HLA-DR4、 自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體診斷類風濕關節炎的應用效果評估

汪輝

（湖北省監利市中醫醫院檢驗科，監利 433300）

類風濕性關節炎是一種由于免疫系統攻擊機體正常細胞所引起的自身免疫性疾病， 患者主要表現出關節腫脹和疼痛， 經常伴有關節外器官受累及血清類風濕因子陽性， 可以導致關節畸形及功能喪失，嚴重影響患者日常生活，嚴重者甚至會出現終身殘疾的情況[1-2]。 該病好發于女性，發病率為男性的2～3 倍，可發生于任何年齡，高發年齡為40～60 歲。類風濕關節炎治療的主要目的在于減輕關節炎癥反應，抑制病變發展及不可逆骨質破壞，盡可能保護關節和肌肉的功能， 最終達到病情完全緩解或降低疾病活動度的目標。 治療原則包括患者教育、早期治療、聯合用藥、個體化治療方案以及功能鍛煉。 早期的治療就需要早期發現，患者患病早期比較隱匿， 一旦發病則癥狀很難通過服藥消除，所以需要早期檢查[3]。 通過相關生理指標的檢測有助于及早發現及控制類風濕性關節炎的發生和發展[4]。 目前在臨床上，比較認可的指標是白細胞抗原-DR4 (HLA-DR4)、自身抗體AC II、抗Sa 抗體。 因此，本研究擬對人類白細胞抗原-DR4(HLA-DR4)、 自身抗體AC II 和抗Sa 抗體在類風濕性關節炎診斷中的應用效果進行研究， 以期提高臨床上對類風濕關節炎的早期診斷。 現將研究匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年3 月至2020 年3 月期間在我院風濕科治療的類風濕關節炎100 例患者作為研究對象。其中男38 例，女62 例；年齡24～68 歲，平均年齡（46.35±10.56）歲。同時選取我院收治的未發生類風濕關節炎的患者60 例，其中男22例，女38 例；年齡21～66 歲，平均年齡（45.98±10.21）歲。 納入標準：（1）類風濕關節炎均符合2010 版《類風濕關節炎分類標準》；（2）全部患者均知情同意。排除標準：（1）合并嚴重的臟器疾病；（2）妊娠期女性；（3）合并免疫系統疾病者；（4）入院前1 個月服用激素等藥物。 同期選取健康體檢者60例作為健康對照組，其中男23 例，女37 例；年齡22～70 歲，平均年齡（46.15±9.86）歲。三組患者的一般資料差異無統計學意義（P>0.0.5），具有可比性。本研究經過我院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法 （1）標本的采集：抗體檢測采集空腹靜脈不抗凝血2.0～3.0 mL，1000 rpm 離心15 min 分離血清。 HLA-DR4 檢測采取基因組DNA，按試劑盒說明書提取DNA，取全血200 μL，加入紅細胞裂解液，振蕩混勻，離心，留有細胞核，加有核細胞裂解液，振蕩混勻至透明為止，將其加入至DNA 吸附硅膠柱上，離心，分別加入蛋白清洗液和離子清洗液進行DNA 清洗純化， 最后使用DNA洗脫液洗脫DNA，用紫外分光光度計檢測DNA 的濃度。樣本如果不能及時檢驗，需保持-20℃冷凍待檢，避免反復凍融。 DR 特異性引物序列為，上游：5-ACGTT TCTTGGAGCAGGTTAAACA-3；下游：5-CTGCACT GTGAAGCTCTCAC-3； 將樣本DNA、底物、Taq 酶混勻，在PCR 擴增儀進行擴增，條件為96 ℃孵育150 s，96 ℃15 s - 65 ℃60 s 共10 個循環，96 ℃15 s - 62 ℃50 s - 72 ℃35 s 共22 個循環，4 ℃保存，擴增產物用2%瓊脂糖凝膠進行8 min 電泳，于凝膠成像系統上拍照，記錄結果。 （2）檢測方法： 自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體采用酶聯免疫吸附法試劑盒檢測， 均采用德國歐蒙醫學實驗診斷股份有限公司生產的ELISA 法試劑；HLADR4 采用美國Texas BioGene 公司的MorganTM HLA-DR4 SSP 分型試劑盒，操作均依照說明書嚴格進行。

