奧扎格雷鈉對癲癇小鼠應激、神經損傷程度和神經功能重建相關因子及凝血指標的影響

張亞瓊，姬冬林

(1.榆林市中醫醫院藥學部，陜西 榆林 719051；2.榆林市第五醫院藥學部，陜西 榆林 719053)

癲癇是由于大腦內興奮性及抑制性神經元失衡引起的反復發作的神經功能紊亂綜合征，具有發作性、短暫性、重復性、刻板性等特點[1]。我國約有900多萬人患有癲癇[2]，可表現為全身肌肉強直收縮，頭部傾斜，上肢屈直，下肢伸直，舌咬傷，頭暈、恐懼、胸悶、心悸、感覺異常、精神障礙、惡心及胃部不適等，也可出現不同程度的意識障礙、思維異常、精神運動障礙、情緒異常、腦電波形改變等[3]。流行病學觀察顯示，癲癇整體發病率約為0.12%～0.65%[4]，其中61.1%～95.5%的患者為全面性發作，發病年齡主要為20歲以下[5]。奧扎格雷鈉是一種高效選擇性血栓素合成酶抑制劑[6]，可顯著降低人體中血栓素A2的表達水平，促進前列環素的合成，抑制血小板聚集，改善神經遞質異常引起的神經功能損傷，促進癲癇患者的神經功能恢復，改善患者血液流變學指標，降低血黏度，促進神經細胞的再生[7-8]。本研究就奧扎格雷鈉對癲癇小鼠應激、神經損傷程度和神經功能重建相關因子及凝血指標的影響進行研究，報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 60只健康成年雄性昆明小鼠，SPF級，購于西安微元生物醫藥研究所有限公司，許可證號：SYXK(陜)2020-006。所有小鼠在濕度為40.60%，溫度為(24±1)℃、12 h晝/夜的條件下飼養，自由飲水，適應性飼養1周。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥物與試劑：奧扎格雷鈉(批號：H20059344)；鹽酸匹羅卡品(批號：290K1391)；硫酸阿托品注射液(批號：H42021498)；0.9%氯化鈉注射液(批號：H33020484)。

1.2.2 造模與分組：本研究共納入60只小鼠作為研究對象，采用隨機分配原則將其分為正常組、模型組、奧扎格雷鈉組，每組20只。將模型組及奧扎格雷鈉組注射藥物誘發癲癇。腹腔注射鹽酸阿托品(17 mg/kg)及鹽酸匹羅卡品(180 mg/kg)。采用Racine實驗動物癲癇發作標準對研究對象進行行為學觀察[9]。對于4級發作以下的小鼠進行首劑1/3加注,每次間隔15 min，若連續追加注射2次仍未出現4級以上發作的小鼠，視為造模失敗。癲癇持續狀態30 min后給予地西泮以終止癲癇發作。研究小鼠的藥物用量參考《現代醫學實驗動物學》[10]。正常組：生理鹽水20 ml/kg灌胃2周；模型組：藥物致癇后生理鹽水20 ml/kg灌胃2周；奧扎格雷鈉組：奧扎格雷鈉20 mg/kg灌胃2周。

1.2.3 檢測指標：采集小鼠靜脈血5 ml，以r=8 cm，3000 r/min離心10 min，采用酶聯免疫吸附試劑盒測定應激指標：去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE)、皮質醇(Cortisol,Cor)；神經損傷指標：神經元特異性烯醇化酶(Neuron specific eno1ase，NSE)、星形膠質源性蛋白(S100B)、泛素羧基末端水解酶 L1(UCH-L1)、膠質纖維酸性蛋白(GFAP)；神經功能重建指標：腦源性神經營養因子(BDNF)、神經生長因子(NGF)水平；采用全自動凝血儀檢測各項凝血功能指標水平：活化部分凝血酶原時間(APTT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)及纖維蛋白原(FIB)。

2 結 果

2.1 三組應激激素表達水平比較 與正常組相比，模型組NE、Cor表達水平明顯升高(均P<0.05)；與模型組相比，奧扎格雷鈉組NE、Cor表達水平明顯降低(均P<0.05)，見表1。

表1 三組應激激素表達水平比較

2.2 三組神經功能損傷程度相關因子水平比較 與正常組比較，模型組NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平明顯升高(均P<0.05)；與模型組比較，奧扎格雷鈉組NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平明顯降低(均P<0.05)，見表2。

