急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者SAA、MYD88及纖維蛋白原的水平及相關性

繆冬冬，崔芳芳，張傳紅 (南京市浦口區中醫院,江蘇 南京 211800)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)好發于老年人群，主要原因為當身體各項功能開始下降，尤其是免疫功能使得病原感染嚴重，在這種情況下極易導致出現呼吸道感染類疾病[1-2]。而COPD作為一種較典型的慢性呼吸系統疾病，其主要癥狀表現為較長時間的咳嗽、咳痰以及氣促等，極大影響著患者的生活水平[3-4]。相關統計顯示，造成患者死亡的原因，COPD在全球排名中進入前3名[5-6]。由于COPD的病理表現不同，臨床上將COPD分為穩定期與急性加重期，其中大部分患者處在穩定期。該時期臨床表現較輕，各項指標較為穩定，而COPD急性加重期由穩定期突然加重造成，肺功能進行性降低，具有反復性，嚴重情況下容易導致肺心病及呼吸衰竭，嚴重更會威脅生命[7]。因此，通過指標觀察COPD病情發展情況有著重要意義。本研究探討COPD急性加重患者的淀粉樣蛋白A(SAA)、髓系分化因子88(MYD88)及纖維蛋白原(Fbg)相關性，旨在為COPD進展診斷中提供應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2018年11月～2019年11月于我院收治的COPD患者104例為研究對象，其中COPD穩定期(穩定組)患者54例、COPD急性加重期(急性加重組)患者50例，年齡24～36歲，平均年齡(29.5±5.8)歲。另隨機選取同期于本院接受體檢的健康志愿者60例為健康對照組，年齡23～34歲，平均年齡(28.5±4.4)歲。各組一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院醫學倫理委員會同意。

納入標準：符合中華醫學會對COPD的診斷標準[8]。排除標準：①患有精神類疾病，無法配合本研究；②患有血液類疾病；③患有心血管疾病以及惡性腫瘤、高血壓、糖尿病等；④患有肝腎功能障礙等。

1.2方法

1.2.1采集血液：清晨空腹抽取5 ml靜脈血，對各組蛋白及分離淋巴細胞。使用乙二胺四乙酸二鈉鹽采取抗凝靜脈血2 ml，之后放入淋巴細胞分離液，以1 500 r/min離心進行5 min處理，采集上層淋巴細胞，使用氯化氨溶液冰浴對紅細胞破壞，然后錐蟲藍染色判定細胞活力，用含有10%小牛血清RPMI-1640培養液將細胞濃度調至1×106/ml。置入終濃度100 μg/ml植物血凝素，在37℃、5%CO2卵箱中進行培養24 h，采集上清液，-20℃環境下凍存待測。

1.2.2SAA、Fbg檢測:使用酶聯免疫吸附試驗對SAA、Fbg進行檢測，在聚苯乙烯的反應孔內加入使用50 mm碳酸鹽包緩沖液稀釋后抗原，進行加蓋處理之后存放24 h在4℃冰箱內，第2天進行3次洗滌，然后拋干；將稀釋液(pH值為7.4 0.02 mol/L Tris-HCl緩沖液)稀釋的待測標本0.1 ml放入每個孔中，同時放入陽性和陰性對照標本，存放在42℃環境中60 min，移除液體后進行3次洗滌并拋干；在每個孔中放入SAA、Fbg蛋白抗體0.1 ml，存放60 min，移除液體后進行3次洗滌并拋干；在每個孔中放入低物液(0.1 mol/L的Na2HPO4,0.05 mol/L的枸櫞酸)，混勻之后放入0.1 ml鄰苯二胺，進行20 min遮光，再一次放入2 mol/L H2SO40.05 ml放置在每個孔內，終止反應。最后使用酶標儀檢測A450值檢測SAA、Fbg表達。

1.2.3MYD88檢測:使用Western印跡法檢測MYD88表達情況。將磷酸鹽緩沖液(PBS)對標本沖洗之后裂解30 min，測定蛋白濃度。取20 μg/孔蛋白質，添加蛋白緩沖液后進行電泳，10 min后將電轉膜置于10%的牛奶中浸泡，常溫環境下封閉90 min。之后結合一抗、稀釋，孵育1 d，取出后使用TBST液沖洗，結合二抗60 min后清洗、顯色，對MYD88表達進行檢測。

1.3統計學處理:采用SPSS21.0軟件進行方差分析及t檢驗。相關性采用Pearson相關性進行分析。

2 結果

2.13組間SAA表達比較:COPD穩定組、COPD急性加重組SAA表達顯著高于健康對照組，且COPD急性加重組SAA表達高于COPD穩定組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組間SAA表達比較

2.23組間MYD88表達比較:COPD穩定組、COPD急性加重組MYD88表達高于健康對照組，且COPD急性加重組高于COPD穩定組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組間MYD88表達比較

