HIV抗體檢測結果不確定病例的核酸定量檢測分析

熊德琴，陳絳青，李美琦，譚佳俊，楊 婷

(南昌市第九醫院檢驗科，南昌 330006)

艾滋病是一種危害性極高的傳染病，由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染所致[1]。HIV感染機體后，會特異性攻擊CD4+T細胞，導致細胞免疫功能嚴重受損，摧毀患者免疫系統，嚴重威脅患者生命及社會安全[2]。由于其極快的蔓延速度和極高的致死率，艾滋病的早期診斷對疾病診治及防止社會流行有重要意義。目前，HIV抗體檢測是判斷病例是否感染HIV的主要手段,采取先初篩再精確檢測的策略。HIV抗體檢測是HIV/AIDS診斷的“金標準”，蛋白印跡試驗(WB)也是國內實驗室主要的HIV確證方法。根據確證試驗結果，檢測報告可分為：HIV-1抗體陽性、HIV-1抗體陰性和HIV-1抗體不確定[3]。相關調查[4]顯示，一般人群的檢測結果中HIV抗體不確定占比高達15%～20%，且近來呈逐年增長趨勢。人體感染艾滋病病毒后，體內出現的相關生物標志物按出現時間順序依次為核酸、P24抗原、IgM抗體和IgG抗體。因此，除經典穩定的抗體檢測外，聯合應用其他標志物檢測手段(如核酸、P24抗原)將使HIV診斷更加準確可靠。本文通過對142例HIV抗體不確定患者進行核酸檢測分析和隨訪調查，探討針對該類人群的診斷方案，為艾滋病防治提供依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集南昌市第九醫院2015—2020年門診及住院收治的142例經疾控部門初次確證試驗為HIV抗體不確定且未失訪患者，其中男114例(80.25%)，女28例(19.72%)；年齡≤18歲6例(4.23%)，>18～60歲92例(64.79%)，>60歲44例(30.98%)。對142例患者進行HIV抗原、核酸定性定量等檢測，以隨訪結果為判斷標準，分析不同檢測方法結果和抗體轉歸的相關性。

納入標準：經疾控部門初次確證試驗為HIV抗體不確定且未失訪的患者；排除標準：患有其他感染性疾病(如肺結核)或嚴重疾病(如惡性腫瘤)者。

1.2 檢測方法

采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、WB及病毒載量檢測，均嚴格按照試劑盒說明書操作[5]。WB實驗使用人類免疫缺陷病毒(HIV1/2型)抗體檢測試劑盒(安倍生物醫學亞太私人有限公司)；核酸定量實驗使用人類免疫缺陷病毒(I型)核酸定量檢測試劑盒[羅氏診斷產品(上海)有限公司]；ELISA實驗使用人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(北京萬泰生物藥業股份有限公司)。主要實驗儀器有：全自動免疫印跡儀ProfiBlot 48(瑞士Tecan公司)；全自動病毒載量檢測系統CobasAmpliprep+CobasTapman(羅氏)；全自動酶標儀DNM-9602G(北京普朗新技術有限公司)。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行數據處理，計數資料以百分比(%)表示，比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HIV抗體不確定標本WB帶型特征及轉歸情況

對142例HIV抗體不確定者進行的WB檢測實驗中共出現4種免疫印跡帶型：gp160帶型出現頻次最高(30.28%)；其次是p24帶型，為21.83%；p120帶型和p41帶型出現頻次較低。1個月后隨訪，HIV抗體檢測發現142例中有85例陽轉，陽轉率為59.86%。見表1。

表1 WB帶型特征構成比及轉歸情況

2.2 HIV抗體不確定標本包膜蛋白條帶出現情況

85例陽轉者中gp160出現比率為97.64%(83/85)，p24出現比率為49.41%(42/85)；57例未陽轉樣本中gp160出現比率為2.36%(2/85)，p24出現比率為50.59%(43/85)。HIV抗體不確定中陽轉者出現gp160條帶的比率顯著高于未陽轉者(χ2=49.41，P<0.01);二者p24條帶出現比率比較，差異無統計學意義(χ2=2.05，P>0.05)。

2.3 HIV抗體不確定標本的核酸檢測結果

142例樣本中138例核酸擴增成功，其中83例陽性，陽性比60.14%(83/138)，55例陰性，陰性比39.86%(55/138)。核酸定量檢測陽性者均為隨訪HIV抗體陽轉病例，核酸檢測陰性者中則包含了1例隨訪HIV抗體陽轉病例及54例隨訪HIV抗體未陽轉病例。陽性符合率100%(83/83)，陰性符合率98.18%(54/55)，總符合率99.28%(137/138)。Kappa值為0.98，一致性強。

3 討論

人體感染HIV病毒后，需經過一定時間的窗口期，才能夠檢測到體內HIV抗體[6]。感染早期時，抗體滴度不高，與抗原的親和力差，會導致漏檢或抗體檢測出現不確定結果的情況出現[7]。HIV-1抗體檢測結果不確定會給臨床醫生和患者自身帶來極大的困擾。處于HIV感染窗口期的患者具有傳染性，卻無臨床癥狀，不易及時做出診斷[8]，部分窗口期感染者很可能無法及時獲得抗病毒治療并增加傳播疾病的風險。醫療機構應盡早檢測出患者是否感染HIV，這對于患者的治療與防止醫生執業暴露均有重大意義。

本研究中142例樣本，有85例隨訪陽轉，占59.86%。陽轉者gp160出現比率為97.64%，p24出現率為49.41%；未陽轉者gp160出現比率為2.36%，p24出現比率為50.59%。彭瑾瑜等[9]的研究發現抗體不確定樣本中陰性受檢者帶型分布p24或gp160為主，一般不超過2條條帶；早期感染者帶型分布以p24和p24+gp160為主，其中p24出現比例為100%；晚期感染者條帶數目較多，顯色較弱且組合更多元化，主要為p24、p31、gp120和gp160。這與本研究結果存在差異，原因有待進一步研究。本研究中初次樣本核酸定量檢測陽性與隨訪HIV抗體陽轉的符合率為97.64%，提示核酸檢測補充試驗可為抗體不確定樣本可以提供進一步鑒別的依據，核酸定量檢測可以快速有效地對疑難樣本進行鑒別診斷。這與張艷等[10-12]的研究結論是一致的。但是在實際操作中，核酸檢測方法不能完全代替ELISA，在有條件的情況下，提倡以核酸檢測與第4代ELISA試劑相結合的方法對抗體不確定樣本進行再檢測[13]。