飼料中添加玉米淀粉對稻田養殖黃沙鱉生長性能的影響

何金釗，馮鵬霏，覃定彪，周大顏，李華，陳子桂*，馬華威

（1.廣西壯族自治區水產引育種中心，廣西壯族自治區 南寧 530031；2．廣西壯族自治區水產科學研究院，水產遺傳育種與健康養殖重點實驗室，廣西壯族自治區 南寧 530021）

糖類是生物有機體的主要能量和營養來源，是動物飼料開發和研究的主要基礎配料。適宜的糖類添加量不僅能有效促進生物生長發育和增強免疫，還可減少蛋白浪費和飼養成本，提高養殖效益。水生動物與陸生動物在生存環境和構造機制方面存在較大差異，其對糖類的利用力較低，如肉食性水生動物的糖類利用能力比草食性和雜食性要低。此外，多糖的來源、分子質量和結構差異也影響了水生動物對糖的利用程度。因此，探究水產養殖品種對多糖類的營養需求，是開發專用飼料的基礎工作。

黃沙鱉（）是中華鱉的地方種，分布于廣西、廣東的西江流域地區，是西江水系特有的鱉種，具有食譜廣、環境適應能力強、肉質營養豐富、口感鮮嫩等特點，是我國重要的淡水鱉類經濟養殖品種之一。目前，有關養殖龜鱉對脂肪類、蛋白類、微量元素、維生素的營養需求方面的研究較多，關于龜鱉對糖類營養需求方面也有報道。例如投喂含0.4%低聚糖的飼料能提高黃沙鱉的生長性能，改善其腸道微生物菌群和代謝狀況，并提高其免疫性能；飼料中添加1 g/kg的β-葡聚糖，能大大提高中華鱉的存活率，改善其肉質和口感。目前，關于其他多糖源對中華鱉生長和代謝影響方面的研究報道較少。

研究黃沙鱉對不同糖類的需求量和利用能力，有利于提升稻田養殖黃沙鱉的生長性能，提高養殖的綜合效益。2020年5月1日—8月7日，針對黃沙鱉的營養需求，在其飼料中添加小麥淀粉、玉米淀粉、α-淀粉，分析黃沙鱉的生長性能、生理生化指標的變化，篩選出適合于黃沙鱉稻田養殖的糖源，為研究專配飼料提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 樣品

黃沙鱉由廣西維軍生態農業有限公司提供。放養前將幼體放至養殖箱（2.05 m×1.5 m×1.2 m）中喂養14 d，以適應試驗環境。前7 d投喂魚肉，后7 d投喂鱉專配飼料。14 d適應期結束后，將健康個體[平均濕體質量（91.87±8.67）g/只]投放到廣西柳州市三江縣廣西維軍生態農業有限公司稻田基地，開展養殖試驗。

1.2 試驗設計

試驗分為3組，分別為玉米淀粉組、α-淀粉組、小麥淀粉組，每組做3個重復，每個重復試驗用鱉8只。稻田養鱉試驗時間為98 d，于每天18：00投喂飼料1次，投喂量不超過平均體質量的5%。投喂1 h后記錄鱉的投喂量、死亡數量。試驗水溫（24.0±2.0）℃，pH值（7.3±0.2），ρ（溶解氧）≥5 mg/L，ρ（氨氮）<0.05 mg/L。

1.3 試劑與儀器

測定黃沙鱉血清的T-CHO、TG、肝糖原和肌糖原的血清總膽固醇（T-CHO）試劑盒、甘油三酯（TG）試劑盒、肝糖原試劑盒、肌糖原試劑盒、葡萄糖試劑盒，來源于上海生工生物工程有限公司；測定黃沙鱉腸道的胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的胃蛋白酶活性測定試劑盒、脂肪酶活性測定試劑盒、淀粉酶活性測定試劑盒，來源于上海酶聯生物公司；磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性測定試劑盒，來源于廣州賽思博科技有限公司；測定黃沙鱉肌肉糖酵解水平的己糖激酶（HK）活性測定試劑盒、丙酮酸激酶（PK）活性測定試劑盒、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）活性測定試劑盒，來源于武漢華美生物公司。