2.33組間Fbg表達比較:COPD穩定組、COPD急性加重組Fbg表達高于健康對照組，且COPD急性加重組Fbg表達高于COPD穩定組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 3組間Fbg表達比較

2.4COPD急性加重患者的SAA、MYD88、Fbg相關性:如圖1所示，在COPD急性加重患者中SAA、MYD88表達呈正相關(r=0.288,P=0.042)；COPD急性加重患者中SAA、Fbg表達呈正相關(r=0.362,P=0.001)；COPD急性加重患者中MYD88、Fbg呈正相關(r=0.324，P=0.021)。

圖1 COPD急性加重患者組織中SAA、MYD88、Fbg表達相關性

3 討論

COPD急性加重患者是日常狀況中超常惡化，在較短時間內出現咳嗽、咯痰及喘氣加重等癥狀[9-10]。其中對呼吸道的感染是導致病情加重的主要原因之一，而引起感染是由于支氣管感染，在氣道黏膜器官腔與黏膜組織中較多藏著感染細菌，從而使炎性反應加重[11-12]。相關研究顯示，在COPD急性加重期患者中氣道感染與全身炎性反應較表現明顯，炎性反應的嚴重程度導致病情的加重，尤其是當患者年齡增加，而不良癥狀也隨著增加，且增加明顯。在臨床上COPD急性加重較為常見，患者大多患有感染及多臟器功能衰竭等不良癥狀，嚴重影響患者預后[13-14]。COPD作為異質性疾病的一種，本研究通過檢測SAA、MYD88及纖維蛋白原表達，以期能夠更好對對COPD病情進行指導治療及對患者病情發展程度做出正確判斷。

人們在繼發性淀粉樣變中認識到了SAA的作用，于1976年在血清中進行分離得到鑒定，確定是一類高度較保守的急性期蛋白家族成員[15-16]。SAA在各種哺乳類動物以及禽類中較為普遍存在，作為急性相蛋白的一種，其性質與CRP相似，是較為敏感的急性反應蛋白[17]。當急性感染或者出現炎癥加重時，SAA濃度能夠表達到正常值的1 000倍以上。在COPD中SAA水平的上升，能夠加重炎性因子反應程度，從而影響支氣管炎癥。相關學者認為，SAA 在區分肺癌與其他癌癥中有著重要作用，可能是肺癌的潛在指標。在對于多數疾病的診斷、治療以及后期回訪檢查等有著重要意義，原因是均參與患者炎癥防御、免疫應答及脂質代謝等方面。本研究顯示，SAA在COPD急性加重患者中呈高表達，再次表明了SAA對于預估炎性反應程度及病情程度有著重要價值。

當COPD急性加重患者發生炎性反應時，TLR4/MYD88通路是誘發氣道炎性反應的重要通路[18-19]。MYD88是機體內重要轉導蛋白，在信號途徑中起到關鍵的作用，還通過調控細胞因子的分泌影響適應性免疫應答。當炎性介質刺激到MYD88，從而使多種炎性因子被激活，使得肺部炎性反應加重。目前研究主要應用基因敲除技術用以觀察在炎癥反應中信號傳導作用，有關COPD信號途徑中的MYD88研究還相對較少，希望通過本研究MYD88來觀察與COPD急性加重的關系，以期能夠通過對COPD急性加重期MYD88的研究，做到預防，便于采取有效的治療措施。本研究顯示，在COPD急性加重患者中，MYD88呈高表達，說明通過檢測MYD88表達能夠預估COPD急性加重患者中肺部炎性反應程度。

病情的逐漸加重，導致一系列不良影響的出現。凝血、止血等一系列病理及生理在COPD病情發展過程中被刺激啟動，造成肺動脈微小血栓，從而對肺動脈高壓情況加重，一系列不良癥狀隨之而來，例如呼吸衰竭、心力衰竭等，甚至會危及生命[20]。相關研究顯示，通過檢測COPD患者中的Fbg，能夠有效觀測出凝血情況[21]。當人們對COPD的深入研究，對Fbg在凝血功能中的作用越來越重視。Fbg由肝臟與巨核細胞共同合成，是凝血因子的一種。受到炎性因子的刺激情況下，Fbg會大量釋放到血液中，不僅在凝血過程起到作用，還能夠與血小板膜糖蛋白相結合，同時介導血小板聚集反應，影響到對血液黏滯度。當Fbg的水平升高不僅能為凝血過程提供酶促反應底物，還能夠增加血液黏滯性、使得紅細胞聚集。當血液流動性下降，血液大循環與微循環均受到影響，極易形成血栓。本研究顯示，Fbg在COPD急性加重患者中表達較高，說明在COPD急性加重患者中通過檢測Fbg情況能夠判斷凝血情況。

綜上所述，通過對COPD中SAA、MYD88及Fbg表達檢測，更好地對COPD患者進行指導治療，能夠有效預估炎性反應程度，正確判斷凝血情況，及時應對患者病情程度發展。