液相色譜法測定蘋果中 滅幼脲殘留量的不確定度評估

李 云，章 穎，李牛江杰，莊 瓊

（安徽省產品質量監督檢驗研究院，安徽合肥 230000）

滅幼脲可高效殺滅鱗翅目類等幼蟲蟲卵，作為一種低毒殺蟲劑被廣泛應用于果蔬類黏蟲、螟蟲、菜青蟲和小菜蛾等蟲害的防治工作[1]。然而，長期食用含滅幼脲的食品會對人體產生一定的損傷[2-3]。

不確定度是反映測量結果的分散性，與測量結果具有相關性[4-5]。本文擬參照《植物性食品中滅幼脲殘留量的測定》（GB/T 5009.135—2003）建立滅幼脲的檢測方法；參照《測量不確定度評定與表示》 （JJF 1059.1—2012）建立數字模型，《化學分析測量不確定度評定》（JJF 1135—2005）評定蘋果中滅幼脲的不確定度。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選擇蘋果為植物性食品代表樣品，購置于當地農貿市場。滅幼脲標準品，純度99.8%，中國計量院；二氯甲烷為色譜純，其他試劑為分析純。

1.2 儀器設備

電子天平，精確至0.1 mg，METTLER TOLEDO； 均質器，轉速可達3 000～25 000 r/min，德國IKA；離心機，轉速可達100～14 000 r/min，賽默飛世爾科技公司；LC30液相色譜儀，配有PDA檢測器，島津公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動 相：甲醇-水（75+25）；流速：1 mL/min。

1.3.2 樣品提取

蘋果樣品去柄，搗碎成漿狀，后稱取2.500 g試樣，根據《植物性食品中滅幼脲殘留量的測定》 （GB/T 5009.135 —2003）進行樣品提取，合并上清液，用提取液定容至25 mL。

1.3.3 樣品凈化

根據《植物性食品中滅幼脲殘留量的測定》 （GB/T 5009.135 --2003）進行樣品凈化，將樣品凈化液于40 ℃下水浴氮吹近干，加入1 mL二氯甲烷溶解，過0.45 μm濾膜上機測定。

1.3.4 數學模型建立

樣品中滅幼脲含量計算的數學模型建立如下：

式中：X為樣品中滅幼脲的含量，mg/kg；m為樣品質量，g；V1為試樣浸出液的定容體積，mL；C為利用標準曲線算得的試樣殘渣溶液中滅幼脲的濃度，μg/mL；V2為上柱的試樣浸出液的體積，mL；V3為溶解試樣殘渣所用的溶劑體積，mL。

2 結果與分析

2.1 不確定度因素的分析

本方法不確定因素主要來源為稱取樣品過程中引入的不確定度、配制標準溶液過程中引入的不確定度、定容樣品時引入的不確定度、標準曲線擬合時引入的不確定度、重復性測定時引入的不確定度和樣品加標時引入的不確定度。

2.2 稱取樣品過程中引入的相對標準不確定度urel(m)

2.3 標準溶液引入的相對標準不確定度urel(C)

2.3.1 標準物質純度引入的相對不確定度urel(C1)

根據標準物質證書，標準品滅幼脲的相對不確定度為urel(C1)=0.7%（k=2）。

2.3.2 配制標準溶液引入的不確定度urel(C2)

標樣的制備方法：稱取10.0 mg滅幼脲標準品于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度。滅幼脲標準儲備液濃度為0.1 mg/mL。然后準確吸取標準儲備液10 μL、 20 μL、50 μL、100 μL和200 μL置于10 mL容量瓶。所以標準溶液配制引入的不確定度由3個分量合成。

2.4 定容樣品時引入的相對標準不確定度urel(V1)

2.5 標準曲線擬合時引入的相對標準不確定度urel(A)

標準曲線每一個濃度分別進樣2次，取兩次峰面積平均值，結果如表1所示。

表1 滅幼脲標準溶液5個濃度點與對應的峰面積

由表1可知，工作曲線線性方程為：

式中：Ai為第i個標準溶液的峰面積；Ci為第i個標準溶液的濃度，μg/mL；a為線性方程的斜率；b為線性方程的截距。按照線性擬合，得到線性方程為A=220.357C，線性相關系數r為1。

故工作曲線擬合產生的標準不確定度為：

式中：u(A)為由擬合直線求C0時產生的不確定度；SR為由擬合直線求得的A與相應Ai測定值之差按貝塞爾公式求出的標準偏差；p為試樣溶液的進樣次數，p=2；n為標準工作溶液總的進樣次數，n=5；Ai為標準工作溶液峰面積測定值；a為斜率，其值為220.357；b為截距，其值為0；Ci為滅幼脲標準工作溶液的濃度，μg/mL；C—為滅幼脲標準工作溶液濃度的平均值，為0.76 μg/mL；C0為試樣中滅幼脲的濃度，為2 μg/mL。

根據上述公式得到標準曲線擬合時引入的不確定度為u(A)=0.003 73 μg/mL。

將表1中的數據代入上述公式，計算得SR=0.024 0，u(A)=0.003 73 μg/mL，則標準曲線擬合時引入的相對不確定度為urel(A)=u(A)/C0=0.003 73/2=0.001 865。

2.6 重復性測定時引入的相對標準不確定度urel(F)

表2為7次重復試驗測定蘋果中滅幼脲殘留量的匯總表。

表2 蘋果中滅幼脲重復性結果

根據正態分布計算，重復性測定時引入滅幼脲的不確定度為：

試樣溶液測定平均值為C=2.038 mg/kg，計算得到重復性測定時引入的相對標準不確定度為urel(F)=u(F)/C=0.014 4/2.038=0.007 06。

2.7 樣品加標時引入的相對標準不確定度urel(B)

取2.500 g樣品，添加1.00 mg/L滅幼脲標準溶液，根據式（1）計算出蘋果中滅幼脲的加標實驗結果，見表3。

表3 蘋果中滅幼脲加標實驗結果

樣品加標進行了兩次平行測定，因此，樣品加標引入的不確定度為：

樣品平均回收率為x=94%。因此，樣品加標時引入的相對標準不確定度urel(B)=u(B)/x=0.000 022 7。

2.8 相對合成標準不確定度ucrel(x)和擴展不確定度U

蘋果中滅幼脲的相對合成標準不確定度為：

蘋果中滅幼脲含量x=2.00 mg/kg，則滅幼脲合成標準不確定度為uc(x)=0.011 7×2.00=0.023 4 mg/kg。 選擇包含因子k=2，則擴展不確定度為U=2uc(x)= 0.046 8 mg/kg。蘋果中滅幼脲的含量測量結果為（2.00±0.046 8）mg/kg，k=2。

3 結論

本研究建立了測定蘋果中滅幼脲殘留量過程中的不確定度評定方法，歸納了不確定度因素的來源，根據最終評定結果可以看出，滅幼脲的不確定度主要來源于標準溶液的配制、標準工作曲線的擬合、重復性測定和標準溶液的樣品加標，應當注意標準曲線的配制和重復性測定。