注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量測定方法

梁超

摘要：目的 建立注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量測定方法。方法 HPLC法，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），以緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調節pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為254nm，柱溫為30℃。結果 線性回歸方程為Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），EDTA-2Na濃度在3.95～39.40μg/ml范圍內線性關系良好;平均回收率為99.60%（n=9），RSD為0.5%，樣品在24h內基本穩定。 結論 本方法快速、準確、靈敏度高、重復性好，可用于測定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量。

關鍵詞：泮托拉唑鈉;EDTA-2Na;HPLC法;含量

【中圖分類號】 R927.2 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）13--01

注射用泮托拉唑鈉主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃粘膜病變、復合型胃潰瘍等所致的急性上消化道出血[1-2]，為質子泵抑制劑，是一種良好的抑制胃酸藥物，臨床使用廣泛。EDTA-2Na是常用的金屬離子絡合劑，許可用于注射制劑。它能有效增強藥物的穩定性，其原理為EDTA-2Na可以與金屬離子形成穩定的水溶性螯合物，能夠防止自身的氧化，有利于提高藥物在制備、存儲和臨床配制過程中的穩定性。因此需要在處方中加入EDTA-2Na提高產品的穩定性。中國藥典2020年版及進口注冊標準JX20150094均收錄了注射用泮托拉唑鈉的質量標準，但標準中均未收錄EDTA-2Na檢測方法，為了更好地控制產品質量，本研究開發了一種簡單、迅速、精確的用于測定注射用泮托拉唑鈉中的EDTA-2Na含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器? HPLC高效液相色譜儀（LC-20AT，島津）、電子天平（梅特勒）、PB-10型酸度計（梅特勒）。

1.2 試藥 硫酸銅（CuSO4·5H2O，分析純）、10%四丁基氫氧化銨（分析純）、三氟乙酸（色譜純）、乙腈（色譜純）、EDTA-2Na對照品（純度100%）、注射用泮托拉唑鈉（武田制藥，批號：442145）、純化水自制。

2 溶液的配制

2.1 溶劑：稱取硫酸銅250mg，加入水1000ml，攪拌使溶解，即得。

2.2 供試品溶液：取本品1瓶，全部取出稱重為45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品貯備液：取EDTA-2Na對照品約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 對照品溶液：精密量取對照品貯備液5ml，置50ml量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 系統適用性溶液：取泮托拉唑鈉約40mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加對照品貯備液5ml，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液。

3 方法與結果

3.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），流動相為緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調節pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68），流速為1.0ml/min，檢測波長為254nm，柱溫為30℃。

3.2 系統適用性試驗 分別取“空白溶劑”、“系統適用性溶液”和“對照品溶液”各20μl，注入高效液相色譜儀，采用“3.1”項下色譜條件進樣檢測，記錄色譜圖，由色譜圖可知EDTA-2Na的保留時間約為15min，系統適用性溶液中EDTA-2Na色譜峰與泮托拉唑色譜峰之間的分離度大于1.5;對照品溶液，連續進樣5次，保留時間RSD值小于1.0%，峰面積的RSD值小于5.0%，系統適用性符合要求。

3.3 線性關系考察 稱取EDTA-2Na對照品大約20mg，精密稱定置200ml容量瓶中，加入溶劑溶解并定容，分別精密移取EDTA-2Na對照品貯備液4ml、10ml、20ml、30ml、40ml分別加入到100ml容量瓶中，再分別加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得各線性對照品溶液，含EDTA-2Na質量濃度分別為4.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml、40.0μg/ml，采用“3.1”項下色譜條件進樣檢測，以峰面積（Y）對濃度（X）為進行線性回歸，得到標準曲線方程Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），說明EDTA-2Na濃度在3.95～39.40μg/ml范圍內線性關系良好。

3.4 精密度試驗? 取對照品溶液，分別連續進樣6次，記錄色譜圖，EDTA-2Na的峰面積RSD為0.3%，結果表明此方法精密度良好。

3.5 定量限及檢測限? 取EDTA-2Na對照品貯備液用溶劑逐級稀釋，制備定量限及檢測限溶液，同法測定，定量限為0.62ng，S/N約為10，檢測限為0.16ng， S/N約為3。

3.6 重復性試驗? 取本品1瓶，全部取出稱重為45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液進樣測定，制備6份供試品溶液中，EDTA-2Na含量均在90.0%～110.0%之間，RSD值為1.1%，小于5.0%，表明此方法重復性良好。

3.7 準確度試驗 供試品溶液中EDTA-2Na濃度為20μg/ml，考察濃度分別15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml。在3個濃度上考察EDTA-2Na的回收率，分別為供試品溶液中EDTA-2Na濃度的75%、100%、125%，每個濃度上平行制備3份樣品溶液。以外標法計算EDTA-2Na的含量。9個樣品的回收率在95.0%～105.0%范圍內，平均回收率為99.6%，RSD值為0.5%，小于5.0%，表明該方法準確性良好。

3.8 穩定性試驗 取供試品溶液，分別在0h、2h、4h、12h和24h進樣測定，EDTA-2Na主峰峰面積相對于0h的比值在95.0%～105.0%之間，表明供試品溶液在24h內穩定性良好。

3.9 樣品含量測定 取注射用泮托拉唑鈉樣品3瓶，每瓶全部取出稱重為 45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液按3.1項色譜條件進樣測定;同時取對照溶液進樣測定，按照外標法計算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑鈉粉末中EDTA-2Na含量分別為0.996mg、0.989mg、0.991mg。

4 討論

4.1 測定方法選擇? EDTA-2Na現有的檢測方法包括滴定法和比色法，該方法的靈敏度和專屬性較差，產生較大干擾;有報道采用HPLC 法測EDTA-2Na的方法，但該方法經驗證后峰形較差，檢測的準確性和重現性較差[3]。本研究以緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調節pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）作為流動相時，EDTA-2Na出峰時間適宜，峰形較好，基線平穩，檢測結果準確可靠，專屬性強，檢測時間較短，靈敏度較高，檢測限低，干擾較少的高效液相色譜法。

4.2 色譜柱的選擇 本次實驗采用緩沖鹽-乙腈-水（10：22：68）為流動相，若使用常規 C18柱，長時間用純水相沖洗可能會導致固定相的流失，柱效下降，故試驗中采用了更強的疏水性相互作用的Intersil ODS-3-Cl8色譜柱，實驗結果證明，多次進樣后，色譜峰形保持良好。

本方法可用于測定注射用泮托拉唑鈉中的EDTA-2Na含量，快速、簡便、靈敏度高。因此可利用此法判斷該藥物輔料中EDTA-2Na的存在，判斷是否與參比制劑一致輔料用量，確保仿制產品質量一致性。

參考文獻：

[1]陳江飛，苗彩云，楊洪明.國產和進口泮托拉唑鈉在輸液中的配伍穩定性考察[J].中國臨床藥學雜志，2013，22（1）：27-30.

[2]劉青青，陳瑤，肖雨婷.泮托拉唑鈉粉針劑治療上消化道出血療效觀察[J].中國實用醫藥，2013，8（1）：25-26.

[3]趙杰，HPLC法測定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量[J].醫學信息，2013，31（11）：138-139.