤中均為高表達，可促進腫瘤細胞增殖、黏附及遷移［3］。人類表皮生長因子受體2（Human epi?dermal growth factor receptor 2，C?erbB?2）屬于原癌基因，是目前公認的重要腫瘤標志物［4］。本文將通過分析TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 在乳腺癌中的表達情況，了解其與患者轉移、預后的關系，以期為臨床對乳腺癌轉移、預后評估提供新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年5月至2020年5月海南省三亞市婦女兒童醫院收治的115 例乳腺癌患者術后病理組織作為觀察組，均為女性，平均年齡（48.33±5.16）歲。淋巴結轉移者46 例，未轉移者69 例。納入標準：①經術后病理檢查及影像學檢查診斷為乳腺癌，且符合《2020年CSCO 乳腺癌診療指南》［5］中的診斷標準；②臨床資料完整；③簽署知情同意書；④均為首次手術治療者。排除標準：①合并其他臟器惡性腫瘤者；②入院前曾接受過放療、新輔助化療及腫物切除者；③合并免疫性疾病者。同時取觀察組患者距腫瘤切緣＞5 cm 處遠癌組織作為對照組。本研究經院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 檢測方法

TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 均使用免疫組化學檢測方法，檢測試劑：TAMs 為鼠抗人單克隆CD68 抗體（北京中杉生物技術公司）；PRL?3 為一抗PRL?3 兔抗人多克隆抗體（北京中杉生物技術公司）；C?erbB?2 為兔抗人C?erbB?2 單克隆抗體（福州邁新生物技術開發有限公司），制片完成后以光學顯微鏡進行觀察。

結果判讀［6］：TAMs：在細胞膜、細胞漿內可見棕黃色或黃褐色顆粒為陽性；PRL?3 細胞質中見黃色或棕黃色顆粒為陽性；C?erbB?2 以細胞膜出現棕色或細胞膜漿著棕色為陽性。在100 倍鏡下觀察切片情況，計數時使用高倍鏡（×400）。每個視野中計數100 個癌細胞中陽性表達細胞數，總共計數5 個視野，取平均值。

使用半定量積分法對結果進行判讀［6］。0 分：無陽性細胞；1 分：陽性細胞數≤25%；2 分：陽性細胞數26%～50%，3 分：陽性細胞數51%～75%，4 分：陽性細胞數≥76%。以細胞著色程度進行評分：0 分：無著色細胞；1 分：細胞著色為淡黃色；2 分：著色為棕黃色；3 分：著色為著色為棕褐色。根據兩結果得分計算結果：積分低于3 分為陰性，3 分以上則為陽性。

1.2.2 隨訪

患者手術治療后隨訪12 個月，隨訪截止至2021年5月31日，了解患者預后情況，根據2020年CSCO 乳腺癌診療指南［5］分為預后不良組（高復發風險者）：①腋窩淋巴結≥4 個陽性，②淋巴結1～3 個陽性并伴有其他復發風險，③三陰乳腺癌；預后良好組（低復發風險者）：①淋巴結1～3 個（LumnianA 型），②Ki?67 高表達（≤30%），③腫瘤≤2 cm，④年齡≤35 歲。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件進行統計分析，計量資料采用（）表示，行t檢驗；計數資料采用n（%）表示，行χ2檢驗；采用多元Logistic回歸分析影響乳腺癌患者預后生存的危險因素，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 表達情況比較

觀察組TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 陽性表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見圖1、表1。

圖1 TAMs、PRL?3 及C?erbB?2SP 染色圖（SP，×400）Figure 1 TAMs，PRL?3 and c?erbb?2sp staining diagram（SP，×400）

表1 兩組TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 表達情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of the expression of TAMs，PRL?3 and C?erbB?2 between the two groups［n（%）］

2.2 有無淋巴結轉移者TAMs、PRL?3 及C?erbB?2表達情況比較

轉移組TAMs、PRL?3及C?erbB?2陽性表達率明顯高于無轉移組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 有無淋巴結轉移者TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 表達情況比較［n（%）］Table 2 Comparison of TAMs，PRL?3 and C?erbB?2 expression with or without lymph node metastasis［n（%）］

