CD38和CD138及MUM-1在慢性子宮內(nèi)膜炎病理診斷中的應(yīng)用

宣瑞紅

(太原金域臨床檢驗(yàn)所有限公司，山西 太原 030032)

慢性子宮內(nèi)膜炎分為非特異性子宮內(nèi)膜炎和特異性子宮內(nèi)膜炎，由急性子宮內(nèi)膜炎遷延形成。傳統(tǒng)意義的慢性子宮內(nèi)膜炎即慢性漿細(xì)胞性子宮內(nèi)膜炎，通常指非特異子宮內(nèi)膜炎。診斷的依據(jù)是子宮內(nèi)膜間質(zhì)中淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)混有中性粒細(xì)胞。淋巴細(xì)胞彌漫分布或聚集成團(tuán)，可形成淋巴濾泡。因正常內(nèi)膜中可見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞及淋巴濾泡，所以漿細(xì)胞的出現(xiàn)是診斷慢性子宮內(nèi)膜炎的重要依據(jù)[1]。在蘇木精-伊紅染色法(HE)切片中，大量的漿細(xì)胞容易被識(shí)別，但炎癥程度較輕時(shí)，漿細(xì)胞數(shù)量少或散在分布，難以識(shí)別，容易漏診。另外，子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞有時(shí)會(huì)有漿細(xì)胞樣外觀[2]，又容易誤診。本研究通過(guò)評(píng)估免疫組化單克隆抗體CD38，CD138和MUM-1在檢測(cè)子宮內(nèi)膜間質(zhì)中漿細(xì)胞的效能，探討免疫組化在慢性子宮內(nèi)膜炎病理診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月—2021年8月3 712 例臨床懷疑子宮內(nèi)膜炎患者的活組織檢查標(biāo)本，患者年齡21～50 歲。臨床表現(xiàn)為出血、盆腔炎、不孕、輸卵管粘連。宮腔鏡觀察到子宮內(nèi)膜局灶性或彌漫性充血、間質(zhì)水腫和子宮內(nèi)膜表面形成大于1 mm的息肉等[3]。所有標(biāo)本均進(jìn)行HE染色及單克隆抗體CD38，CD138和MUM-1的免疫組化染色，以觀察子宮內(nèi)膜間質(zhì)中漿細(xì)胞的表達(dá)情況。

1.2 方法

子宮內(nèi)膜活組織檢查標(biāo)本用10%中性甲醛固定，經(jīng)脫水、石蠟包埋后切成2～3 μm的薄片，進(jìn)行HE及免疫組化染色。免疫組化染色采用EnVision法，所用抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。組織切片放65 ℃烤箱烤2 h，烤好的切片脫蠟至水，并進(jìn)行高壓鍋抗原熱修復(fù)，即高壓修復(fù)鍋內(nèi)加入適量乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)液，加熱沸騰，至限壓閥噴氣轉(zhuǎn)動(dòng)2.5 min，冷卻至室溫后取出切片；在3%過(guò)氧化氫溶液中浸泡10 min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次3 min；滴加一抗抗體，4 ℃冰箱過(guò)夜孵育，后用PBS緩沖液洗滌3次，每次3 min，滴加通用型二抗，37 ℃恒溫箱孵育40 min，再用PBS緩沖液洗滌3次，每次3 min，滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)工作液進(jìn)行顯色(5～10 min)；顯微鏡下控制顯色效果，顯色后經(jīng)蘇木素襯染，再脫水至透明，中性樹(shù)膠封片。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)2021版《婦產(chǎn)科病理學(xué)》對(duì)慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估：漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤(rùn)；子宮內(nèi)膜間質(zhì)充血、水腫，小血管增生，間質(zhì)纖維化，局部間質(zhì)崩解；子宮內(nèi)膜上皮損傷性改變，表面上皮化生[1]。本研究收集3 712 例子宮內(nèi)膜活組織檢查標(biāo)本，主要診斷依據(jù)為子宮內(nèi)膜間質(zhì)淋巴細(xì)胞增多，可伴有淋巴濾泡形成，間質(zhì)可見(jiàn)漿細(xì)胞浸潤(rùn)，漿細(xì)胞量≥5個(gè)/HPF；次要診斷依據(jù)為間質(zhì)細(xì)胞變?yōu)樗笮位蚶w維化，可伴隨子宮內(nèi)膜間質(zhì)充血水腫，腺體呈增殖期，表面上皮和腺上皮的反應(yīng)性改變(細(xì)胞復(fù)層化和輕度細(xì)胞核增大)，嗜酸細(xì)胞化生、乳頭狀化生及鱗狀化生，小血管的肉芽腫樣增生等[1]。HE染色滿足主要診斷依據(jù)，伴或不伴次要診斷依據(jù)者可直接判讀為慢性子宮內(nèi)膜炎；僅滿足次要診斷依據(jù)，判讀為可疑慢性子宮內(nèi)膜炎。免疫組化：CD38以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性，CD138以細(xì)胞膜/細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性；MUM-1以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性。判斷標(biāo)準(zhǔn)是子宮內(nèi)膜間質(zhì)中每個(gè)高倍視野陽(yáng)性細(xì)胞大于5個(gè)[4]。固定兩名病理醫(yī)師按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