1.3 統計學分析 采用SPSS 分析軟件， 計數資料組間單因素分析采用卡方檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。 對定量資料作受試者特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)， 計算ROC 曲線下面積，AUC 在0.5～0.7 為診斷價值較差，0.7～0.9 為診斷價值中等，＞0.9 為診斷價值較高。

2 結果

2.1 3 組人群HLA-DR4、 自身抗體ACⅡ和抗Sa抗體陽性率比較 類風濕關節炎患者的HLADR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體陽性率顯著高于非類風濕關節炎患者及健康對照（P＜0.05）。 見表1。

表1 HLA-DR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體陽性率比較[n（%）]

2.2 HLA-DR4、 自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體單項檢測的靈敏度和特異性 3 項指標中，自身抗體ACⅡ的靈敏度（77.5%）和特異性（88.2%）最高，見表2。

表2 HLA-DR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體單項檢測的靈敏度和特異性（%）

2.3 HLA-DR4、 自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體聯合檢測的診斷效率 3 種指標聯合檢測具有的靈敏度、特異性高于單獨檢測，AUC 為0.912（P＜0.05）。見表3。

表3 HLA-DR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體聯合檢測的診斷效率（%）

3 討論

類風濕性關節炎以自身免疫為特征， 會導致患者出現關節滑膜增生從而引起滑膜炎甚至產生殘疾，嚴重影響患者的生活質量[5]。 目前，對于類風濕性關節炎的發病機制尚未有清晰了解， 相關數據統計分析發現，生活習慣、遺傳因素、環境因素和免疫分子調節異常都是導致類風濕性關節炎發病的危險因素[6]。 對于類風濕性關節炎的治療以早發現早控制為基礎， 早期類風濕性關節炎的病情是可逆的， 但進展到中后期則會出現不可逆的機體損傷，最終致殘[7]。 由于缺乏特異性的診斷指標，使得類風濕性關節炎的早期診斷存在較大困難。

HLA-DR4 屬于II 類主要組織相容性復合物，在抗原呈遞過程中發揮作用， 由于其抗原與部分病毒分子的表面結構類似使得免疫系統錯誤識別產生免疫反應[8]。 有研究表明，HLA-DR4 的等位基因對類風濕性關節炎的病情進展具有較高的相關性，可用于病情嚴重程度的預測[9]。

自身抗體二型膠原蛋白（AC II）主要由軟骨細胞產生，因此多存在于骨骼和關節組織中，有研究報道稱，陽性AC II 是導致關節痛病情進一步發展為類風濕性關節炎并影響患者預后的獨立危險因素[9]。 張平武等[10]報道AC II 與患者的風濕因子表達呈現正相關性， 可用于類風濕性關節炎臨床診斷。

Sa 抗原主要存在于人的胚胎組織和關節滑膜中，正常情況下機體并不會產生其對應抗體，但有報道稱在類風濕性關節炎患者血清中普遍存在有抗Sa 的IgG 抗體[11]。 張利軍[12]利用Sa 抗原聯合人類白細胞抗原-DR4 及抗環瓜氨酸肽抗體診斷類風濕性關節炎取得較高的靈敏度和特異性。

本研究證實， 類風濕關節炎患者的HLADR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa 抗體陽性率顯著高于非類風濕關節炎患者及健康對照（P<0.05）,而非類風濕關節炎患者及健康對照間無統計學差異。 提示， 三指標在類風濕關節炎患者中存在顯著高表達，可以用于類風濕關節炎的臨床判斷。 利用三指標單獨對類風濕關節炎進行診斷發現，三指標中，自身抗體ACⅡ的靈敏度和特異性最高分別為77.5%和88.2%。 為進一步提高診斷的靈敏度和特異性， 本研究對三指標的聯合檢測效果進行檢測發現， 任意兩項指標聯合檢測的效果均優于單一指標判斷， 提示三種生物指示物的代謝通路不同,相互之間無顯著相關性。 因此，聯合檢測三種指標具有最高的靈敏度、特異性，具有臨床應用價值。

綜上所述，HLA-DR4、自身抗體ACⅡ和抗Sa抗體診斷類風濕關節炎的診斷準確率較高， 可作為輔助診斷方式。