TPO、IL?1及MRE11在再生障礙性貧血患兒中的檢測意義

史小鶯 屈明利 張栩靜

再生障礙性貧血（Aplastic anemia，AA）屬于一種嚴重的血液疾病，是由多種原因引起機體造血機能下降的綜合征，在臨床中主要表現為外周血三系下降［1］。AA 臨床表現多樣化且無特異性，使其早期診斷及治療有一定的難度。尋找合適的診斷方法，提高對AA 診斷準確性是改善患兒預后、提高治療效果的關鍵。血小板計數為臨床診斷AA 的“金標準”，但檢查耗時耗力使其臨床價值受限制，尋找更快捷方便且診斷效能更高的診斷方法為目前臨床研究熱點。促血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）可反映骨髓巨核細胞增殖情況，是診斷血小板減少的重要參考指標［2］。白介素?1（Interleukin?1，IL?1）是白介素家族中的一員，具有多種活性，以往多項體內外研究證實IL?1 聯合其他集落刺激因子可對造血細胞產生顯著的影響［3］。減數分裂重組蛋白11（Meiotic recombinant protein 11，MRE11）是蛋白保護復合體中的重要成員，在DNA 損傷時可維持遺傳信息及染色體的穩定性［4］。本研究通過分析TPO、IL?1、MRE11 在AA 患兒中的水平變化情況，了解三者與AA 之間的關系。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年3月至2021年3月西北婦女兒童醫院收治的51 例AA 患兒（AA 組），其中男33 例，女18 例，平均年齡為（6.32±2.41）歲，重型（骨髓造血細胞成分小于25%；血象符合以下任意兩條：中性粒細胞小于0.5×109/L，血小板小于20×109/L，網織紅細胞計數小于20×109/L）19 例，輕型（未達重型條件者為輕型）32 例［5］。納入標準：①均經臨床檢查、骨髓病理檢查確證為AA，符合《再生障礙性貧血診斷與治療中國專家共識》中相關診斷及分型標準［5］；②臨床資料完整。排除標準：①存在其他心、肝、腎嚴重疾病；②在入院前有使用相關治療藥物者；③合并其他免疫類疾病者。另選取本院同期42 名健康體檢志愿者（對照組），身體健康，無感染性或血液性疾病，其中男26 例，女16 例，年齡為（6.35±2.54）歲，兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究經院醫學倫理委員會批準通過，受試者監護人均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 TPO、IL?1、MRE11 檢測

AA 組患兒在入院后次日清晨抽取空腹靜脈血液5 mL，對照組則在體檢當日清晨抽取靜脈血液5 mL，使用3 500 r/min 離心機（半徑10 cm）離心20 min 獲得血清，使用酶聯免疫法檢測TPO、IL?1、MRE11，試劑盒由蘇州卡爾文生物有限公司提供。

1.2.2 血小板及巨核細胞計數

抽取患兒靜脈血液3 mL，使用肝素抗凝管抗凝，通過血細胞自動分析儀（邁瑞XE?500）檢測患兒外周血血小板計數（platelet count，PLT）情況。患兒在入院后均進行骨髓穿刺及涂片檢查，選取厚薄合適的骨髓片在常規瑞氏染色后由檢驗科人員進行巨核細胞計數（Megakaryocyte，MK）及分類。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件進行統計分析，計量資料采用（）表示，行t檢驗；采用Pearson檢驗分析TPO、IL?1、MRE11 與PLT、MK 相關性，繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析TPO、IL?1、MRE11 對AA 預測價值，并計算曲線下面積（AUC），以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TPO、IL?1、MRE11 表達水平比較

AA 組TPO 高于對照組，IL?1、MRE11 低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組TPO、IL?1、MRE11 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum TPO，IL?1 and MRE11 expression levels in different populations（±s）

表1 兩組TPO、IL?1、MRE11 表達水平比較（±s）Table 1 Comparison of serum TPO，IL?1 and MRE11 expression levels in different populations（±s）

組別對照組AA 組t 值P 值n 42 51 TPO（ng/mL）12.21±3.16 97.56±6.54 77.409＜0.001 IL?1（ng/mL）22.64±4.58 4.40±2.49 24.412＜0.001 MRE11（U/L）46.25±6.58 23.66±4.11 20.205＜0.001

2.2 輕、重型AA 患兒TPO、IL?1、MRE11、PLT、MK 表達情況比較

重型組患兒TPO 明顯高于輕型組，IL?1、MRE11、PLT、MK 明顯低于輕型組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 輕、重型AA 患兒TPO、IL?1、MRE11、PLT、MK表達情況比較（±s）Table 2 Comparison of serum TPO，IL?1，MRE11，PLT，MK expression in children with mild and severe AA（±s）

表2 輕、重型AA 患兒TPO、IL?1、MRE11、PLT、MK表達情況比較（±s）Table 2 Comparison of serum TPO，IL?1，MRE11，PLT，MK expression in children with mild and severe AA（±s）

