飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚生長及體色的影響

姜巨峰，劉克明，李春艷，劉肖蓮，周 勇，韓現芹，史東杰，馬 林，宋紅梅，趙立明

( 1.天津市水產研究所，天津市觀賞魚技術工程中心，天津 300221； 2.北京市水產科學研究所暨國家淡水漁業工程技術研究中心，北京 100068； 3.中國水產科學研究院 珠江水產研究所，農業農村部休閑漁業重點實驗室，廣東 廣州 510380； 4.天津市靜海區畜牧水產業發展服務中心，天津 301600 )

隨著我國人民生活水平的日益提高，觀賞魚已逐漸成為消費新時尚。色彩是觀賞魚的主要觀賞價值，影響魚類體色的因素有魚類的遺傳因素、神經內分泌因素、年齡、性別、外部環境和所攝食餌料等[1]。性別對觀賞魚類體色的影響較為普遍，大部分魚類雄性體色較雌魚鮮艷。

馬拉維湖慈鯛(簡稱“馬鯛”)是目前觀賞魚市場上較為暢銷的品種，多是雌雄二態，雄性的成魚擁有艷麗極具金屬感的體色，觀賞價值和經濟價值大，而雌魚和幼魚大多呈現單調的灰色，觀賞價值和經濟價值小。阿里(弗氏鬼麗魚)(Sciaenochromisfryeri)是馬鯛中最受歡迎的品種，屬硬骨魚綱、鱸形目、慈鯛科、鬼麗魚屬。其夢幻般的藍色為阿里贏得了“藍色閃電”的美譽，其特別的金屬藍體色吸引了一大批阿里愛好者。然而，在實際養殖生產中，阿里繁殖的后代雌雄比例約為1∶1，其中有一半的阿里雌魚需要人工增色成金屬藍色再出售，中國目前每年需要人工增色的阿里魚逾200萬尾。

目前國內外學者對阿里的研究較少，僅見其營養、麻醉劑、繁養技術等方面的少量報道[2-5]，而對其增色劑研制、增色策略尚未見相關報道。甲基睪酮(MT)在促進魚類增色研究中的應用較為廣泛，目前已見在黃姑魚(Nibeaalbiflora)[6]、斑馬魚(Daniorerio)[7]、草魚(Ctenopharyngodonidella)[8]、劍尾魚(Xiphophorushelleri)[9]、珍珠瑪麗魚(Mollienisiavelifera)[10]、紅劍尾魚(X.helleri)[10]、中華鳑鲏(Rhodeussinensis)[11]、馬拉瓜麗體魚(Cichlasomamanaguense)[12]、鯉(Cyprinuscarpio)[13]等20多種魚增色方面進行了研究和應用，促進了水產產業的良性化發展。筆者以阿里雌魚為研究對象，通過研究飼料中不同甲基睪酮劑量對阿里雌魚生長及增色效果的影響，旨在為阿里人工養殖及售后技術服務提供數據支撐。

1 材料與方法

1.1 阿里增色飼料

試驗飼料以阿里養殖普通飼料為基礎飼料(表1)，在增色預試驗的基礎上，分別配制含有4、8、12、16 mg/kg 4個甲基睪酮(西亞試劑，分析純，99%)含量梯度(MT4、MT8、MT12、MT16組)的試驗飼料，基礎飼料為對照組飼料，所有飼料烘干后，裝袋置于4 ℃冰箱備用。基礎飼料由魚粉32%、豆粕18%、花生餅18%、面粉19%、魚油8%、磷酸二氫鈣1%、硫酸銅0.5%、硫酸錳0.5%、維生素混合物1%組成。

