小麥赤霉病菌對(duì)4種不同類型殺菌劑的敏感性測(cè)定

王秋嶺，袁謙，曹永周，范志業(yè)，陳莉，劉迪，劉立峰，王文豪，李雷雷，陳琦，侯艷紅，杜夢(mèng)圓，李世民*

(1.漯河市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南 漯河 462000；2.許昌市植保植檢站，河南 許昌 461000)

小麥赤霉病是由多種鐮刀菌(Fusarium)引起的小麥穗部病害，在造成產(chǎn)量損失的同時(shí)產(chǎn)生毒素，嚴(yán)重影響小麥品質(zhì)和威脅食品安全[1-3]。21世紀(jì)以來(lái)，小麥赤霉病在河南省流行頻率提高，造成的損失增大，成為了河南省小麥主要病害之一，部分地區(qū)減產(chǎn)達(dá)到50%以上，一部分地塊甚至出現(xiàn)絕收的情況。其中2012年和2016年在河南省大面積發(fā)生，發(fā)病面積分別達(dá)到339.69萬(wàn) hm2和173.98萬(wàn) hm2，2018年在河南省發(fā)病面積接近150萬(wàn) hm2[4-5]，對(duì)河南省糧食安全造成嚴(yán)重影響。目前，適合黃淮麥區(qū)種植的抗赤霉病小麥品種還比較匱乏[6-7]，藥劑防治仍然是最有效的防治方法之一。多菌靈及其復(fù)配藥劑是最常用的防治藥劑[7-10]，但是長(zhǎng)期使用單一藥劑，會(huì)造成病原菌抗藥性頻率上升，防治效果降低[11]。

為明確漯河市小麥赤霉病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性，指導(dǎo)生產(chǎn)用藥，本研究采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定4種不同類型殺菌劑對(duì)漯河市8個(gè)地點(diǎn)小麥赤霉病菌的毒力，以期根據(jù)各個(gè)地點(diǎn)菌株抗藥性的不同，選擇合適的殺菌劑進(jìn)行化學(xué)防治，延緩抗藥性的產(chǎn)生。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株來(lái)源

供試小麥赤霉病菌株由漯河市農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所提供，病穗于2018年和2019年采集自漯河市范圍內(nèi)8個(gè)地點(diǎn)(圖1)，經(jīng)組織分離和單孢純化后獲得菌株，后經(jīng)河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所鑒定，8株赤霉病菌均為禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)。選取菌株轉(zhuǎn)接至馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基斜面上，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 不同禾谷鐮刀菌采集地點(diǎn)

1.1.2 供試藥劑

50%多菌靈可濕性粉劑(WP)(四川潤(rùn)爾科技有限公司)；25%氰烯菌酯懸浮劑(SC)(江蘇省農(nóng)藥研究所股份有限公司)；430 g·L-1戊唑醇懸浮劑(SC)(拜耳作物科學(xué)(中國(guó))有限公司)；45%咪鮮胺水乳劑(EW)(蘇州富美實(shí)植物保護(hù)劑有限公司)。

1.1.3 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200 g，切成小塊后放入蒸餾水中煮沸20～30 min，紗布過(guò)濾后加入葡萄糖18 g，瓊脂粉17 g，加蒸餾水定容至1 000 mL，分裝在不同三角瓶中，每個(gè)三角瓶裝入100 mL培養(yǎng)基，滅菌后備用。

1.2 方法

1.2.1 藥劑配制

先將50%多菌靈WP、25%氰烯菌酯SC、43%戊唑醇SC和45%咪鮮胺EW用無(wú)菌水分別配制成一定濃度的母液備用。加熱融化提前分裝在三角瓶中的100 mL PDA培養(yǎng)基，冷卻至50～60 ℃時(shí)，用移液槍移取1 mL藥劑母液加入三角瓶中，迅速搖勻，每100 mL培養(yǎng)基倒入6個(gè)直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，制成含有藥劑的PDA培養(yǎng)基。以加入1 mL無(wú)菌水的無(wú)藥劑PDA平板做空白對(duì)照，各藥劑處理濃度見(jiàn)表1。

