大蒜洋蔥的熱性物質(zhì)基礎(chǔ)研究

程薇薇，劉建利，史 敏，畢芳芳，張 露，袁 悅

（1.西安培華學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710125；2.西北大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，陜西西安 710069）

中藥藥性理論是中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論的重要組成部分，其中寒熱藥性是中藥藥性理論和中醫(yī)治法治則的基礎(chǔ)。醫(yī)書之祖《黃帝內(nèi)經(jīng)》為中藥藥性理論的提出奠定了基礎(chǔ)，《神農(nóng)本草經(jīng)》正式提出“四氣”的概念，即藥有寒、熱、溫和涼四氣，并提出“療寒以熱藥，療熱以寒藥”的基本中醫(yī)治則，即“寒者熱之，熱者寒之”。陶弘景在《本草經(jīng)集注》中明確指出：“藥物甘苦之味可略，唯冷熱須明”，進(jìn)一步說明了中藥寒熱藥性的重要地位。而隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國際化發(fā)展的進(jìn)程，迫切需要揭示中藥寒熱藥性的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，即物質(zhì)基礎(chǔ)、現(xiàn)代藥理作用及作用機(jī)制，從而構(gòu)建中藥寒熱藥性的現(xiàn)代理論，對現(xiàn)代中醫(yī)臨床辨證論治與合理用藥提出指導(dǎo)。

中藥治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)是其所含的化學(xué)成分，中藥寒熱藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)也應(yīng)該是其所含的化學(xué)成分。其可能是具有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)和共同藥理作用的一類或多類化合物共同組成的物質(zhì)群體[1]。大蒜（Allium sativumL.），為百合科蔥屬植物蒜的鱗莖。大蒜具有抗心肌缺血、抗氧化、降血脂、抗病原微生物和抗腫瘤等多種藥理作用，并被收錄于多國藥典中[2]。含硫有機(jī)化學(xué)成分不僅是大蒜的重要生物活性物質(zhì)，也是大蒜的主要風(fēng)味物質(zhì)，賦予了大蒜獨(dú)特的刺激性味道[3]。洋蔥（Allium cepaL.），屬百合科蔥屬二年生草本植物。洋蔥由于營養(yǎng)價(jià)值極高而被譽(yù)為“蔬菜皇后”，其也是公認(rèn)的藥食兩用蔬菜。研究表明，洋蔥含有硫化物、黃酮類、甾體皂甙類、苯丙素酚類、含氮化合物和前列腺素類等化學(xué)成分[4]。其中，含硫化合物是洋蔥發(fā)揮特征風(fēng)味、顯示多種生理功效的主要成分。而大蒜、洋蔥所含的硫化物主要是硫醚類化合物，如大蒜中含有二烯丙基一硫化物、二硫化物和三硫化物等[5]；洋蔥中含有硫醚類（R-Sn-R）、硫醇類（R-SH）等，其中R基團(tuán)為甲基、丙基、烯丙基等[6]。本文選擇大蒜、洋蔥中的12種硫醚類化學(xué)成分，通過考察其對離體培養(yǎng)細(xì)胞MCF-7生長增殖的影響判斷寒熱屬性，進(jìn)而探索大蒜、洋蔥的熱性物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株為人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的傳代細(xì)胞，西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院提供。

1.2 藥品與試劑

二甲基一硫醚、二甲基二硫醚、二甲基三硫醚、二丁基一硫醚、二丁基二硫醚、二丁基三硫醚、二烯丙基一硫醚、二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚、二芐基一硫醚、二芐基二硫醚和二芐基三硫醚，這些硫醚類化合物皆為本實(shí)驗(yàn)室自制并經(jīng)結(jié)構(gòu)表征；HyClone改良型RPMI-1640培養(yǎng)液（賽默飛世爾生物化學(xué)制品北京有限公司）；四季青無支原體胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；噻唑藍(lán)（MTT，西安舟鼎國生物技術(shù)有限公司）；二甲基亞砜 （DMSO，純度大于99.5%，西安舟鼎國生物技術(shù)有限公司）；PBS（磷酸緩沖液）；胰蛋白酶（西安舟鼎國生物技術(shù)有限公司）。