3 712 例標(biāo)本中，HE染色判讀為慢性子宮內(nèi)膜炎447 例，陽(yáng)性率為12.04%，可疑慢性子宮內(nèi)膜炎572 例，陽(yáng)性率為15.41%。CD38總陽(yáng)性數(shù)為1 255 例，陽(yáng)性率為33.81%；CD138總陽(yáng)性數(shù)為897 例，陽(yáng)性率為24.16%；MUM-1總陽(yáng)性數(shù)為912 例，陽(yáng)性率為24.57%；CD138和MUM1陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.164 4，P>0.05)。CD38陽(yáng)性率高于CD138和MUM1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=77.203 3和76.670 9，P<0.01)。MUM-1單一陰性13 例(0.35%)，CD138單一陰性21 例(0.56%)，CD38單一陰性例數(shù)為0。MUM-1單一陰性病例與CD138單一陰性病例相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.725 3，P>0.05)；MUM-1單一陰性病例與CD38單一陰性病例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.026 9，P<0.01)；CD138單一陰性病例與CD38單一陰性病例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.053 4，P<0.01)。CD38單一陽(yáng)性343 例(9.24%)，CD138和MUM-1單一陽(yáng)性病例數(shù)均為0。CD38單一陽(yáng)性病例與CD138和MUM-1單一陽(yáng)性病例相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2均為359.616 7，P<0.01)。HE判讀為慢性子宮內(nèi)膜炎的447 例標(biāo)本中，CD138和/或MUM-1陽(yáng)性者447 例，陽(yáng)性率為100.00%，其中316 例患者漿細(xì)胞>20個(gè)/HPF，131 例漿細(xì)胞<20個(gè)/HPF；HE判讀為可疑慢性子宮內(nèi)膜炎標(biāo)本472 例，CD138和/或MUM-1陽(yáng)性者420 例，陽(yáng)性率為88.99%，漿細(xì)胞均<20個(gè)/HPF。HE判讀為陰性的2 702 例患者中，CD138和/或MUM-1陽(yáng)性者51 例，陽(yáng)性率為1.89%，漿細(xì)胞均<20個(gè)/HPF。最終經(jīng)HE和免疫組化綜合判斷為慢性子宮內(nèi)膜炎的病例數(shù)為918 例。慢性子宮內(nèi)膜炎中漿細(xì)胞表達(dá)CD38，CD138，MUM-1及HE形態(tài)特征見(jiàn)圖1。

(a)：CD38，EnVision法，×400；(b)：CD138，EnVision法，×400；(c)：MUM-1，EnVision法，×400；(d)：HE染色，×400圖1 慢性子宮內(nèi)膜炎中的漿細(xì)胞