表1 供試藥劑及其有效成分濃度

1.2.2 病菌活化及培養(yǎng)

挑取保存于4 ℃冰箱中的菌株，分別接種于PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行活化，置于26 ℃、黑暗條件的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 d，然后重復(fù)轉(zhuǎn)接一次，備用。

1.2.3 毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[12]測(cè)定不同殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。將菌株在PDA培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)3 d，用打孔器(8 mm)在菌落邊緣打取菌碟，分別接種到制備好的含不同濃度藥劑的PDA平板(直徑為9 cm)上，每個(gè)殺菌劑的每個(gè)濃度為一個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)3次。接菌后將平板置于26 ℃、黑暗培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 d，采用“十”字交叉法測(cè)量各處理的菌落直徑，計(jì)算殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel 2007軟件進(jìn)行整理，采用DPS 7.05軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和差異顯著性檢驗(yàn)(Duncan’s新復(fù)極差法，P<0.05)。將質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)濃度，抑制率轉(zhuǎn)換成概率值，通過(guò)殺菌劑濃度的對(duì)數(shù)值和抑菌率的概率值進(jìn)行線性回歸分析，求出藥劑毒力回歸方程以及半數(shù)效應(yīng)濃度(EC50)和相關(guān)系數(shù)(r)。

2 結(jié)果與分析

2.1 多菌靈對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

多菌靈對(duì)8個(gè)菌株均有較強(qiáng)的抑制作用(表2)，其中多菌靈對(duì)LH06-1和LH03-5抑制作用最強(qiáng)，EC50分別為0.412 8 mg·L-1和0.416 0 mg·L-1；其次依照EC50由小到大分別為L(zhǎng)H08-7、LH05-3、LH11-1、LH09-4；對(duì)LH10-1和LH07-5抑制作用最弱，EC50分別為0.631 7 mg·L-1和0.745 9 mg·L-1。

表2 多菌靈對(duì)小麥赤霉病菌的毒力

2.2 氰烯菌酯對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

氰烯菌酯對(duì)8個(gè)菌株的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，對(duì)LH08-7有很強(qiáng)的抑制作用，EC50為0.078 8 mg·L-1，抑制效果顯著好于其他菌株；對(duì)LH03-5抑制作用最弱，EC50為0.260 0 mg·L-1，抑制效果顯著差于其他菌株；對(duì)其他菌株抑制作用依照EC50由小到大依次為L(zhǎng)H06-1、LH09-4、LH10-1、LH07-5、LH11-1、LH05-3。

表3 氰烯菌酯對(duì)小麥赤霉病菌的毒力

2.3 戊唑醇對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

戊唑醇對(duì)8個(gè)菌株的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，對(duì)LH05-3抑制作用最弱，EC50為1.242 4 mg·L-1，抑制效果顯著差于其他菌株；戊唑醇對(duì)LH03-5抑制作用較弱，EC50為0.580 8 mg·L-1；戊唑醇對(duì)其他菌株抑制作用差異不顯著，依照EC50由小到大依次為L(zhǎng)H08-7、FLH07-5、LH06-1、LH09-4、LH10-1、LH11-1。

表4 戊唑醇對(duì)小麥赤霉病菌的毒力

2.4 咪鮮胺對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

咪鮮胺對(duì)8個(gè)菌株的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，對(duì)LH05-3抑制作用最弱，EC50為0.217 7 mg·L-1，抑制作用顯著差于其他菌株；咪鮮胺對(duì)其他菌株抑制作用依照EC50由小到大依次為L(zhǎng)H08-7、LH03-5、LH07-5、LH09-4、LH10-1、LH11-1、LH06-1。