表1 基礎飼料的營養分析

1.2 增色試驗

增色試驗在天津市觀賞魚技術工程中心靜海實驗基地水族實驗室進行。以平均體質量(5.78±1.05) g的阿里雌魚為試驗對象，試驗分為5組，每組3個平行，每個平行30尾試驗魚。隨機選擇規格基本一致、形體健康、游動迅速的110日齡試驗魚置于光照周期為14L∶8D裝有30 W LED燈的75 cm×60 cm×28 cm水族缸中，并在每個缸體上標注試驗飼料的標簽。水溫22～24 ℃，pH 7.8～8.0，每日9:00和16:00定時飽食投喂，持續養殖8周。由于甲基睪酮不溶于水，其可以作為飼料添加劑應用于觀賞魚增色。在投喂試驗魚時，堅持少量多次的原則，魚的攝食速度很快，基本上在3 s內飼料就被攝食完畢，因此飼料中的營養物質不會溶失到養殖用水中造成水體環境的污染。當魚吃飽后，及時將漂在水面的剩余飼料撈出回收。

1.3 停藥試驗

在增色試驗結束時，改投普通飼料，每日正常投喂，觀察試驗魚的體色變化情況，持續養殖4周。

1.4 樣品測定與數據分析

在試驗第0、2、4、6、8、10、12周時，分別于每缸中各取10尾魚，用0.1 mL/L質量濃度的丁香油將其麻醉，用濾紙吸干體表水分后，每尾魚均按頭部朝左的順序放置，快速用色度色差儀(Konica Minolta CM-700d，日本)測定其體表色度色差值，每尾魚測定腹部前部、中部和后部3個部分，取平均值，并與標準阿里真雄魚的體表色度值(取13尾阿里真雄魚上市魚進行測定，標準魚色度值為:L,35.62±3.04；a,0.06±1.79；b,-18.99±2.79)進行比較，測出總色差值(△Eab*)和黃藍度值(b*)；同時測其全長、體長、體質量，測畢，快速將魚放入充氧的干凈水桶中進行蘇醒，恢復正常后將魚移至原養殖缸中養殖。阿里雌魚特定生長率(RSG，%/d)[14]按下式計算：

RSG=(lnm2-lnm1)/t×100%

式中，m1為初始體質量(g)，m2為終末體質量(g)，t為試驗時間(d)。

1.5 試驗用水的處理

試驗結束后，將養殖用水排入阿里專用增色池中，定期檢測池水中的甲基睪酮含量，如甲基睪酮含量超標，可采用Fenton氧化法或睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonastestosteroni)基因工程菌對養殖用水進行處理，待合格后再進行養殖利用。

1.6 數據分析

試驗結果用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析，差異顯著時進行Duncan多重比較。

2 結 果

2.1 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚生長及成活率的影響

不同質量濃度的甲基睪酮對阿里雌魚的成活率沒有影響，均為100%(表2)。試驗結束后，所有甲基睪酮組的阿里體質量均顯著高于對照組(P<0.05)，12 mg/kg的甲基睪酮組的體質量最高，平均體質量為8.32 g，顯著高于16 mg/kg處理組和對照組(P<0.05)，但與4、8 mg/kg處理組之間的體質量差異不顯著(P>0.05)。4、12 mg/kg處理組特定生長率差異不顯著(P>0.05)，均顯著高于對照組(P<0.05)，但與其他處理組差異不顯著(P>0.05)。

表2 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚生長及成活率的影響

2.2 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚體色的影響

2.2.1 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚色差值(△Eab*)的影響

色差值代表測定魚體色色度值與標準體色的差距，其值呈現越小說明其測定色度值與標準體色值的差異越小。由表3和圖1可見，甲基睪酮對阿里雌魚具有增色效應，其與標準魚的色差值隨著增色時間的延長而逐漸變小。在增色第2、4、6、8周時，12、16 mg/kg甲基睪酮組的色差值差異不顯著(P>0.05),但均顯著低于其他各組(P<0.05)；4、8 mg/kg甲基睪酮組的色差值差異不顯著(P>0.05),但均顯著低于對照組(P<0.05)。

表3 飼料中甲基睪酮含量對阿里增色效果(△Eab*)

圖1 飼料中甲基睪酮含量和添加時間對阿里雌魚體色的影響

8周增色時間結束后，改投對照組飼料，在第10周時，各處理組色差值較第8周時色差值均有所下降。8、12、16 mg/kg甲基睪酮組色差值差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于4 mg/kg甲基睪酮組和對照組的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睪酮組色差值顯著低于對照組(P<0.05)。

