HPLC 法測定鮮棗中維生素C 含量

趙 麗，杜飛云，侯旭杰，3，楊家榮，蒲云峰，3

（1. 塔里木大學食品科學與工程學院，新疆阿拉爾 843300；2.新疆葉河源果業股份有限公司，新疆圖木舒克 843900；3. 南疆特色農產品深加工兵團重點實驗室，新疆阿拉爾 843300）

棗（Ziziphus jujubaMill.） 是鼠李科（Rhamnaceae） 棗屬（Ziziphus） 植物，棗果實中含有豐富的營養物質和功能成分[1]，其中維C 的含量尤為豐富，素有“維C 之王”的美譽[2]，因此常將維C 含量作為評價棗果品質的重要指標。目前，棗果中維C常用的測定方法有高效液相色譜法、2,6 -二氯靛酚法、紫外分光光度法、碘量法、鉬藍比色法等[3-5]，其中高效液相色譜法具有分離效果好、靈敏度高、準確度高等特點，被廣泛用于蔬菜水果中維C 測定。以甲酸水為流動相，采用Spuirsil C18親水柱分離，建立棗果中維C 的HPLC 分析方法，并于2,6 -二氯靛酚法和碘量法測定結果比較，明確棗果中維C分析方法之間的差異，為棗果維C 的準確測定提供技術支持和參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

棗樣采摘于塔里木大學棗種質資源圃。

維C 標準品，阿拉丁試劑（上海） 有限公司提供；碘酸鉀、碘化鉀、草酸、可溶性淀粉、2,6 - 二氯酚靛酚等，均為分析純試劑。

TGL-20M 型臺式高速冷凍離心機，湖南湘儀離心機儀器有限公司產品； LC-20A 液相色譜、PDA檢測器，日本島津公司產品。

1.2 試驗方法

1.2.1 HPLC 法

稱取一定量樣品，用2%草酸室溫超聲提取30 min，再以轉速3 000 r/min 離心15 min，取上清液過0.22 μm濾膜，4 ℃下放置備用。

色譜柱：Spuirsil C18（250 mm×4.6 mm，i.d.）柱（天津迪馬公司產品），流動相為0.5%甲酸，流速0.6 mL/min，進樣量10 μL，柱溫30 ℃，檢測波長243 nm。

1.2.2 2,6 - 二氯靛酚法

參照GB 5009. 86—2016 食品中抗壞血酸的測定第三法2,6 - 二氯靛酚滴定法測定。

1.2.3 碘量法

參照徐朝陽[6]的方法測定。

1.3 數據處理

每個處理重復3 次，結果以X±SD 表示，采用SPSS 20.0 進行方差分析，并進行Duncan's 多重比較（p＜0.05）。

2 結果與分析

2.1 維C 含量的HPLC 色譜圖

目前，HPLC 法測定維C 含量的流動相多為磷酸緩沖鹽溶液和甲醇組成，采用Spuirsil C18親水柱分離，流動相僅選用0.5%的甲酸水溶液，流動相配制簡單，且不含甲醇等有機相。

維C 標準品和棗樣的HPLC 色譜圖見圖1。

圖1 維C 標準品和棗樣的HPLC 色譜圖

從圖1 可看出，標準品和樣品色譜峰基線平穩、分離度高，說明該色譜條件適合棗果中維C 含量的測定。

2.2 維C 的HPLC 分析方法的建立

維C 測定方法的參數見表1。

表1 維C 測定方法的參數

從表1 可以看出，在3.125~100.000 μg/mL 內，維C 標準曲線為Y=0.498 4X+0.680 1，回歸系數為R2=0.999 0。該方法的回收率在91.54%~97.59%內，重現性的RSD 為0.98%（n=6），室溫下放置55 h 穩定性的RSD 為2.53% （n=12），4 ℃下放置55 h 穩定性的RSD 為0.58%（n=12)。檢測限（LOD） 和定量限（QOD） 按照Araujo P[7]的方法計算，即檢測限（LOD） 為3×SD/m和定量限（LOQ） 為10×SD/m，其中SD為標準曲線的截距，m為標準曲線斜率。該方法的檢測限（LOD） 和定量限（QOD） 分別為4.01和13.64 μg/mL。這說明建立的方法適合棗果中維C含量的測定。此外，從穩定性結果來看，樣品處理好后，在4 ℃下放置比室溫放置的RSD 更小，說明樣品處理好后在4 ℃下放置結果更穩定。

2.3 棗果維C 含量測定方法的比較

3 種維C 含量測定方法的比較見表2。

表2 3 種維C 含量測定方法的比較 / mg·g-1

從表2 可以看出，8 個品種鮮棗的維C 含量均較高，說明鮮棗可以作為補充維C 的食物來源。從分析方法來看，采用HPLC 法測定的結果顯著低于2,6-二氯靛酚法和碘量法（p＜0.05），這可能是由于2,6 -二氯靛酚法和碘量法專一性不如HPLC 法，一些非維C 物質干擾測定結果，導致2,6 - 二氯靛酚法和碘量法的結果偏高。因此，棗果中維C 含量測定時建議采用HPLC 法。

3 結論

采用Spuirsil C18親水柱，建立了棗果中維C 含量測定的HPLC 方法，該方法具有流動相配制簡單、分析時間短、準確度高、回收率高等特點。通過對8 個品種鮮棗的分析，發現鮮棗中維C 含量豐富，說明鮮棗是維C 優質的食物來源；3 種分析方法的比較，發現2,6- 二氯靛酚法和碘量法測定結果顯著高于HPLC 法。因此，在棗果維C 含量測定時，HPLC 法測定結果更能準確地反映棗果維C 含量的真實水平。