1.3 儀器

μQuant酶標(biāo)儀（美國Bio-Tek）；CO2培養(yǎng)箱 （sanyo公司）；普通倒置光學(xué)顯微鏡和超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 受試藥品溶液的制備

取一定量的樣品溶于DMSO中，再用DMSO稀釋至所需的濃度梯度。

1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)

MCF-7細(xì)胞，于含有10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液（pH 7.0～7.5）中，在恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃、5% CO2及飽和濕度傳代培養(yǎng)。

1.4.3 MTT實(shí)驗(yàn)

取對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5×107/L，接種于96孔板，每孔200 μL，置于恒溫培養(yǎng)箱中，37 ℃、5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)24 h，細(xì)胞貼壁后，換新鮮培養(yǎng)液（200 μL），實(shí)驗(yàn)組加入不同體積的藥品溶液（10 mg/mL），使終濃度分別為0.250 μmol/mL、0.125 μmol/mL、0.025 μmol/mL和0.010 μmol/mL；同時(shí)設(shè)置空白對照組和調(diào)零孔，每個(gè)處理組設(shè)置3個(gè)平行孔。96孔板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，換新鮮培養(yǎng)液，逐孔加入新鮮配制的MTT溶液（5 g/L）20 μL繼續(xù)培養(yǎng)4 h。吸棄上清液，每孔加入150 μL DMSO，振蕩10 min（60次/min）后，用酶聯(lián)免疫標(biāo)定儀測定490 nm處光吸收值（A值）。按下列公式計(jì)算細(xì)胞抑制率。抑制率為正值表示對細(xì)胞生長增殖有抑制作用，負(fù)值表示對細(xì)胞有促增殖作用[7]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)以±S表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

MTT法測得12種硫醚類化合物的4個(gè)濃度梯度處理組及對照組的吸光度值見表1。通過細(xì)胞抑制率公式計(jì)算所得的結(jié)果見表2。

由表1、表2可知，12種硫醚類化合物在一定濃度范圍內(nèi)對MCF-7生長增殖都具有促進(jìn)作用。其中，二甲基一硫醚、二甲基二硫醚、二甲基三硫醚在0.010～0.125 μmol/mL表現(xiàn)為促進(jìn)作用，當(dāng)濃度達(dá)到0.250 μmol/mL時(shí)轉(zhuǎn)變?yōu)橐种谱饔茫黄溆嗷衔镌谒x濃度范圍內(nèi)均表現(xiàn)為促進(jìn)作用。

表1 硫醚類化合物對MCF-7生長增殖的影響結(jié)果表（X—±S，n=3）

表2 硫醚類化合物對MCF-7生長增殖的抑制率表（單位：%）

3 結(jié)論與討論

筆者課題組已建立的判斷方法：如果在所選濃度范圍內(nèi)，藥物對細(xì)胞生長增殖有促進(jìn)作用或低濃度促進(jìn)、高濃度抑制，則屬性判定為熱性；如果在所選濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)為抑制，有可能是寒性也有可能為高濃度的熱性表現(xiàn)，此時(shí)將濃度范圍繼續(xù)向低濃度方向延伸，如果還表現(xiàn)為抑制，則屬性為寒性，如果表現(xiàn)為促進(jìn)，則確定為熱性[8]。據(jù)此可判定，12種硫醚類化合物的寒熱屬性均為熱性。因此，硫醚類化合物應(yīng)該是大蒜、洋蔥的熱性物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本文的研究結(jié)果提示中藥所含的同一類化學(xué)成分，其寒熱屬性可能是一致的，即寒熱屬性與化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)之間可能存在特定的聯(lián)系。此外，中藥是由多種化學(xué)成分組成的復(fù)雜體系，其寒熱屬性應(yīng)該是多種化學(xué)成分寒熱效應(yīng)的綜合體現(xiàn)。大蒜、洋蔥的熱性物質(zhì)基礎(chǔ)應(yīng)該還有其他化學(xué)成分共同組成，應(yīng)整體考慮。