采用SDACM-4000氧彈式熱量儀檢測飼料能量（上海生工股份有限公司）；Sysmex Chemix-800全自動生化分析儀測定黃沙鱉肌肉的常規營養成分（上海生工股份有限公司）。

1.4 黃沙鱉營養配制

自制黃沙鱉的飼料基礎營養成分質量分數分別為：40%魚粉、19%酪蛋白、8%菜籽油、0.75%微晶纖維素、0.25%氯化膽堿、4%羧甲基纖維素鈉、1%維生素預混料（100 mg/kg V，40 mg/kg V，5 000 mg/kg V，2 000 mg/kg V，50 mg/kg V，200 mg/kg V，50 mg/kg V，0.5 mg/kg V，325 mg/kg V，175 mg/kg煙酸；5 mg/kg葉酸；1 000 mg/kg肌醇，2.5 mg/kg生物素，50 mg/kg泛酸鈣）、5%礦物質預混料（5 000 mg/kg NaCl，15 000 mg/kg Ca（HPO），1 000 mg/kg FeSO·7HO，350 mg/kg ZnSO·7HO，40 mg/kg MnSO·4HO，12 mg/kg CuSO·5HO，80 mg/kg CoCl·6HO，5 mg/kg KIO），以等氮等能形式分別向基礎營養成分添加24%玉米淀粉、α-淀粉、小麥淀粉3種不同多糖，將3組配制的混合飼料分別粉碎、混勻，隨后過孔徑0.25 mm的篩。混合飼料用電子天平精準稱量，用絞肉機制成直徑2 mm短條狀料，風干，水分保持低于9%。條狀飼料破碎機破碎為直徑2 mm的顆粒飼料。各試驗糖源組營養水平見表1。

表1 各試驗糖源組營養水平（干物質）

1.5 生長指標測定

于開始投喂（0周）和試驗結束（14周）分別取樣，測定黃沙鱉生長指標，計算質量增加率（WGR）、成活率（SR）、特定生長率（SGR）、蛋白質效率（PER）、飼料效率（FE）、臟體指數（VIS）、肝體指數（HIS）、肥滿度（）。

式 中：——末 體 質 量，g；——初 體 質 量，g；——試驗初鱉個數；——試驗末鱉個數；——試驗時間，d；——攝入蛋白質干質量，g；——總攝入飼料干質量，g；——內臟質量，g；——肝質量，g；——體質量，g；——體積，cm；——肥滿度，g/cm。

1.6 常規營養成分測定

粗蛋白質、水分、粗脂肪、灰分的含量及飼料能量，按照美國分析化學家協會（AOAC）標準測定。

1.7 血清指標測定

按照試劑盒操作步驟，測定血清的肝糖原、肌糖含量，TG和T-CHO的含量按照AOAC方法測定。

1.8 消化酶活測定

胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性嚴格按照試劑盒操作步驟執行。

1.9 糖代謝關鍵酶測定

按照試劑盒操作步驟測定HK、PK、PEPCK、PEPC的活性。

1.10 統計分析

采用軟件Origin 10.0對數據進行統計分析，結果以（平均值±標準誤）表示。利用Duncan多重比對方法檢測組間數據的差異性，>0.05表示差異不顯著，<0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 生長性能分析

不同糖源對稻田養殖鱉的生長性能影響見表2。由表2可見，SR和在3組間差異不顯著（>0.05），WGR、SGR、PER和FE在玉米淀粉組最高。HIS和VIS差異顯著（<0.05），在α-淀粉組最高（<0.05），在小麥淀粉組最低（<0.05）。

