通便靈膠囊中松果菊苷的含量測定及質量情況分析

謝秉湘，朱環，張麗萍，李志梅

溫州市食品藥品檢驗科學研究院，浙江 溫州 325000

通便靈膠囊是由番瀉葉、當歸、肉蓯蓉組成的中藥成方制劑，具有瀉熱導滯，潤腸通便的功效，用于熱結便秘，長期臥床便秘，一時性腹脹便秘，老年習慣性便秘［1］。該品種屬于甲類非處方藥，臨床應用較廣。但其檢測指標單一，大部分標準只包含性狀、鑒別和檢查項目，個別標準包含了番瀉苷、大黃酸或阿魏酸的含量測定。近年來，為提高通便靈膠囊的質量標準，出現了許多質量控制方面的研究論文，已有多位研究者建立了紫外、高效液相色譜法（HPLC）等含量測定方法［2-6］，以及更為深入的指紋圖譜和模式分析方法［7-8］。肉蓯蓉具有補腎陽、益精血、潤腸通便的功效［9］，是該制劑的重要組成部分，但鮮有對肉蓯蓉的成分進行控制的研究方法，無法全面評價該制劑質量。本研究依據《衛生部中藥成方制劑》第七冊及其他法定標準對市場上收集到的45 批樣品進行了全項目檢驗，并采用HPLC 法測定該制劑中肉蓯蓉有效成分松果菊苷的含量，為市售通便靈膠囊的質量評價提供依據。

1 材料

1.1 實驗樣品

通便靈膠囊來源見表1，共45 批次，來自15個藥品生產廠家。

表1 45個批次的通便靈膠囊來源

1.2 實驗試劑

大黃酸（批號110757-201607，純度99.3%），阿魏酸（批號110773-201915，純度99.4%），松果菊苷（批號111670-201907，純度91.8%）。對照品均購自中國食品藥品檢定研究院，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

1.3 實驗儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀-G1314F 紫外檢測器（安捷倫科技有限公司）；XS205DU 十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；DHG-9091A 電熱恒溫干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；ZB-1E 智能崩解儀（天津市天大天發科技有限公司）。

2 方法與結果

2.1 市售通便靈膠囊質量考察

45 批次樣品按標準檢驗（此次研究共涉及5 個檢驗標準）全部合格，具體數據見表2。

表2 樣品標準檢驗結果匯總表

2.2 松果菊苷的含量測定

2.2.1 色譜條件和方法 參考本課題組前期實驗方法［8］，使用太瑋科技JADE-PAK ODS 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇為流動相A，以0.1%甲酸溶液為流動相B，按表3 梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長為340 nm；進樣量20 μL。

表3 流動相梯度洗脫表

2.2.2 對照品溶液的制備 取松果菊苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL 含14.337 μg 的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品內容物2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.4 線性關系考察 精密稱取松果菊苷對照品適量，加50%甲醇制成質量濃度為286.742 μg/mL 的對照品儲備溶液，分別用50%甲醇稀釋至濃度為儲備溶液的1%，2.5%，5%，10%，25%，50%，100%。吸取稀釋液各20 μL，進樣，記錄色譜圖，以質量濃度為橫坐標（X，μg/mL），峰面積為縱坐標（Y）繪制標準曲線，得到回歸方程、線性范圍及相關系數，見表4，結果表明線性關系良好。

表4 松果菊苷回歸方程

2.2.5 精密度試驗 精密稱取同一批樣品內容物2.0 g，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項下色譜條件，連續重復進樣6 次，測定峰面積。松果菊苷的峰面積RSD 為1.0%，表明儀器精密度良好。典型高效液相色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖：A.對照品溶液；B.樣品溶液

2.2.6 重復性試驗 取同一批樣品內容物6 份，各2.0 g，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項下色譜條件進樣，測定峰面積并計算含量。結果松果菊苷的含量RSD 為1.2%，表明實驗方法重復性良好。

2.2.7 穩定性試驗 精密稱取同一批樣品內容物2.0 g，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項下色譜條件分別于0，2，4，8，12 h 進樣，測定峰面積。結果松果菊苷峰面積RSD 為1.0%，表明通便靈膠囊供試品溶液在12 h 內穩定。

2.2.8 回收率試驗 取同一批樣品內容物（溫州海鶴藥業有限公司，批號：20191001）6 份，各1.0 g，精密稱定，精密加入松果菊苷對照品溶液（濃度為230.72 μg/mL）2.0 mL，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，計算加樣回收率。結果，通便靈膠囊中松果菊苷的平均回收率為102.1%，RSD 為0.8%。

2.3 樣品含量測定

取45 批次樣品，按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定，含量測定結果見表5，各廠家之間的比對見圖2。

表5 45批次樣品中松果菊苷含量測定結果（mg/g）

圖2 不同廠家松果菊苷含量比較圖

3 分析

3.1 限度擬定

因現行標準中缺乏肉蓯蓉的質量控制項目，為全面評價通便靈膠囊的質量現狀，本研究抽取了15家生產廠家45 批次樣品用以擬定松果菊苷的含量限度。在通便靈膠囊處方中，肉蓯蓉用量為150 g制成1 000 粒，采用上述松果菊苷含量測定方法對45 批次樣品進行檢測，結果松果菊苷平均質量分數為2.006 9 mg/g。考慮到肉蓯蓉在處方中用量較少，且煎煮后入藥，故本次限度按轉移率70%計算，暫定通便靈膠囊中松果菊苷的限度為1.405 mg/g。

3.2 質量情況分析

按本研究擬定的限度，45 批次樣品中，松果菊苷含量低于擬定限度的共有17 個批次，所占百分比為37.78%，共涉及9 家生產廠家。并且同一生產企業含量的波動較大，如廠家H，最高位3.468 5 mg/g，最低僅為0.945 2 mg/g，相差3.7 倍。此外企業間的含量差距最高達十倍以上（廠家I 和L），肉蓯蓉作為貴重藥材投料，更應該精準把握，而本研究數據顯示這些企業在原材料把控，投料方面和生產工藝方面可能存在問題。

用現有的法定標準檢驗45 批樣品均為合格，而通過松果菊苷含量測定發現各廠家之間樣品存在巨大差異，這可能會導致通便靈膠囊藥效的不穩定性；這跟通便靈膠囊檢驗標準過于簡單不無關系。為了確保藥品質量以及減少各廠家產品間的差異，建議在標準中增加松果菊苷的含量測定。