齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1與種植體周圍炎ISQ值的關(guān)系及聯(lián)合診斷價值

曹宇皎 謝紅梅 田虹 李江寧 劉榮 夏霏 顏雅慧 韋麗賓 韓雪

研究表明，種植體能否在復(fù)雜的口腔環(huán)境中長期行使功能，主要取決于其能否獲得并維持骨結(jié)合［1?2］。而相關(guān)調(diào)查顯示，種植體周圍炎（Peri implant inflammation，PI）患病率高達19.80%，會破壞種植體周圍骨組織，導(dǎo)致種植體松動，甚至脫落，從而影響種植體治療效益［3］。故需及早采取可靠的診療、預(yù)防措施。黏蛋白?4（Mucin?4，MUC?4）是跨膜黏蛋白家族重要成員，參與炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展，已有報道證實其與牙周炎癥有強相關(guān)性［4］。低氧誘導(dǎo)因子?1α（Hypoxia inducible factor?1 α，HIF?1α）能夠激活宿主免疫反應(yīng)，在牙周組織破壞、降解過程中發(fā)揮重要作用［5］。單核細(xì)胞趨化蛋白?1（Monocyte chemoattractant protein?1，MCP?1）屬于趨化因子，具有促炎作用，能經(jīng)由誘導(dǎo)組織損傷、刺激骨吸收等途徑參與牙周組織破壞［6］。但關(guān)于三者與種植體穩(wěn)定性關(guān)系及對PI 的診斷價值仍有待明確。故本研究嘗試探討齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 與種植體穩(wěn)定系數(shù)（Implant stability quo?tient，ISQ）值的關(guān)系及聯(lián)合診斷價值。報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取華北石油管理局總醫(yī)院口腔科2018年6月至2020年6月收治的104 例因牙列缺損行種植修復(fù)患者作為研究對象，其中PI 患者70 例作為觀察組，種植體周圍組織健康的患者34 例作為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均因牙列缺損接受種植修復(fù)；②參考文獻［7］確診PD和種植體周圍組織健康；③種植體行使功能3個月及以上；④患者或家屬均知情本研究，自愿簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①吸煙、酗酒者；②伴有口腔癌者；③種植修復(fù)前已存在牙周炎癥者；④妊娠期、哺乳期女性；⑤種植體存在咬合創(chuàng)傷者。

1.3 方法

于所有患者入院當(dāng)日采集齦溝液樣本，取樣位點為每個種植體的頰（唇）側(cè)近遠(yuǎn)中各2 個位點，將待取部位的小齦上菌斑、牙石仔細(xì)去除后財經(jīng)無菌干棉球隔濕，吹干牙面（氣槍吹10 s），將紙尖輕輕插入種植體齦溝內(nèi)，遇到輕微阻力即止，30 s 后取出，取相同長度（2 mm）的濾紙條置入含有PBS 緩沖液（200 μL）的Eppendorf 管內(nèi)，震蕩30 min，在4℃條件下進行離心處理，離心速率為10 000 r/min，離心時間為10 min，半徑為10 cm，取上清液，采用賽默飛Multiskan Sky 全自動酶標(biāo)儀及試劑盒以酶聯(lián)免疫吸附法檢測齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 水平。

1.4 觀察指標(biāo)

收集兩組臨床資料，包括年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)（Body mass index，BMI）、牙列缺損原因、種植體行使時間、ISQ 值等資料，其中ISQ 值采用Os?stell Mentor 分析儀進行測定，數(shù)值范圍為1～100，數(shù)值越高，提示種植體穩(wěn)定性越高［8］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料以（）描述，獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson 線性相關(guān)法；診斷價值分析采用受試者工作特征（ROC）曲線，聯(lián)合診斷實施Logistic 二元回歸擬合，返回預(yù)測概率logit（p），將其作為獨立檢驗變量。P＜0.05 表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較

兩組年齡、性別、BMI、牙列缺損原因、種植體行使時間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；觀察組ISQ 值低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組臨床資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between the two groups［（±s），n（%）］