表2 不同糖源對稻田養殖鱉的生長性能影響①

2.2 營養組成成分分析

不同糖源對肌肉和肝成分的影響見表3。由表3可見，水分和灰分的含量在3組的肌肉與肝中差異不顯著（>0.05），粗蛋白含量在小麥淀粉組和玉米淀粉組的肌肉和肝中比α-淀粉組高（<0.05），小麥淀粉組和玉米淀粉組之間差異不顯著（>0.05）。粗脂肪含量在α-淀粉組和玉米淀粉組的肌肉和肝比小麥淀粉組低（<0.05），在α-淀粉組和玉米淀粉組差異不顯著（>0.05）。3個不同多糖組中，肌肉的肝糖原和肌糖原含量差異顯著（<0.05），肝糖原和肌糖原的含量在α-淀粉組最高，小麥淀粉組最低，α-淀粉組的肌肝糖原含量比玉米淀粉組和小麥淀粉組分別高1.37倍和4.04倍，α-淀粉組的肝糖原含量比玉米淀粉組和小麥淀粉組分別高1.92倍和2.73倍。

表3 不同糖源對肌肉和肝成分的影響①

2.3 血清指標分析

不同糖源對鱉血清生化指標的影響見表4。由表4可見，小麥淀粉組的血清葡萄糖、TG、T-CHO的含量最低，α-淀粉組顯著最高（<0.05）。

表4 不同糖源對鱉血清生化指標的影響① mmol/L

2.4 消化酶分析

不同糖源對鱉胃和腸道消化酶活性的影響見表5。由表5可見，3種糖源組中，胃和腸道的消化酶活性呈現顯著性差異（<0.05），胃蛋白酶活性在小麥淀粉組最高，玉米淀粉組最低。腸脂肪酶活性在玉米淀粉組和α-淀粉組差異不顯著（>0.05），但兩者均顯著高于小麥淀粉組（<0.05）。小麥淀粉組的腸淀粉酶活性顯著低于α-淀粉組和玉米淀粉組（<0.05），但在α-淀粉組和玉米淀粉組差異不顯著（>0.05）。

表5 不同糖源對鱉胃和腸道消化酶活性的影響①U/mg

2.5 肝糖代謝關鍵酶活性分析

不同糖源對羅氏沼蝦糖代謝關鍵酶活性的影響見表6。由表6可見，HK和PEPCK的活性在小麥淀粉組最低（<0.05），而在玉米淀粉組和α-淀粉組差異不顯著（>0.05）。PK和PEPC的活性在3種不同多糖組中差異不顯著（>0.05），但在α-淀粉組最高。

表6 不同糖源對羅氏沼蝦糖代謝關鍵酶活性的影響①U/mg

3 討論

動物攝食大分子糖后不能被直接吸收，需經一系列水解或磷酸解等化學反應降解為葡萄糖，才能被機體的消化器官吸收利用。本研究結果揭示了玉米淀粉能改善稻田鱉的生長性能和免疫特性，原因可能是玉米淀粉分子質量小于α-淀粉和小麥淀粉，容易被鱉的消化器官分解和迅速吸收利用，因此，認為玉米淀粉可作為鱉飼料的主要多糖源添加物，合適的添加量和比例能改善鱉的生長和免疫功能。本研究結果與其他鱉類如越南鱉、泰國鱉、云南鱉、緬甸鱉的研究結果一致，但不同鱉類對玉米淀粉的吸收利用效率略有不同，可能是受到不同的品種、生存環境及試驗操作影響所致。

動物機體的肝糖原含量與其攝食飼料的糖水平、多糖種類與分子質量有關，飼料的糖含量高和其被動物機體吸收利用率高是引起機體肝體比增大的主要原因之一。本研究結果顯示，玉米淀粉組的肝體比和肝糖原的含量最高（<0.05），3種多糖的總能和添加量無顯著差異，可能是玉米淀粉分子質量小于α-淀粉和小麥淀粉的原因。多糖是水產養殖品種的主要營養與能量來源，不同糖類被不同品種及亞種的利用率有差異。本研究中，3個組的肌肉粗蛋白和粗脂肪的含量存在差異，小麥淀粉組的粗蛋白和粗脂肪的含量均最高，可能是由于機體對小麥淀粉的選擇性吸收利用能力強。機體肌糖原、肝糖原和血糖含量偏高，可促使糖酵解生成的磷酸二羥丙酮還原為3-磷酸甘油，它和丙酮酸徹底脫氫氧化生成的乙酰輔酶A都是脂肪合成的重要部分。本研究未發現α-淀粉組、小麥淀粉組代謝酶活性顯著提高，鱉攝食小麥淀粉后粗脂肪過高的原因有待于深入研究。

