微柱凝膠法交叉配血技術中供血者意外抗體篩查的臨床應用效果

張璐璐

（沈陽市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院，遼寧 沈陽 110000）

目前，在對輸血患者和手術患者備血效果十分關注的情況下，不規(guī)則抗體引起了廣泛關注。不規(guī)則抗體是不屬于抗-A、抗-B的血型，多歸結于IgG抗體。意外抗體的發(fā)生會造成交叉配血難度增大，同時還可能發(fā)生遲發(fā)性溶血性輸血反應，進一步引發(fā)彌散性血管內凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）[1]、少尿、無尿及腎衰竭等，甚至危害患者的生命安全。據(jù)不完全數(shù)據(jù)證實，我國因血型抗原抗體免疫要素導致的輸血反應比例高達12.00%，其中溶血反應比例在2.50%以上，與國外相比占比更高[2]。目前，微柱凝膠技術（microbubes gel technology，MGT）[3]在國外發(fā)展較為普遍，而在我國的應用仍存在局限性。基于此，本研究以回顧性分析形式，評定微柱凝膠法交叉配血技術中供血者意外抗體篩查的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取醫(yī)院在2017年1月至2020年2月行治療性輸血和手術備血的患者596例。596例患者中男性450例，女性146例，最小年齡19歲，最大年齡68歲。

1.2 方法

1.2.1 微柱凝膠測定 選取專用孵育設備和離心機。試劑選取抗人球蛋白微柱凝膠卡、低離子介質溶液。微柱凝膠卡A孔、B孔和D孔分別加50 μmol/L濃度0.80%的紅細胞懸液，離心300 s，在A孔和B孔共加入100 μmol/L的標準紅細胞，每孔50 μmol/L，再分別加入50 μmol/L血漿，離心300 s。主側加進50 μL濃度0.80%獻血者紅細胞懸液和50 μL受者血漿，次側加進50 μL獻血者血漿和50 μL濃度0.80%受者紅細胞懸液，37 ℃下孵育1 min，專用離心機離心5 min。不規(guī)則抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3孔分別加進50 μL 0.80%篩檢紅細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ再分別加進50 μL患者血漿，37 ℃孵育15 min，專用離心機離心5 min。-表示100.00%紅細胞沉淀在微管底部；+/-表示100.00%紅細胞沉積在微管下端1/3內；+表示80.00%紅細胞沉積在微管下端2/3內；+++表示80.00%紅細胞沉積在微管上端1/3內；++++：在微管頂部聚集所有細胞；d.p表示雙群；Hemo表示溶血。選出的陽性標本采用1～10號譜細胞進行微柱凝膠法處理，并采用抗體特異性檢測。

1.2.2 抗球蛋白檢測 測定出的陽性標本采用抗球蛋白間接法檢測，擇取12支有標記的1-X、陽性對照、陰性對照的試管，在12支試管中分別加進5.00%篩檢紅細胞懸液1滴，加進測定血清2滴，將5.00%Rh（D）陽性紅細胞懸液1滴和IgG抗D血清2滴加進陽性對照管中，5.00%Rh（D）陽性紅細胞懸液1滴和AB血清2滴加進陰性對照管中，將每個管分別放置于37 ℃溫度下，溫育60 min離心處理，記錄溶血和聚集狀態(tài)，并對結果記錄。對紅細胞懸浮，洗滌生理鹽水＞3次，最后1次洗滌后，將生理鹽水去掉，并將生理鹽水全部吸干，管中加進稀釋度抗人球蛋白血清2滴，離心混合處理后，紅細胞懸浮。

1.2.3 抗體篩查與交叉配血 對596例受血人員使用全自動血型鑒定及交叉配血分析儀進行抗體篩查，針對陰性的患者，在審核完成后，錄入輸血管理系統(tǒng)；針對陽性的患者，在審核完成后，使用普細胞進行抗體特異性篩查檢定。抗體檢測呈陰性符合交叉配血規(guī)則的受血者由輸血管理系統(tǒng)根據(jù)所需的血液成分、數(shù)量、血量等，自動顯示捐血者名單，以完成交叉配血程序。同時進行傳統(tǒng)的血清交叉配型試驗，并進行平行操作。在血清學交叉配型時，將主要一面的不相容分開處理，采用光譜細胞鑒定抗體特異性。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不規(guī)則抗體篩查 596例受血人員共測定出抗體陽性240例（40.27%）。