表2 三組神經功能損傷程度相關因子水平比較

2.3 三組神經功能重建相關因子水平比較 與正常組相比，模型組BDNF、NGF水平明顯降低(均P<0.05)；與模型組相比，奧扎格雷鈉組神經功能重建的細胞因子BDNF、NGF的含量明顯升高(均P<0.05)，見表3。

2.4 三組凝血功能指標水平比較 與正常組比較，模型組凝血指標PT、TT、APTT明顯降低，FIB明顯升高(均P<0.05)，呈現相對高凝狀態。與模型組相比，奧扎格雷鈉組凝血指標PT、TT、APTT明顯升高，FIB明顯降低(均P<0.05)，呈現相對低凝狀態，見表4。

表4 三組凝血功能指標水平比較

3 討 論

癲癇是多種原因導致的腦部神經元異常放電的臨床綜合征，是世界范圍內最常見的神經系統疾病之一[11]。癲癇的發病，不僅會引起患者身體的不適，也對其生活、情緒、工作等造成顯著影響[12]。癲癇的發病機制較為復雜，可能與中樞神經系統興奮性、抑制性神經元的比例失衡有關[13]，也可能與細胞因子的激活、離子通道異常、遺傳、免疫、內分泌等密切相關[14]。癲癇患者一旦發病，需長期用藥，病程較長，因此早期診斷、早期治療就顯得尤為重要[15]。癲癇發病期間，可表現為頭暈、頭痛、惡心、嘔吐、意識喪失、肢體抽動、尿便失禁、舌咬傷等，長期發作可引起不同程度的認知功能障礙，嚴重影響生活質量。

奧扎格雷鈉可抑制血栓素的生成，提高前列環素的表達，減少血小板的聚集，緩解血管痙攣，促進腦組織微循環及能量代謝，挽救受損的大腦神經元，提高紅細胞變形能力，降低全血黏度，改善組織耗氧能力。既往研究發現[16]，奧扎格雷鈉對于腦梗死神經功能損傷及重建具有重要作用，而在癲癇患者中的作用尚未見報道。丁大鵬[17]研究發現奧扎格雷鈉有鈉可保護腦梗死患者的神經功能，疏通腦血管，減輕氧化應激反應。陳開民等[18]研究發現奧扎格雷鈉可有效改善急性腦梗死患者的神經缺損癥狀，降低神經元損傷標志物的表達，減輕機體氧化應激反應，改善預后。李琳峰等[19]研究發現奧扎格雷鈉可能通過調節Rho/Rho-kinase信號通路相關因子，促進腦梗死大鼠神經功能恢復。

本研究中，模型組NE、Cor水平較對照組明顯升高，提示癲癇可引起機體應激反應，而奧扎格雷鈉組NE、Cor水平較模型組明顯降低，提示奧扎格雷鈉可能通過調節氧自由基平衡，抑制局部脂質過氧化反應，減少腦細胞損傷，緩解癲癇小鼠的應激反應[20]。模型組NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平較對照組明顯升高，提示癲癇小鼠神經損傷相關指標明顯升高，即癲癇可引起不同程度的神經損傷；奧扎格雷鈉組NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平較模型組明顯降低，提示奧扎格雷鈉可明顯改善癲癇小鼠的神經損傷；模型組BDNF、NGF水平較對照組明顯降低，提示癲癇可引起小鼠神經功能重建能力降低，而奧扎格雷鈉組BDNF、NGF的含量較模型組明顯升高，提示奧扎格雷鈉可能通過抑制血栓素A1，促進前列環素的生成，擴張微血管，改善腦組織微循環，促進癲癇發作引起的神經元的損傷修復，從而改善神經功能缺損癥狀；模型組較對照組呈現相對高凝狀態，提示癲癇可引起小鼠凝血功能亢進，從而引起血栓等癥狀，而奧扎格雷鈉組較模型組凝血功能呈現相對低凝，提示奧扎格雷鈉可能通過抑制血小板聚集，有效改善癲癇小鼠的凝血功能，防止出凝血障礙等癥狀的出現。

當然，本研究存在一定局限性：①本研究樣本量較小，所得結果可能存在一定的偏倚；②未對奧扎格雷鈉的有效劑量進行梯度研究，未獲得奧扎格雷鈉的最佳有效劑量；③未進行臨床試驗，故暫且不能應用于臨床的治療。未來期待臨床與基礎相結合，以及更加全面、詳細的研究，為癲癇患者的診治帶來新的參考。

綜上所述，奧扎格雷鈉可有效減輕癲癇小鼠應激反應、緩解神經損傷癥狀，加強神經功能重建， 改善凝血指標。