軟棗獼猴桃的莖段芽增殖培養基的篩選

楊小艷，韓世明，郭雪艷，吳 梅，方玉梅，王月霞

（六盤水市師范學院生物科學與技術學院，貴州 六盤水 553004）

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta）屬于獼猴桃科（Actirlidia‐ceae）獼猴桃屬（Actinidia）多年生藤本落葉植物，又名軟棗子，猴桃梨，藤瓜等。世界上獼猴桃屬植物有54 個種，21 個變種，我國就有52 個種。獼猴桃在中國分布廣泛，其中軟棗獼猴桃是獼猴桃屬中在中國分布最廣泛的野生果樹之一，主要分布在中國的華北、東北、西北及長江流域，尤其以東三省的黑龍江、吉林和遼寧等存量資源最為豐富。中國是世界上軟棗獼猴桃的主產區，世界上軟棗獼猴桃主要栽培品種有74個，有11 個分布在中國[1-2]。軟棗獼猴桃的枝條多攀爬在樹枝或者樹干上，葉柄呈紅色，葉為互生，葉片、葉柄和莖部都沒有毛，軟棗獼猴桃的花為白色，且花序較小，有淡淡的香氣，果實呈綠色或黃綠色，果實為漿果，果實的果皮光滑無斑點，果實柔軟多汁、味道鮮美可口，果實像蘋果，雖然果實很小但營養豐富，富含維生素C，具有較的高經濟價值、營養價值，良好的醫療保健效果[3]受到廣大人民群眾的青睞。

1 軟棗獼猴桃的應用領域及研究概況

軟棗獼猴桃的栽種主要分布在中國西北、長江流域、東北和華北等地區，在世界上軟棗獼猴桃的主要栽培中，軟棗獼猴桃的品種共有74 個，中國先后出現了“魅綠”“豐綠”[4-5]等。2015 年趙芮、趙春莉、安佰義等科學家研究發現軟棗獼猴桃芽增殖的最佳培養基為：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，軟棗獼猴桃果實成熟收獲后貯藏保鮮和生理生化方面的研究較多，加大軟棗獼猴桃種質資源系統評價，為軟棗獼猴桃種質資源系統評價體系得構成，改善軟棗獼猴桃栽培管理方面提供科學的依據。為軟棗獼猴桃育種提供優質苗木和有抗性的砧木，可培育出高產、優質的獼猴桃新品種[6-7]。軟棗獼猴有豐富的維生素、多糖類、黃酮類、酚類、萜類等多種活性物質，維生素C 含量豐富，軟棗獼猴桃中多糖對預防心血管疾病有特殊的治療效果，果實中的氨基酸不僅具降血脂和血糖的作用，還可提高人體免疫力[8-12]。還可加工成各類果干、零食。經過試驗研究得到軟棗獼猴桃飲料的最佳配方。謝宗萬的《全國中草藥匯編》中提到根有活血消腫，清熱解毒、祛風利濕等作用，陳藏器的《本草拾遺》果實可以解熱去煩、調中理氣、生津潤燥。因此被稱為藥用及食療價值均高于常規水果，還有“人間仙果”的美稱[10-14]。

本試驗采用六盤水市水城區米籮鎮的一年生的軟棗獼猴桃帶腋芽莖段作為試驗材料，以MS 培養基作為基礎培養基，在培養基中加入不同濃度的激素6-BA 和IBA 組合，通過植物組織培養可對其進行快速繁殖，在組培室里培養不受生長季節限制，能夠大批量繁育種苗，保證了所育苗木的純度，具有質量高、成本低、占地小等優勢。在組織培養脫分化的過程中選擇軟棗獼猴桃病毒害少的部位進行脫分化，可以獲得無病毒植株，用于雜交育種，得到的軟棗獼猴桃植株產出的水果口感更佳，經濟價值更高。