2.2 抗體特異型測定 應用微柱凝膠法和試管間接抗人球法對240例抗體篩選陽性標本鑒定，具體見表1。

表1 240例抗體篩選陽性標本不規(guī)則抗體記錄

3 討論

意外抗體是指血清中除抗-A和抗-B以外的其他血型的抗體，是引起輸血不良反應和影響血液鑒定結果的重要因素。隨著醫(yī)學的發(fā)展，紅細胞血型鑒定水平逐步提高，以溶血性輸血反應為代表的輸血不良反應的發(fā)生率明顯降低，但意外抗體引起的遲發(fā)性溶血反應在臨床輸血反應中的占比越來越大。不規(guī)則抗體引起的溶血性輸血反應可引起發(fā)冷、發(fā)熱，影響治療效果，嚴重者甚至危及生命。因此，抗體篩查是必不可少的。基于此，為了確保臨床輸血的安全性與有效性，應在輸血前對患者進行意外抗體篩查。

不規(guī)則抗體會造成交叉配血的難度提升，因此即便是敏感度高的紅細胞抗體陽性患者，在進行了不符合標準的血液灌注時也會導致免疫溶血性輸血反應發(fā)生，從而危害患者的生命安全[4]。因此，在對患者輸血前均篩選意外抗體，如果抗體篩查中證實為陽性狀態(tài)，則進行抗原陰性處理，同時交叉配血滿足標準的紅細胞輸注，這也是確保科學數(shù)學的前提，特別是對于手術備血患者來說，可提前1 d做抗體篩查測定。對于進行抗體篩查的陽性患者來說，在更為充足的階段行抗體特異性監(jiān)測，并聯(lián)合血液制品，從而保證手術的安全進行[5]。

通過本次數(shù)據(jù)證實，測定出240例抗體篩查陽性患者，稍微高于我國報道的需要輸血住院患者的比例，這一因素的發(fā)生主要和受檢人員的性別、輸血情況、妊娠情況有關，通過本次研究分析存在輸血史/妊娠史患者中，測定出特異性抗體86例（35.83%），未測定出特異性抗體患者104例（43.33%）。因此，對存在妊娠史患者和輸血史患者做抗體篩查具有更大價值。在以上分析中，進行測定的106例抗體中，多數(shù)均屬于Rh系統(tǒng)的特異性抗體。檢查出的抗體多屬于抗-E，這是由于當前Rh（D）已經(jīng)作為輸血、備血患者的最常規(guī)檢查形式，Rh（D）血型同型輸注推廣較為常見，降低了因輸入Rh（D）陽性血液，而出現(xiàn)抗-D機會，以此抗-D抗體檢出率較低。除D以外的Rh血型系統(tǒng)的其他血型抗原，沒能在血型鑒定中測定，同時在人群中的比例相當于50.00%，所以一旦Rh（E）陰性患者因輸血或者妊娠進行Rh（E）抗原刺激就會出現(xiàn)抗-E抗體，以此因免疫要素出現(xiàn)不規(guī)則抗體。從本質上來看，其Rh（E）血型不配合的比例應為Rh（D）2.5倍。Rh系統(tǒng)抗原性的強度中，e最小，而后為C、c、E和D，Rh（E）抗原是除了Rh（D）抗原外抗原性最強的一種抗原，卻未將其作為基礎測定，造成近年有抗Rh（E）抗體導致溶血性輸血反應的數(shù)據(jù)。根據(jù)當前得出的數(shù)據(jù)證實，除ABO系統(tǒng)外的一些血型抗原的關鍵性。所以研究判定如果有條件滿足，則給受血人員作為Rh血型分型，輸入相符合血液，能夠降低不規(guī)則抗體發(fā)生率。

另外MNSs系統(tǒng)抗體比例更高，其次為抗-M抗體，抗-M抗體僅僅能夠在37 ℃環(huán)境下貯存，當抗球蛋白測定為陽性時才具有合理性[6]。在一般情況下，人體內不會出現(xiàn)溶血狀態(tài)，但如果患者處于低溫下則應重點關注。此類抗體會對補體激活，當機體體溫在冷抗體最適合反應溫度范圍區(qū)域內時，也會出現(xiàn)溶血反應[7]，所以應選取抗-M相符合的血液，以降低意外情況發(fā)生[8-10]。通過本文數(shù)據(jù)分析，596例受血人員共測定出抗體陽性40.27%。選取血型系統(tǒng)Rh-hr、MNSs、Kidd、Duffy、Kell、Lewis，其中記錄比例為3.33%、14.17%、0.83%、1.67%、0.83%、14.17%、1.67%、0.83%、0.83%、0.83%、2.50%、0.83%、1.67%。測定出特異性抗體44.17%，未測定出抗體共55.83%，總計100.00%。

綜合以上結論，對輸血前患者予以不規(guī)則抗體測定十分關鍵，能夠確保臨床輸血的安全性，降低溶血性輸血。同時，微柱凝膠法測定抗體篩查能夠克服常規(guī)的抗人球蛋白測定的復雜性，不需要進行洗滌，簡單方便。