第12周時，除對照組，其他處理組的色差值均略高于第10周時各處理組的色差值。8、12、16 mg/kg甲基睪酮組色差值差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于4 mg/kg甲基睪酮組和對照組的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睪酮組色差值顯著低于對照組(P<0.05)。

2.2.2 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚黃藍色度值(b*)的影響

b*表示黃藍度值，+表示偏黃，-表示偏藍。由表4和圖1可見，阿里雌魚體表b*隨著增色時間的延長，呈逐漸減小趨勢。在增色8周時，12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05);4 mg/kg甲基睪酮組體表b*顯著高于8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05)，但顯著低于對照組(P<0.05)。

表4 飼料中甲基睪酮含量對阿里增色效果(b*)

在增色試驗結束后，所有處理組換投對照組飼料后，試驗第10周時，各處理組阿里雌魚體表b*較第8周時均有所下降，阿里雌魚體表藍色呈現更深趨勢；12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于0、4、8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05);4 mg/kg甲基睪酮組體表b*顯著高于8 mg/kg組(P<0.05)，但顯著低于對照組(P<0.05)。

第12周時，12、16 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于0、4、8 mg/kg甲基睪酮組(P<0.05); 4、8 mg/kg甲基睪酮組體表b*差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于對照組(P<0.05)。與第10周相比，第12周各處理組除0、4 mg/kg甲基睪酮組體表b*稍低外，其他各組體表b*均比第10周時稍高。

3 討 論

3.1 飼料中甲基睪酮含量對阿里雌魚生長及成活率的影響

甲基睪酮對養殖動物的生長作用具有劑量效應機制，低劑量能明顯促進蛋白質合成，減少氨基酸分解，使肌肉增長、體質量增加，高劑量可抑制養殖動物的生長。本試驗中，4、8、12、16 mg/kg甲基睪酮組均對阿里雌魚具有促生長作用，且12 mg/kg組的體質量顯著高于16 mg/kg組(P<0.05)，但與4 mg/kg和8 mg/kg組體質量差異不顯著(P>0.05)。這與用甲基睪酮處理櫻桃鲃(Barbustitteya)雌魚[1]、馬拉瓜麗體魚[12]、鯉[13]、金魚(Carassiusauratus)[13]、吉富羅非魚(Oreochromisniloticus)[15]能夠促使其生長速度加快的結論相一致。本試驗結果亦顯示，高劑量的甲基睪酮有抑制阿里雌魚生長的趨勢，這與高濃度激素處理會抑制舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)[16]、尼羅羅非魚(O.niloticus)[17]生長的結論相類似，但與雄性激素對庸鰈 (Hippoglossushippoglossus)[18]生長速度無明顯差別及雄性激素對黃姑魚[6]、大口黑鱸(Micropterussalmoides)[19]、稀有鯽(Gobiocyprisrarus)[20]、食蚊魚(Gambusiaaffinis)[21]的生長有顯著抑制作用的研究結果不同。這可能是由魚類種類的特異性所導致，也可能是因為魚類不同生長階段對甲基睪酮的耐受性和吸收轉化利用能力不同。另外，雄性激素投喂時間也是影響魚類生長的關鍵因素，如甲基睪酮投喂體長15.1 mm的大口黑鱸[19]，在前40 d內50 mg/kg組和100 mg/kg組的體長和體質量差異不顯著(P>0.05)，而到60 d時，100 mg/kg組的體長和體質量顯著低于50 mg/kg組(P<0.05)。本試驗中，在投喂甲基睪酮飼料12周后，不同試驗組的阿里雌魚生長性能不一致，表明在實際應用中，激素的效應時間也是重要的考慮因素。

當激素含量在適宜范圍內時對魚類成活率無顯著影響，但在超過某個閾值后，魚類的成活率將會顯著降低。投喂17α-甲基睪酮對白斑狗魚(Esoxlucius)[22]有顯著致死效應；用辛基酚處理日本青鏘(Oryziaslatipes)[23]發現，當處理質量濃度為2 μg/L時，死亡率升高20%～30%。本試驗中，各處理組對阿里雌魚的成活率無影響，這與櫻桃鲃[1]、馬拉瓜麗體魚[12]的研究結果相同，說明甲基睪酮含量在阿里雌魚耐受范圍之內。

