日糧中銅和維生素A及其互作對肉仔雞血清抗氧化酶活性的影響

曹威榮，孫 睿，吳小葉

（1.朔州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 朔州 036002；2.沁水縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，山西 沁水 048200；3.朔州市平魯區(qū)草牧業(yè)發(fā)展中心，山西 朔州 036800）

許多研究表明，營養(yǎng)素之間存在著廣泛的互作效應(yīng)[1]。銅和維生素A 是家禽必需的兩種營養(yǎng)素，都參與機(jī)體的抗氧化功能。動物體內(nèi)代謝產(chǎn)生的大量超氧陰離子自由基雖然是機(jī)體必需的，但也可間接或直接發(fā)揮強(qiáng)氧化劑作用，給機(jī)體造成傷害。因此需要及時(shí)清除多余的超氧陰離子，才能維持動物體良好的免疫狀態(tài)，這就需要動物機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)來起作用。動物體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)包括抗氧化酶和抗氧化劑，抗氧化酶有谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、一氧化氮合成酶（NOS）等。銅是一些抗氧化酶的關(guān)鍵性組分，動物體內(nèi)缺銅時(shí)，機(jī)體內(nèi)發(fā)生的多種病理或生理變化與過氧化作用有密切的關(guān)系。本研究探討了銅和維生素A及其互作效應(yīng)對肉仔雞血清GSH-Px和NOS的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成

試驗(yàn)采用Cu×維生素A（4×2）完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，試驗(yàn)分前、后兩個(gè)階段，即前期1～4 周齡和后期5～7 周齡兩個(gè)階段。除Cu和維生素A兩個(gè)試驗(yàn)因素外，其他營養(yǎng)成分指標(biāo)都參照我國肉仔雞的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。基礎(chǔ)飼糧中實(shí)測的銅含量分別為23.36 mg·kg-1（1～4 周齡）和16.00 mg·kg-（15～7 周齡）；銅的添加形態(tài)為五水硫酸銅粉末，添加量為0、8、150、225 mg·kg-1，維生素A的添加形式為視黃醇乙酸酯粉劑，添加量為1 500、5 000 IU·kg-1。日糧組成和營養(yǎng)成分見表1。

表1 日糧組成和營養(yǎng)成分

1.2 試驗(yàn)動物及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動物為山西文水大象禽業(yè)有限公司提供的448只1日齡艾維茵肉仔雞，每個(gè)重復(fù)為14只雞（7公7母），4個(gè)重復(fù)為1大組，共8大組。飼養(yǎng)方式為籠養(yǎng)，雞籠噴漆避免其他金屬礦物質(zhì)的影響，使用塑料水槽和料槽，雞只自由采食和飲水。試驗(yàn)地點(diǎn)為山西農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧站，試驗(yàn)分兩個(gè)階段：前期1～4周齡，后期5～7周齡。

1.3 樣品制備及指標(biāo)測定方法

肉仔雞分別于4 周齡和7 周齡進(jìn)行心臟采血制備血清，低溫保存。血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和一氧化氮合成酶（NOS）的測定均采用試劑盒法，試劑盒由南京建成生物工程研究所有限公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用 Excel 2003 和 SAS 6.12 軟件中 ANOVA 程序?qū)υ囼?yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析和鄧肯氏多重比較，數(shù)值表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”。P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

測定試驗(yàn)雞血清中GSH-Px和NOS的活性，結(jié)果見表2。

2.1 日糧不同水平銅和維生素A 及其互作對血清中GSH-Px活性的影響

由表2可知，日糧不同銅水平對前、后期血清中GSH-Px活性影響極顯著（P＜0.01），前期（1～4周齡）Cu 0 mg·kg-1添加組酶活性最高，后期（5～7 周齡）Cu 150 mg·kg-1添加組酶活性最高；維生素A水平對前期血清GSH-Px 活性影響不顯著（P＞0.05），對后期血清GSH-Px 活性影響極顯著（P＜0.01），低維生素A 組酶活性較高；二者的交互作用對前期（1～4 周齡）和后期（5～7 周齡）血清GSH-Px 活性影響均極顯著（P＜0.01）。

2.2 日糧不同水平銅和維生素A 及其互作對血清中NOS活性的影響

抗氧化酶活性測定結(jié)果見表2。由表2 可知，日糧不同銅水平對前期血清NOS 活性影響極顯著（P＜0.01），以Cu 0 mg·kg-1添加組酶活性較高，日糧不同銅水平對后期血清NOS活性影響不顯著（P＞0.05）；維生素A 水平對前期血清NOS 活性影響極顯著（P＜0.01），維生素A 5 000 IU·kg-1添加組酶活性較高，維生素A 水平對后期血清NOS 活性影響不顯著（P＞0.05）；二者的交互作用對前后期血清NOS活性影響顯著，前期P＜0.01，后期P＜0.05。

