痛風性關節炎患者IL-22 基因位點rs2227473多態性與遺傳易感性的關系研究

葉路敏，陳云，應婉倩，李池慧

痛風是由于人體嘌呤代謝障礙，導致尿酸水平長期過高，從而導致細胞外液中尿酸鈉結晶積累引起的晶體沉積性疾病，屬于關節炎的一種，并由最初的周圍關節滑膜炎的嚴重疼痛，最后發展為關節損傷和畸形[1]。其中尿酸鈉晶體是引起急性痛風性關節炎發作的主要因素，痛風是由于高尿酸血癥引起，但高尿酸血癥與痛風是兩種不同疾病[2]。近年來，由于不良的生活習慣，如暴飲暴食、缺乏鍛煉等，高尿酸血癥和痛風的發病率急劇上升。長期痛風會持續影響患者的日常生活，除間歇性發作和關節損傷外，高尿酸水平可能引起腎損傷、腎結石及尿毒癥等，嚴重影響患者的身體健康及工作生活[3-5]。據文獻報道，白介素22（IL-22）在炎癥以及組織修復和傷口愈合中發揮作用，且有研究發現IL-22 參與類風濕關節炎的發病過程，可誘導滑膜持續增生并發展為慢性炎癥，因此推測IL-22 在痛風性關節炎的發生發展中發揮作用[6]。本研究就IL-22 基因多態性與痛風性關節炎的相關性進行探討，同時分析IL-22 基因多態性在痛風性關節炎患者疾病發生與發展中的作用及其遺傳易感性，旨在為預防或阻斷痛風性關節炎的發生發展提供參考?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年9 月至2021 年9 月在浙江省金華市人民醫院風濕免疫科就診的87 例痛風性關節炎患者為觀察組，另選取同期50 例健康體檢者為對照組，收集全部研究對象的基本信息。觀察組男59 例，女28 例；年齡19 ～75 歲，平均（54.4±17.3）歲；病程為1 ～19 d，平均（8.37±5.46）d。對照組男36 例，女14 例；年齡20 ～75 歲，平均（56.4±15.7）歲。兩組性別、年齡差異均無統計學意義（均P ＞0.05）。本研究經醫院倫理委員會審批通過。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）符合痛風性關節炎診斷標準，處于急性發病期；（2）免疫功能正常，無自身免疫病；（3）無智力障礙或者精神障礙。排除標準：（1）嚴重臟器功能障礙，并發其他惡性腫瘤疾??；（2）并發其他風濕系統疾??；（3）并發其他引起血尿酸升高的疾病，如溶血性貧血、糖尿病酮癥酸中毒、乳酸酸中毒及甲狀旁腺功能亢進等；（4）妊娠期或哺乳期。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 所有研究對象均在入院時抽取10 ml 靜脈血置于抗凝管內，其中5 ml 用于提取全血DNA，另5 ml靜脈血于3500 r/min低溫離心8 min，分離血清，-80 ℃保存備用。

1.3.2 血清IL-22 水平檢測 采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定血清IL-22 因子水平。取備用血清，采用酶標儀（ELX800，伯騰儀器公司）嚴格按照試劑盒說明書操作（IL-22 檢測試劑盒購自英國Abcam 公司）。

1.3.3 基因多態性檢測 SNP 位點選擇：利用NCBI-dbSNP數據庫和HaPMa-P數據庫，在人類基因庫中對12 號染色體q15 區域的IL-22 基因上的單核苷酸多態性位點進行檢索并下載數據包；結合HaPloview 4.2 分析軟件對數據包進行IL-22 基因的tag SNPs 篩選，并根據既往文獻研究，選取rs2227473 位點進行研究分析。

基因組DNA 提取：使用DNA 提取試劑盒（購自上海生工生物工程有限公司）提取外周血中的DNA，通過實時熒光定量聚合酶鏈式反應（RT-PCR）擴增DNA樣本，通過電泳與凝膠成像儀檢測目標基因分型。

引物設計：使用PrimerPremier5 自主設計引物序列，并由上海生工生物工程有限公司合成，rs2227473 基因位點上游引物序列為5’-ACGTTGGATGACACTCAATTTAGCCATTCC-3'，下游序列為 5’-ACGTTGGATGATCCATCCATCTGTGGATAC-3’；GAPDH 基因上游引物序列為5’-TGCAC-CACCAACTGCTTAGC-3’，下 游 序 列 為 5’-GGCATG-GACTGTGGTCATGAG-3’。