此外，本研究也發現α-淀粉組的肝糖原和肌糖原的含量最低，而小麥淀粉組最高，表明小麥淀粉雖然能導致鱉肉積累脂肪和蛋白質積累，但對免疫指標不利，不能作為稻田鱉優先選取的糖源。本研究結果顯示，α-淀粉組的肝粗蛋白含量過低，可能是α-淀粉分解了過量的葡萄糖，消化道內壁大量吸收位點被占據，導致鱉類氨基酸吸收受阻，引起蛋白質沉積降低。綜上所述，玉米淀粉能改善稻田鱉的生長免疫功能，比小麥淀粉和α-淀粉的綜合效果較好，可以作為稻田鱉飼料的主要添加物。

品種、飼料營養水平、環境變化影響了水產養殖品種消化酶活性的分泌調節。本研究結果顯示，鱉的3種消化酶活性（胃蛋白酶、腸脂肪酶、腸淀粉酶）受3種多糖影響不同。胃蛋白酶活性以小麥淀粉組最高，與鱉肌肉粗蛋白含量高相對應；腸脂肪酶活性以α-淀粉組最高；腸淀粉酶活性以玉米淀粉組最高。α-淀粉組和玉米淀粉組的粗脂肪含量均低于小麥淀粉組，可能是鱉攝食含有小麥淀粉的飼料后，小麥淀粉不能充分吸收利用，體內糖含量過高，過多的糖源在三羧酸循環中更多地走向脂類合成，也進一步佐證了上述小麥淀粉對鱉的免疫指標產生不利影響，不能作為稻田鱉優先選取的糖源。

糖酵解的2種關鍵酶是PK和HK，水生動物的肝HK活性要比陸生機體低，制約了水生動物的體內葡萄糖代謝功能。HK專一性差，米氏常數（Km）值低，易飽和而失去活力，飼料組成的改變對其活性幾乎無影響。本研究結果顯示，HK活性在玉米淀粉組和α-淀粉組較高，表明飼料糖源變化導致了HK活性變化，與上述觀點矛盾，需要進一步研究證實。種類不同其HK活性也有差異，含有碳水化合物的不同飼料對鱉的肝HK有顯著影響，如泰國鱉、中華鱉。水產養殖品種的PK活性受環境變化、營養水平高低等影響，該研究結果發現，PK活性在3種糖源間的差異不顯著，可能由于PK與這3種多糖利用程度的關聯性不大。糖異生的關鍵酶是PEPCK。該研究發現，α-淀粉組的機體糖水平較高，并且其PEPCK活性高于小麥淀粉組，而低于玉米淀粉組，推測可能由于鱉機體的糖水平高誘導了負反饋調節所致。PEPC參與三羧酸循環（TAC）回補反應，是催化糖異生的一種限速酶。本研究中，小麥淀粉組的肌肉粗脂肪含量較高，可能是糖類在TAC過程中被轉化為脂類，導致脂肪積累。但是，稻田鱉的PEPC活性在3組間差異不顯著，原因需要進一步探究。

4 結論

該研究發現，玉米淀粉組能顯著提高鱉生長性能，增加蛋白質營養成分，改善免疫指標，提高消化酶和糖代謝的活性。綜合來講，玉米淀粉組的鱉生長性能、消化功能、糖代謝等指標最佳，說明玉米淀粉能顯著促進鱉健康生長，可作為飼料添加糖源。未來，玉米淀粉將與其他營養物質相結合深入研究營養鱉的飼料配方，提供精準營養策略。