2.3 影響乳腺癌預后不良的因素分析

115 例患者隨訪12 個月后預后良好88 例（預后良好組），預后不良27 例（預后不良組）。預后不良組淋巴結轉移者、病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、TAMs陽性、PRL?3 陽性、C?erbB?2 陽性占比明顯高于預后良好組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 影響乳腺癌患者預后不良危險因素分析

賦予值見表3，Logistic回歸模型分析得病理分期、分化程度、淋巴結轉移情況、TAMs、PRL?3及C?erbB?2 為影響乳腺癌預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表3 影響乳腺癌預后不良的因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of factors affecting the poor prognosis of breast cancer［n（%）］

表4 影響乳腺癌患者預后不良危險因素分析Table 4 Analysis of risk factors affecting the prognosis of breast cancer patients

3 討論

TAMs 為腫瘤間質細胞的重要一員，所占比例可達50%～80%，其可通過直接或間接的方式促進腫瘤發生與進展［7］。研究顯示TAMs 可促進腫瘤細胞分裂、血管生成、誘導腫瘤浸潤、參與免疫抑制與逃逸，其生物學功能與腫瘤發生密切相關，可促進腫瘤進展，與腫瘤預后不良存在密切聯系［8］。也有研究發現，腫瘤間質內TAMs 高表達的乳腺癌患者疾病進展快、易發生轉移，預后較差，且腫瘤血管生成與TAMs 之間關系密切，與患者微血管密度成正相關［9］。本研究結果提示TAMs 在乳腺癌進展過程中發揮著重要的作用，可能與TAMs可促進腫瘤血管生成、加速腫瘤發展有關。

PRL?3 為酪氨酸蛋白磷酸酶家族中的一員，其在腫瘤中生物活性高，在心肌細胞、骨骼肌、胰腺組織中有不同程度表達，在肺部、腦、腎等組織中低表達［10］。以往研究顯示PRL?3 在正常胃粘膜組織中表達陰性，在胃癌組織中陽性率高，且與胃癌患者淋巴結轉移情況密切相關［11］。也有報道顯示，PRL?3 可促進腫瘤相關性巨噬細胞分泌，從而誘導結腸癌細胞轉移，影響患者預后情況［12］。本研究中，PRL?3 在癌組織中高表達，淋巴結轉移者表達亦高于未轉移者，PRL?3 高表達為乳腺癌患者預后的相關因素，說明PRL?3 在乳腺癌發生、轉移的過程中可能發揮了一定的作用。結合以往文獻分析，可能與以下幾點有關：①PRL?3 可刺激血管內皮生長因子及其相關受體的過高表達，誘導腫瘤生長、侵襲和轉移；②PRL?3 可正向調控P13K 細胞通路誘導腫瘤侵襲和轉移；③促使PRL?3 信號轉導途徑激活，進而發揮調控腫瘤細胞活動性和侵襲性；④介導細胞外調節蛋白激酶信號傳導通路的作用，可刺激腫瘤血管的生成，進一步加快腫瘤的生長和成熟，同時可誘導淋巴結轉移和遠處轉移［13］。

C?erbB?2是目前公認與乳腺癌發生、發展之間有密切聯系的原癌基因，對細胞生長、增殖、分化具有調控作用；其產物的過度表達往往提示腫瘤惡性程度高，預后情況不佳。目前研究發現C?erbB?2 在乳腺癌組織中的表達程度結果差異較大，最低陽性表達為20%，最高可達70%，本組中C?erbB?2 在乳腺癌組織陽性表達率為67.82%，與大部分研究結果相符［14］。有學者認為C?erbB?2表達與乳腺癌臨床分期、病理類型、分化程度等存在相關性，C?erbB?2 表達情況與乳腺癌患者淋巴結轉移情況為正相關，C?erbB?2 陽性表達者出現轉移、復發機率高，總生存期短［15］。本研究中，C?erbB?2 在癌組織、有淋巴結轉移者中表達明顯高于癌旁組織以及無淋巴結轉移者，且與患者預后存在一定聯系，說明C?erbB?2 表達與乳腺癌淋巴結轉移之間密切相關，C?erbB?2 過度表達的乳腺癌具有更強的侵襲力與轉移能力，此類患者預后情況也較差。

綜上所述，TAMs、PRL?3 及C?erbB?2 過度表達與乳腺癌淋巴結轉移可能存在一定的聯系，對乳腺癌患者預后評估有參考價值。