2 材料與方法

采用一年生軟棗獼猴桃帶腋芽的嫩莖段作為接種材料，早春季節從母株上采取側枝，在晴天的中午剪20～30 cm長的枝條，要剪生長強壯、無蟲害、無病菌的幼嫩枝條。

3 軟棗獼猴桃外植體的消毒

將軟棗獼猴桃外植體用水清洗凈，剪去葉子和老的莖段。用剪刀將外植體剪切為長度1.5～2.5 cm 的段，用洗潔精浸泡30 min，之后用細流水沖洗2 h。把無菌水、裝著濾紙的培養皿、接種工具、升汞、酒精燈、打火機、燒杯、培養基等放入超凈工作臺，殺菌30 min，殺菌時不開吹風，用75%酒精棉擦洗戴著無菌手套的雙手和盛有外植體的容器壁進行消毒，將容器放進超凈工作臺，用75%的乙醇浸泡30 s，然后用無菌水清洗4 次后，用0.15%的氯化汞溶液浸泡7 min。再用無菌水清洗6～7 次，最后用鑷子把接種的外植體放在放有無菌紙的培養皿中，用無菌紙把外植體上的水分吸干，消毒完成。將消毒的外植體每瓶接種2～4 個，接種完成之后編號、記錄等，長出芽后，用幼芽轉接。

4 培養基中不同濃度的激素組合對芽增殖的影響試驗

4.1 誘導芽增殖的組織培養基

試驗參考趙芮、趙春莉、安佰義等軟棗獼猴桃離體快速繁殖技術[6]和鄧踐[5]的試驗研究，并結合本實驗室研究的實際情況進行設置。誘導芽增殖的組織培養基見表1。

表1中所有的培養基pH 為5.8；所用的培養基為MS培養基，MS 培養基加入的蔗糖的含量為30 g/L，R1 到R25 號培養基中加入瓊脂7.2 g/L。用蒸餾水配制，貼好標簽。配置好的培養基放在121℃下高壓蒸汽滅菌鍋內滅菌15 min，后移至超凈工作臺待殺菌冷卻，將消毒處理好的腋芽嫩莖切成大小為1.5～2.5 cm，分別轉接到上述培養基中，每種培養基5瓶，每瓶接種2～4個外植體。以MS基本培養基作為對照，接種完成后放入培養架培養，培養條件為3 000 lx 光照強度，溫度25℃、光周期14 h/10 h（光照/黑暗），定期記錄數據，篩選出最佳培養基。

表1 誘導芽增殖的組織培養基Tab.1 The tissue culture medium for inducing bud proliferation

4.2 試驗數據處理及相關數據計算公式

5 結果

根據添加的6-BA 和IBA 的含量不同，對軟棗獼猴桃帶腋芽嫩莖段組織培養誘導芽增殖的生長情況進行觀察并記錄數據，計算增殖系數，見表2。

根據表2 的數據可以看出R16、R18、R19、R20 號培養基的芽增殖系數高，且呈現先上升后下降的趨勢，其中R19 號培養基的芽長勢好，芽多，芽較高，葉片正常，芽增殖系數最高為3.95。結合表2 的數據分析篩選出最適合軟棗獼猴桃莖段芽增殖培養基為R19 號培養基，也是最適合的培養基配方。

表2 不同質量濃度的6-BA 和IBA 對叢生芽增殖的形成情況Tab.2 The effects of different mass concentrations of 6-BA and IBA on the formation of cluster bud proliferation

6 討論

應用傳統的繁殖培育技術培育軟棗獼猴桃，難以在短時間內培育出經濟效益高的植株，且受到溫度影響。此外，傳統的繁殖培育技術培育軟棗獼猴桃常會攜帶的一些病菌，會給獼猴桃產業帶來一些災害。采用外植體培養技術獲得的組培苗可以保持母本的優良性狀，栽培出的水果口感更佳，經濟價值更高。

本實驗室采用組織培養技術，用不同濃度的誘導芽增殖培養基，均得到了預期的結果，采用組培技術得到的軟棗獼猴桃經濟價值更高。在組培室里培養不受生長季節限制，能大批量繁育種苗，保證了所育苗木的純度，具質量高、成本低、占地小等優勢。本試驗的成果，可為軟棗獼猴桃種質資源系統評價體系的構成，改善軟棗獼猴桃栽培管理方面提供科學依據。