3.2 飼料中甲基睪酮含量對馬雕阿里雌魚體色的影響

一般情況下，雄魚較雌魚艷麗，因此也更具觀賞價值。在飼料中添加一定量的甲基睪酮，可促使雌魚呈現出雄魚個體的副性征，其體色變得更加艷麗。研究顯示，飼料中添加10 mg/kg的甲基睪酮能使3月齡的紅劍尾魚[24]體色加深，但對5月齡的珍珠瑪麗魚[24]的體色無影響，這可能是由于5月齡的珍珠瑪麗魚性腺分化程度已較高或者投喂的甲基睪酮的劑量太小、時間太短所導致的；飼料里添加30 mg/kg以上的17α-甲基睪酮，50日齡的中華鳑鲏[11]體色明顯開始增強，效應時間需28 d；17α-甲基睪酮處理后的紅劍尾魚[10,24]、瑪麗魚 (M.latipinna)[25]以及紅色斑馬魚[26]，體色更鮮艷。本試驗結果表明，甲基睪酮可使阿里雌魚體色呈現雄魚金屬藍的體色。12 mg/kg與16 mg/kg的甲基睪酮增色效果差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)。結合養殖成本和增色時間等因素綜合考慮，認為12 mg/kg甲基睪酮是促使阿里雌魚體色增色的最佳添加量。

表5 甲基睪酮對觀賞魚增色情況

在8周增色試驗結束改投普通飼料，試驗第10周時，各試驗組的阿里雌魚體表b*比第8周時的偏小，體表呈“金屬藍”體色加深；在第12周時，各試驗組魚體表b*除4 mg/kg甲基睪酮組外，其他各組魚體表b*均較第10周時的偏大；這說明前8周在體內富集的甲基睪酮后期通過代謝得以全部釋放出來，所以在增色飼料開始停止投喂的一段時間里，阿里呈現出更深的金屬藍體色，到后期其顏色有逐漸變淺的趨勢，但仍維持在體色較艷的程度，表明外源甲基睪酮對阿里雌魚具有適應性反應。該試驗中，阿里雌魚在停止投喂增色飼料后4周仍然呈現金屬藍體色，可能是由于阿里雌魚經過8周增色后已雄性化或者體內吸收的增色劑尚未代謝完全，所以呈現出較為穩定的金屬藍體色，具體原因還需進一步研究確定。

3.3 增色魚與阿里真雄魚顏色差異的比較分析

本試驗結果表明，投喂甲基睪酮后的阿里雌魚，其體色能夠呈現出雄魚金屬藍的體色。但與真雄魚的色差值(△Eab*)和黃藍度值(b*)相比較，其體色色度還有一定的差距。這可能與種類吸收利用甲基睪酮的特異性有關，也可能與具體養殖溫度、光照有關，具體原因還需要進一步研究。

3.4 飼料中添加甲基睪酮對阿里雌魚健康及養殖環境的影響分析

飼料中添加甲基睪酮能夠促進阿里雌魚生長且呈現出雄魚金屬藍體色。已有多項研究證實，甲基睪酮在羅非魚、虹鱒(Oncorhynchusmykiss)魚苗雄性化應用方面能夠消除完畢[27-29]，不會有殘留。魚類體內吸收的甲基睪酮可通過代謝而逐漸消除[30]，這可以從增色后的阿里雌魚體色后期有變淺的趨勢得到印證，阿里雌魚體內的甲基睪酮到底多長時間能夠消除完畢還有待進一步研究。

另外，應用甲基睪酮對觀賞魚增色時，可以在功能飼料表面包裹一層薄膜，以防止功能性添加劑在魚類攝食的過程中溶失至水中，造成養殖環境的污染；同時堅持少量多次的投飼習慣，確保所投喂的飼料均能夠在短時間內被魚類攝食利用，避免對環境的污染。

4 結 論

飼料中添加甲基睪酮不僅可以促使阿里雌魚生長速度加快，而且可以使其呈現雄魚金屬藍體色，適宜添加量為12 mg/kg，增色8周后的阿里體色能夠穩定4周以上。