表2 血清中GSH-Px和NOS活性 U·mL-1

3 討 論

3.1 銅和維生素A及其互作對血清中GSH-Px活性的影響

GSH-Px 是動物體內(nèi)普遍存在的一種重要的抗氧化酶，它催化過氧化氫發(fā)生分解反應(yīng)，并特異性地催化還原型谷胱甘肽為過氧化氫，它可以保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能完整。GSH-Px 的含量和活性影響機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基水平。

本試驗(yàn)結(jié)果表明日糧銅的添加水平對GSH-Px活性影響極顯著，前期Cu 0 mg·kg-1添加組酶活性最高，后期Cu 150 mg·kg-1添加組酶活性最高。這說明高銅會降低GSH-Px活性。馬得瑩等[2]報(bào)道，日糧中過高的銅會降低GSH-Px的活性，導(dǎo)致體內(nèi)自由基的蓄積，引起脂氧化。本試驗(yàn)與此結(jié)果類似。

維生素A的添加水平對前期GSH-Px 活性影響不顯著，但對后期GSH-Px活性影響極顯著，低維生素A添加組酶活性較高。李英哲等[3]報(bào)道，維生素A 輕度或完全缺乏都可導(dǎo)致GSH-Px 活性的降低。本試驗(yàn)證明維生素A 添加量過高也會使GSHPx的活性降低。

銅與維生素A交互作用對GSH-Px 活性影響極顯著，前期Cu（0 mg·kg-1）×維生素A（5 000 IU·kg-1）組GSH-Px 活性最高，為364.25 U·mL-1；后期Cu（150 IU·kg-1）×維生素A（1 500 IU·kg-1）組GSH-Px活性最高，為307.17 U·mL-1。可見銅與維生素A在對GSH-Px活性的影響上存在互補(bǔ)作用，但未見二者互作效應(yīng)對GSH-Px活性影響的報(bào)道，有關(guān)機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

3.2 銅和維生素A 及其互作對血清中NOS 活性的影響

NOS 是一氧化氮（NO）合成的限速酶，其活性與NO 水平直接相關(guān)。NO 在機(jī)體內(nèi)起著毒理和生理的雙重作用，少量的NO 可以發(fā)揮調(diào)節(jié)神經(jīng)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)心血管以及提高機(jī)體免疫力的作用[4]；大量的NO則會抑制線粒體呼吸、導(dǎo)致DNA損傷，并可與超氧陰離子發(fā)生作用，造成自身免疫性疾病、神經(jīng)毒性等[5]。因此正常的NO 水平或NOS 水平是機(jī)體健康的重要保證。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧銅的添加水平對前期血清NOS活性影響極顯著（P＜0.01），以Cu 0 mg·kg-1添加組酶活性較高，說明基礎(chǔ)日糧中不再添加銅也能保持較高的NOS 活性，高銅反而抑制了NOS 的活性。對后期血清NOS 活性影響不顯著（P＞0.05），說明銅對血清NOS 活性的影響和動物的生長發(fā)育階段有關(guān)。目前尚未見到有關(guān)報(bào)道，其機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

日糧維生素A 的添加水平對前期血清NOS 活性影響顯著（P＜0.05），維生素A 5 000 IU·kg-1添加組酶活性較高，說明高水平的維生素A可提高血清NOS活性。日糧維生素A的添加對后期血清NOS活性影響不顯著（P＞0.05），說明維生素A對血清NOS活性的影響也存在階段性，和銅類似，都對幼齡動物有影響。銅與維生素A交互作用對前、后期血清NOS 活性影響顯著，前期P＜0.01，后期P＜0.05。前期Cu（0 mg·kg-1）×維生素A（5 000 IU·kg-1）添加組酶活性最高，后期Cu（225 mg·kg-1）×維生素A（1 500 IU·kg-1）組酶活性最高。由此可見銅與維生素A之間存在一定的互補(bǔ)作用，但未見二者互作對血清NOS活性影響的報(bào)道，有關(guān)機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，得出如下結(jié)果：（1）銅水平對GSH-Px 活性的影響規(guī)律不明顯，前期血清GSH-Px活性以Cu 0 mg·kg-1添加組最高，后期血清GSH-Px 活性以Cu 150 mg·kg-1添加組最高；低銅（0 mg·kg-1、8 mg·kg-1）組NOS 活性較高。（2）血清GSH-Px 活性以維生素 A 1 500 IU·kg-1添加組較高；血清NOS活性以維生素A 5 000 IU·kg-1添加組高。（3）銅和維生素A 交互作用對前期、后期血清GSH-Px和NOS活性影響均顯著。