表1 兩組臨床資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of clinical data between the two groups［（±s），n（%）］

資料年齡（歲）性別男女BMI（kg/m2）牙列缺損原因牙周病牙體缺損外傷種植體行使時間（月）ISQ 值觀察組（n=70）42.16±6.59 31（44.29）39（55.71）22.67±2.12 24（34.29）34（48.57）12（17.14）5.83±1.26 81.87±4.20對照組（n=34）41.57±5.88 13（38.24）21（61.76）22.38±1.97 10（29.41）18（52.94）6（17.65）6.04±1.50 85.63±5.11 t/χ2值0.443 0.343 0.669 0.391 0.748 3.984 P 值0.659 0.558 0.505 0.696 0.456＜0.001

2.2 兩組齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 水平比較

觀察組齦溝液MUC?4 低于對照組，HIF?1α、MCP?1 高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 水平比較（±s）Table 2 Comparison of gingival sulcus fluid MUC?4，HIF?1α，and MCP?1 levels between the two groups（±s）

表2 兩組齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 水平比較（±s）Table 2 Comparison of gingival sulcus fluid MUC?4，HIF?1α，and MCP?1 levels between the two groups（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值n 70 34 MUC?4（pg/mL）3.16±1.05 5.75±1.91 8.928＜0.001 HIF?1α（μg/L）582.44±194.14 291.76±97.25 8.229＜0.001 MCP?1（pg/mL）158.42±52.80 106.57±35.49 5.179＜0.001

2.3 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 與ISQ 值的相關(guān)性

Pearson 相關(guān)性分析，齦溝液MUC?4 與ISQ 值呈正相關(guān)，HIF?1α、MCP?1 與ISQ 值呈負(fù)相關(guān)（r=0.809、-0.686、-0.720，P均＜0.001）。

2.4 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 對PI 的診斷價值

繪制ROC 曲線結(jié)果顯示，齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 三者聯(lián)合診斷PI 的AUC 為0.900，敏感度為85.71，特異度為82.35，大于各指標(biāo)單獨診斷（P＜0.05）。見表3、圖1。

表3 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 對PI 的診斷價值Table 3 gingival crevicular fluid muc?4 and HIF?1 α、Diagnostic value of MCP?1 in PI

圖1 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 對PI 的診斷價值Figure 1 Diagnostic value of gingival sulcus fluid MUC?4，HIF?1α，and MCP?1 for PI

2.5 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 對PI 發(fā)生危險度的影響

以ROC 曲線獲取的截斷值為界分為低水平與高水平。齦溝液MUC?4 低水平患者發(fā)生PI 的危險度是高水平患者的3.044 倍；HIF?1α 高水平患者發(fā)生PI 的危險度是低水平患者的倍2.008 倍；MCP?1高水平患者發(fā)生PI 的危險度是低水平患者的2.400 倍。見表4。

表4 齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 對PI 發(fā)生危險度影響Table 4 Effect of gingival sulcus fluid MUC?4，HIF?1α，and MCP?1 on the risk of PI

3 討論

MUC?4 兼具分泌型蛋白和膜結(jié)合型蛋白的雙重特點，最早在氣管?支氣管黏液中被發(fā)現(xiàn)，參與多種炎癥、免疫、腫瘤性疾病發(fā)病［9］。姜丹丹等［10］研究結(jié)果顯示，與種植體周圍組織健康患者相比，PI 患者齦溝液MUC?4 水平呈顯著下降狀態(tài)。本研究也發(fā)現(xiàn)，觀察組齦溝液MUC?4 低于對照組，且其水平與ISQ 值呈正相關(guān)，可見MUC?4 下調(diào)不僅參與PI 發(fā)生，還會對種植體穩(wěn)定性產(chǎn)生不利影響。分析原因，主要是由于MUC?4 蛋白下調(diào)后會導(dǎo)致寡糖側(cè)鏈形成空間障礙，抑制配體和受體之間的相互作用，對細(xì)胞?細(xì)胞、細(xì)胞?基質(zhì)間的正常作用造成破壞，并與基質(zhì)金屬蛋白酶因子共同參與口腔炎癥發(fā)生過程［11］。本研究結(jié)果還顯示，齦溝液MUC?4 單獨診斷PI 價值良好，可作為臨床診斷PI 的重要輔助指標(biāo)。