3 討 論

急性子宮內(nèi)膜炎在臨床上多伴有上行性感染，間質(zhì)內(nèi)大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)比較明確。但慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)不完全統(tǒng)一。文獻(xiàn)調(diào)查[4]發(fā)現(xiàn)，在病理學(xué)中，用于非特異性和非產(chǎn)科慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)存在很大差異。在子宮內(nèi)膜活組織檢查標(biāo)本中，HE染色鑒定漿細(xì)胞特征比較模糊，敏感性和特異性均較差，單個(gè)散在時(shí)更加難以識(shí)別，且與子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞大小相仿，增加了識(shí)別的難度。Liu等[5]推薦子宮內(nèi)膜活組織檢查應(yīng)進(jìn)行HE染色結(jié)合CD138免疫組化。CD138免疫組化診斷標(biāo)準(zhǔn)為：高倍鏡下子宮內(nèi)膜間質(zhì)中典型漿細(xì)胞≥5個(gè)/HPF時(shí)是漿細(xì)胞性子宮內(nèi)膜炎；漿細(xì)胞<5個(gè)/HPF或未見(jiàn)典型漿細(xì)胞時(shí)為未見(jiàn)子宮內(nèi)膜炎。HE染色診斷標(biāo)準(zhǔn)為子宮內(nèi)膜間質(zhì)中見(jiàn)到典型的漿細(xì)胞，核偏位，胞漿深染[4]。Rimmer等[6]認(rèn)為將4～6個(gè)/HPF作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，具有最好的預(yù)測(cè)精度。免疫組化抗體CD138，MUM-1與HE染色方法相比，可以提高檢測(cè)漿細(xì)胞的敏感性，提高漿細(xì)胞計(jì)數(shù)速度，減少輕癥病例的漏診，并可以降低HE染色的假陽(yáng)性，避免將子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞誤認(rèn)為漿細(xì)胞，排除病理醫(yī)生診斷的主觀差異。CD38是分子量為45 kDa的跨膜糖蛋白，是淋巴細(xì)胞膜受體，表達(dá)于早期的CD34+骨髓前體細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、活化T細(xì)胞、前B細(xì)胞、活化B細(xì)胞，包括漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和部分外周NK細(xì)胞，免疫組化染色細(xì)胞膜呈棕黃色。CD138，又稱多聚體蛋白多糖1，含有4個(gè)跨膜糖蛋白，表達(dá)于早期前體B細(xì)胞，在向漿細(xì)胞分化時(shí)重新獲得表達(dá)，免疫組化染色細(xì)胞膜/細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色，比HE染色更敏感。MUM-1又稱干擾素調(diào)節(jié)因子4，是淋巴細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，表達(dá)于部分生發(fā)中心B細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、漿細(xì)胞及多種淋巴造血腫瘤，免疫組化染色細(xì)胞核呈棕黃色。Parks等[7]認(rèn)為在檢測(cè)子宮內(nèi)膜漿細(xì)胞時(shí)MUM-1染色比CD138染色更敏感。

本研究對(duì)3 712 例臨床懷疑子宮內(nèi)膜炎樣本進(jìn)行了HE染色及免疫組化CD38，CD138，MUM-1染色，其中CD38，CD138，MUM-1任意兩個(gè)抗體陽(yáng)性者891 例，HE染色觀察到漿細(xì)胞，可確診為慢性子宮內(nèi)膜炎；僅CD38陽(yáng)性343 例，經(jīng)HE染色證實(shí)CD38陽(yáng)性者并非全漿細(xì)胞；2 444 例任何抗體未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，排除了慢性子宮內(nèi)膜炎，HE染色也未找到漿細(xì)胞。免疫組化CD38除漿細(xì)胞外，多種其他類型炎癥細(xì)胞也可表達(dá)，提示特異性較差；免疫組化CD138漿細(xì)胞和上皮細(xì)胞雖然均可表達(dá)，但子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的腺樣結(jié)構(gòu)比較容易識(shí)別，不會(huì)對(duì)漿細(xì)胞造成干擾；MUM-1主要表達(dá)在細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)染色稍淺，容易識(shí)別是否為漿細(xì)胞。由此可見(jiàn)，CD38譜系較廣，對(duì)漿細(xì)胞的特異性較差，不建議單獨(dú)使用，而免疫組化CD138和MUM-1能較好地識(shí)別漿細(xì)胞，準(zhǔn)確性較高，可作為慢性(漿細(xì)胞)性子宮內(nèi)膜炎的輔助診斷。