表5 咪鮮胺對(duì)小麥赤霉病菌的毒力

2.5 小麥赤霉病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性

4種殺菌劑對(duì)8個(gè)小麥赤霉病菌株菌絲生長(zhǎng)均有較好的抑制效果(圖2)，抑制效果依次為咪鮮胺>氰烯菌酯>戊唑醇>多菌靈，EC50分別為0.051 2 mg·L-1、0.163 2 mg·L-1、0.324 1 mg·L-1、0.469 3 mg·L-1。

圖2 4種殺菌劑對(duì)8個(gè)菌株抑制中濃度的比較

8個(gè)菌株對(duì)4種殺菌劑敏感性差異較明顯，可通過(guò)交替施用敏感性高于均值的殺菌劑進(jìn)行小麥赤霉病的田間防治，以減緩小麥赤霉病菌抗藥性的產(chǎn)生。LH05-3菌株對(duì)多菌靈、氰烯菌酯、戊唑醇和咪鮮胺等4種殺菌劑的敏感性均低于均值，EC50分別為0.519 0 mg·L-1、0.197 4 mg·L-1、1.242 4 mg·L-1、0.217 7 mg·L-1；LH06-1、LH08-7、LH09-4菌株對(duì)4種殺菌劑的敏感性均高于均值；LH03-5菌株對(duì)多菌靈和咪鮮胺的敏感性高于均值，分別為0.416 0 mg·L-1、0.018 6 mg·L-1；LH07-5和LH11-1兩個(gè)菌株對(duì)戊唑醇和咪鮮胺的敏感性高于均值，分別為0.082 8 mg·L-1和0.021 5 mg·L-1、0.202 5 mg·L-1和0.039 2 mg·L-1；LH10-1菌株對(duì)氰烯菌酯、戊唑醇和咪鮮胺的敏感性高于均值，分別為0.154 6 mg·L-1、0.160 1 mg·L-1和0.030 0 mg·L-1。

3 小結(jié)與討論

4種殺菌劑對(duì)漯河市分離到的禾谷鐮刀菌的毒力測(cè)定結(jié)果表明：4種殺菌劑均有較好的抑制效果。其中苯并咪唑類殺菌劑多菌靈EC50普遍較高，說(shuō)明在漯河市使用多菌靈防治小麥赤霉病的用藥頻率顯著高于其他殺菌劑，但仍具有較好的效果，與范志業(yè)等[13]報(bào)道的結(jié)果一致。三唑類殺菌劑戊唑醇對(duì)個(gè)別菌株表現(xiàn)出較高的EC50，說(shuō)明在漯河市近年來(lái)個(gè)別地方戊唑醇防治小麥赤霉病的用藥頻率在增高；氰基丙烯酸酯類殺菌劑氰烯菌酯和咪唑類殺菌劑咪鮮胺EC50普遍較低，表現(xiàn)較強(qiáng)的敏感性。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，建議漯河市在防治小麥赤霉病時(shí)，應(yīng)當(dāng)減少苯并咪唑類殺菌劑的用藥頻率，采用三唑類、氰基丙烯酸酯類和咪唑類殺菌劑交替用藥的方式防治小麥赤霉病，減緩抗藥性的產(chǎn)生。

漯河市地處黃淮南片麥區(qū)，近年來(lái)小麥赤霉病大發(fā)生的頻率和嚴(yán)重程度都在提高，目前適合黃淮麥區(qū)的抗赤霉病小麥品種還比較匱乏，噴施化學(xué)藥劑仍是最有效的防治措施，本研究為防治小麥赤霉病提供了用藥指導(dǎo)。根據(jù)同一藥劑對(duì)不同地方菌株的敏感性不同，指導(dǎo)不同地方的用藥頻率，既減緩了抗藥性的產(chǎn)生，又提高了用藥效果，節(jié)省了生產(chǎn)成本，這對(duì)于種植大戶增多和土地流轉(zhuǎn)靈活的大環(huán)境下，精準(zhǔn)防控小麥赤霉病具有很強(qiáng)的指導(dǎo)意義。