組別輕型組重型組t 值P 值n 32 19 TPO（ng/mL）88.26±5.21 113.24±5.47 16.252＜0.001 IL?1（ng/mL）5.11±1.64 3.21±1.22 4.375 0.001 MRE11（U/L）29.54±4.58 13.77±4.15 12.299＜0.001 PLT（×109/L）38.21±3.62 12.52±3.11 25.774＜0.001 MK（個/片）9.62±2.41 3.21±1.22 10.772＜0.001

2.3 TPO、IL?1、MRE11 與PLT、MK 相關性分析

TPO與PLT、MK（r=-0.761、-0.695，P均＜0.001）為負相關，IL?1、MRE11 與PLT（r=-0.699、0.587，P均＜0.001）、MK（r=0.418，0.398，P=0.038）為正相關。

2.4 TPO、IL?1、MRE11 對AA 的診斷價值

依據ROC 曲線可知，TPO+IL?1+MRE11 聯合檢測對AA 診斷的敏感度和特異度分別為89.40%、71.10%，AUC=0.906（95% CI：0.834～0.978），明顯高于三者單獨診斷（P＜0.05）。見表3 及圖1。

表3 TPO、IL?1、MRE11 對AA 診斷價值Table 3 The diagnostic value of TPO，IL?1，and MRE11 for AA

圖1 TPO、IL?1、MRE11 對AA 診斷價值ROC 曲線圖Figure 1 ROC curve of TPO，IL?1 and MRE11 for AA

3 討論

TPO 主要在肝細胞、腎近曲小管、遠曲小管、骨髓基質細胞中合成。研究認為，TPO 是巨核細胞以及血小板系體液的調控因子，可介導血小板生成，同時可促進巨核細胞增殖、分化［6］。褚保鳳等人［7］研究發現，初診AA 患者TPO 水平明顯增高，是健康對照組水平的10 倍。本研究發現，AA組TPO 水平明顯高于對照組。結合上述研究分析原因，可能是由于AA 患兒骨髓干細胞造血功能衰竭，對TPO 攝取降低，而肝臟、腎近曲小管、骨髓基質過度合成TPO，在綜合效應影響下使TPO 水平顯著增高。本研究進一步發現，隨著患兒病情加重，其TPO 水平也逐漸升高，且與PLT、MK 為負相關，說明隨著AA 患者病情進展，骨髓增生不良，巨核細胞數量、血小板生成減少狀況更明顯，導致血小板表面吸附的TPO 減少，進而引起血液循環中TPO 濃度增加，與以往研究結果相符［8］。

IL?1 是免疫細胞、造血系統中重要的調節因子。研究發現，AA 患兒中單個核細胞的IL?1 生成顯著減少，有部分患兒無法測出IL?1 活性，且IL?1活性與中性粒細胞數之間呈明顯的相關性［9］。國外有學者對17 例AA 患者血液中IL?1 表達情況進行分析，發現半數以上AA 患者外周血單個核細胞和單核細胞所產生IL?1 明顯減少，且與臨床嚴重程度和白細胞減少程度存在明顯相關性［10?11］。本研究中，AA 患兒血液中IL?1 表達水平明顯下降，且隨著病情加重其表達水平越低，提示IL?1 與AA之間存在密切的聯系，與上述研究結果相符。

MRE11 是最早發現的結合于DNA 斷裂處的蛋白質分子之一，如果缺少MRE11 可引起細胞DNA的斷裂修復機制出現異常，其表達增加后DNA 的斷裂修復功能也會隨之增加［12］。以往研究通過脈沖凝膠電泳、免疫熒光法、聚合酶鏈式反應證實了在依托泊苷所致的U937 細胞株進行DNA 損傷修復過程中存在MRE11 的參與［13］。在臨床中發現AA 患兒的染色體中亞二倍體比例明顯高于正常人，而染色體不穩定型導致DNA 損傷增加，MRE11 表達降低后無法及時使DNA 得到修復，進一步影響到造血干細胞的增殖與分化，導致細胞凋亡［14］。本研究發現，AA 組血清中MRE11 表達低于對照組，且隨著病情加重其表達也明顯下調，提示MRE11 可能參與AA 的發病，可能與MRE11 可影響DNA 修復，導致端粒功能不穩定，進而改變端粒長度變化有關。進一步研究發現，TPO 與PLT、MK 為負相關，IL?1、MRE11 與PLT、MK 為正相關，三者聯合診斷AA 敏感度和特異度高于三者單獨診斷，結合以往研究結果，提示TPO、IL?1、MRE11水平變化在一定程度上可反映出AA 病情嚴重程度，為AA 臨床診斷、病情評估提供重要的參考指標［15］。

綜 上所 述，TPO 在AA 中明 顯升 高，IL?1、MRE11 明顯降低，檢測三者表達水平可為AA 臨床診斷、病情評估提供參考依據，探討三者在AA 發病中的確切作用有望為臨床治療AA 提供新方向。