1.4 統計方法 采用 GraphpadPrism 7.0 軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t 檢驗；計數資料采用2檢驗；使用SHEsis進行遺傳平衡分析，分析SNP 位點基因型及等位基因頻率分布是否滿足哈迪-溫伯格平衡（HWE）。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清IL-22 水平比較 觀察組血清IL-22 水平為（8.13±1.23）ng/L，對照組為（5.41±2.57）ng/L，對照組IL-22 水平低于觀察組，差異有統計學意義（t=2.557，P ＜0.05）。

2.2 SNP 位點基因型分布遺傳平衡情況 兩組IL-22 基因位點rs2227473 實際基因型分布與Hardy-Weinberg 平衡狀態下的理論分布差異無統計學意義（2=1.018，P ＞0.05），符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律，抽取人群符合隨機性原則，具有群體代表性。

2.3 兩組IL-22 基因位點rs2227473 基因型及等位基因頻率比較 兩組rs2227473 基因位點TT 基因型分布與T、C等位基因頻率差異均有統計學意義（均P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組IL-22 基因位點rs2227473 基因型及等位基因頻率比較 例（%）

2.4 不同性別rs2227473 基因多態性的基因型分布情況 兩組不同性別rs2227473 基因多態性分布差異均無統計學意義（均P ＞0.05），見表2。

表2 不同性別rs2227473 基因多態性的基因型分布 例（%）

2.5 不同年齡段rs2227473 基因多態性的基因型分布情況 對照組不同年齡段等位基因T、C 分布差異有統計學意義（＜0.05），觀察組不同年齡段TT基因型分布差異有統計學意義（＜0.05），見表3。

表3 不同年齡段rs2227473 基因多態性的基因型分布 例（%）

3 討論

痛風是一種尿酸鹽結晶沉積在關節，導致關節紅腫熱痛的疾病，可造成患者反復發作關節炎和軟組織損傷，其致死率不高，但疼痛等級較高，嚴重影響患者生活質量。近年來，痛風的患病率越來越高，患病人群逐漸向年輕化發展[7]。痛風性關節炎的發病率男性多于女性，反復發作，致殘率高，治療手段多治標不治本，甚至常規的治療方法有可能造成嚴重的二次傷害，只能依靠患者進行早期診斷并誘導疾病緩解[8]。痛風是一種典型的慢性代謝疾病，會給患者帶來沉重的負擔，其與高尿酸血癥直接相關[1]。尿酸是嘌呤代謝的最終代謝產物，當人體攝入嘌呤水平過高，或嘌呤代謝出現故障，尿酸就會在體內積聚，當尿酸鹽的濃度達到較高水平后，尿酸鹽晶體的形成風險便會增加[9]。痛風的發展過程可分為四個階段：高尿酸血癥期、尿酸鹽結晶沉淀期、痛風發作期和慢性痛風性關節炎。

IL-22 是由激活的Th17 淋巴細胞、先天淋巴樣細胞等細胞產生，可通過與上皮細胞和基質細胞表面的IL-22 受體結合而作用，促進機體的細胞增殖和組織修復，但在不同的疾病中，起到的作用也不盡相同[10]。有研究發現，急性痛風性關節炎患者外周血IL-22 水平升高，其IL-22 濃度高于健康對照組，這提示IL-22 與急性痛風性關節炎存在相關性，患者體內滑液和組織中的IL-22 可能存在過表達，也可能是炎癥部位的IL-22游離所導致，但其具體機制仍需進一步研究[11]。目前研究認為，單核苷酸多態性（SNP）與復雜性疾病發病密切相關，在不同地區的人群之間具有遺傳差異性，本研究以痛風性關節炎患者為研究對象，探討 IL-22 基因的多態性位點rs2227473 的分布特征，研究其與痛風性關節炎易感性的關系。

本研究結果顯示觀察組血清IL-22水平高于對照組；在rs2227473 基因位點基因型分布與等位基因頻率比較中，觀察組的TT 基因型分布、T 等位基因頻率高于對照組；不同性別和不同年齡段的觀察組和對照組研究對象的rs2227473基因多態性分布有差異。上述結果提示IL-22 基因的多態性位點rs2227473 與痛風性關節炎易感性相關，陽性位點rs2227473 等位基因TT 為痛風性關節炎的高風險因素，而CC 為低風險因素，對該位點的等位基因進行篩查可用于痛風性關節炎患病風險的監測。