HIF?1α 屬于HIF?1 的組成亞基之一，在細(xì)胞低氧應(yīng)激反應(yīng)及調(diào)節(jié)應(yīng)答中具有關(guān)鍵作用，且對多種促炎因子具有促進作用，能夠通過炎癥、氧化應(yīng)激等途徑參與炎癥性、感染性疾病［12］。一項動物實驗證實，牙周炎組織處于低氧或缺氧狀態(tài)，HIF?1α 陽性表達會加重牙周炎癥程度［13］。本研究結(jié)果與上述實驗結(jié)果相符，并發(fā)現(xiàn)其與ISQ 值呈負(fù)相關(guān)。結(jié)合Afacan B 等［14］報道考慮為：在牙周炎癥組織的成纖維細(xì)胞中，HIF?α 會通過應(yīng)激性過表達刺激纖維母細(xì)胞增殖，從而應(yīng)對低氧狀態(tài)；同時，低氧條件下，HIF?1α 可經(jīng)由多條信號通路加速炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)牙周膜細(xì)胞的凋亡和自噬性死亡，且其介導(dǎo)的低氧反應(yīng)是炎癥的重要反饋機制，參與牙周炎過程中的組織破壞。本研究還發(fā)現(xiàn)，齦溝液HIF?1α 在PI 診斷中表現(xiàn)出良好價值，能為臨床早期診斷PI 提供有效依據(jù)。

MCP?1 屬于趨化因子族群，是一種可激活多種骨細(xì)胞并加快細(xì)胞遷移的炎癥細(xì)胞因子，是炎癥反應(yīng)過程中的重要遞質(zhì)。既往相關(guān)研究表明，牙周組織中的巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞均可表達和分泌MCP?1 至牙齦組織及齦溝液中［15］。王仁蘭［16］報道中指出，局部組織內(nèi)MCP?1 水平會隨著牙周炎癥進展而升高。本研究結(jié)果證實，觀察組齦溝液MCP?1 高于對照組，與ISQ 值呈負(fù)相關(guān)，推測原因，MCP?1 可在多種刺激因素下大量合成，還可在腫瘤壞死因子?α、白細(xì)胞介素?1β 等致炎因子的誘導(dǎo)下上調(diào)表達，從而參與牙周炎癥發(fā)生發(fā)展進程［17］。同時，研究顯示，巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞具有調(diào)控破骨細(xì)胞介導(dǎo)骨吸收的作用，MCP?1可在上述多種細(xì)胞刺激下間接參與牙周骨穩(wěn)態(tài)的調(diào)控［18］。且本研究表明，齦溝液MCP?1 水平對PI具有良好診斷價值，能夠提供診斷信息。

此外，本研究創(chuàng)新性發(fā)現(xiàn)，齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 聯(lián)合診斷PI 的AUC 高達0.900，較各指標(biāo)單獨診斷明顯提高，為臨床及早診斷PI 提供更客觀、可檢測的數(shù)據(jù)支持，從而優(yōu)化單純依靠PD 及骨吸收變化的診斷方式。以各指標(biāo)最佳截斷值為界進行分析，齦溝液MUC?4 低水平、HIF?1α、MCP?1 高水平會顯著增加PI 發(fā)生危險度，進一步佐證了齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 在PI 診治中的可能重要檢測價值。本研究不足之處：病人例數(shù)較少，以及未對PI 患者治療前后齦溝液MUC?4、HIF?1α、MCP?1 的動態(tài)變化進行監(jiān)測，需作進一步分析。